肿瘤相关巨噬细胞、胶质瘤干细胞和PF-L1在不同病理分级脑胶质瘤组织中的表达及相关性研究

目的 探讨人脑胶质瘤组织内的胶质瘤干细胞(GSCs)标志物CDl33、肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)标志物CD68和PD-L1在不同病理分级脑胶质瘤组织中表达及其相关性。方法 选取脑胶质瘤患者68例,根据病理分级不同,分为低级别组34例(WHOⅢ级、Ⅳ级),高级别组34例(WHOⅠ级、Ⅱ级),取两组标本进行石蜡包埋切片,应用免疫荧光法检测不同病理分级脑胶质瘤组织内CD68和PD-L1蛋白的含量;采用实时荧光定量PCR技术检测两组脑胶质瘤组织内的CDl33、PD-L1和CD68 mRNA的表达,并分析其与临床病理级别的相关性。结果 在高级别组脑胶质瘤组织中CD133、CD68和PD-L1表达量较低级别组升高,差异显著(P<0.001)。在脑胶质瘤组织内CD133、PD-L1和CD68的表达与不同病理分级呈正相关(P<0.001)。结论 PD-L1在胶质瘤组织内主要通过肿瘤微环境中的TAMs进行表达;脑胶质瘤的恶性程度与CDl33、PD-L1和CD68表达密切相关。     

CD133、CD68和PD-L1在不同病理级别脑胶质瘤组织中的表达及相关性

目的 探讨人脑胶质瘤组织中胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSCs）标志物CD133、肿瘤相关巨噬细胞（tumor- associated macrophages,TAMs）标志物CD68和负性共刺激分子PD-L1在不同病理级别人脑胶质瘤组织中的表达及其相关性。方法 采用免疫荧光双染法检测不同病理级别脑胶质瘤组织中CD68和PD-L1蛋白的共表达情况;采用实时荧光定量PCR（quantitative real- time fluorescent PCR,qRT-PCR）技术检测30例低级别脑胶质瘤（Ⅰ级和Ⅱ级）组织和30例高级别脑胶质瘤（Ⅲ级和Ⅳ级）组织中CD133、CD68和PD-L1 mRNA的表达,并分析其与临床病理级别之间的相关性。结果 脑胶质瘤组织中PD-L1和CD68共表达在肿瘤相关巨噬细胞上,即大部分PD-L1阳性细胞为肿瘤相关巨噬细胞,高级别组CD68和PD-L1蛋白的共表达明显高于低级别组。在脑胶质瘤组织中,CD133、CD68和PD-L1 mRNA的表达水平均与病理分级呈正相关（r=0.647,P<0.001;r=0.499,P<0.001;r=0.445,P=0.001）;三者在高级别脑胶质瘤组织中的表达均高于低级别脑胶质瘤组织（P＜0.05）; 脑胶质瘤组织中CD133与CD68 mRNA的表达呈正相关（r=0.525,P<0.001）,低级别组和高级别组中两者表达亦呈正相关（r=0.518,P=0.005;r=0.500,P=0.007）;脑胶质瘤组织中CD133与PD-L1 mRNA表达呈正相关（r=0.431,P<0.001）,低级别组和高级别组两者表达亦呈正相关（r=0.398,P=0.036;r=0.417,P=0.027）。结论 脑胶质瘤组织中PD-L1主要由肿瘤微环境中的TAMs表达;CD133、CD68和PD-L1表达与脑胶质瘤的恶性程度密切相关。     

脑胶质瘤中CD133、神经巢蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨CD133神经巢蛋白(nestin)在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测65例脑胶质瘤组织标本、19例正常脑组织标本中CD133、nestin的表达.结果 65例脑胶质瘤组织和19例正常脑组织标本中CD133阳性细胞率分别为18.46%和0(P＜0.01),nestin阳性细胞率分别为23.79%、5.16%(P＜0.01).对65例脑胶质瘤组织中nestin和CD133阳性细胞率分别进行多个病理级别之间的均数比较:Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级间、Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级、Ⅲ级和Ⅳ级间差异均有统计学意义(P均＜0.01).nestin阳性细胞率和CD133阳性细胞率呈正相关关系(r=0.408,P＜0.05).结论 检测脑胶质瘤组织中CD133、nestin的表达有助于胶质瘤的诊断及恶性程度判断.     

人脑胶质瘤组织CD133阳性细胞和Nestin阳性细胞增殖指数的初步研究

背景与目的：脑胶质瘤干细胞的生物学特性还认识不多,但被认为是难治和复发的根源,本研究分析脑胶质瘤组织中CD133阳性细胞及Nestin阳性细胞的增殖指数。方法：免疫组织化学双染色方法检测CD133与Ki-67,Nestin与Ki-67在不同级别脑胶质瘤中共表达情况,并对它们之间的关系进行分析。结果：CD133阳性细胞的增殖指数在低级别脑胶质瘤（WHOⅠ、Ⅱ级）中[（34.38±35.50）]%低于高级别脑胶质瘤（WHOⅢ、Ⅳ级）[（86.05±16.427）]%,P=0.004;Nestin阳性细胞的增殖指数在低级别脑胶质瘤中[（41.50±33.313）%]则高于高级别脑胶质瘤[（17.58±14.009）%],P=0.033;低级别胶质瘤中CD133阳性细胞增殖指数[（34.38±35.50）%]与Nestin阳性细胞增殖指数[（41.50±33.313）%]间差异无统计学意义（P=0.653）,而在高级别胶质瘤中CD133阳性细胞增殖指数[（86.05±16.427）%]高于Nestin阳性细胞增殖指数[（17.58±14.009）%],P=0.000;在低级别胶质瘤中增殖的CD133阳性细胞占所有的Ki-67阳性细胞比例[（74.75±22.448）%]明显高于增殖的Nestin阳性细胞的比例[（30.75±25.888）%],P=0.001,在高级别胶质瘤增殖的CD133阳性细胞占所有的Ki-67阳性细胞比例[（52.62±24.336）%]也高于增殖的Nestin阳性细胞的比例[（29.83±21.952）%],P=0.002。结论：脑胶质瘤组织中CD133阳性细胞增殖指数随胶质瘤恶性度的增加而增高,Nestin阳性细胞增殖指数随胶质瘤恶性度的增加而降低,提示CD133阳性细胞是肿瘤组织主要分裂细胞亚群,此类细胞应是肿瘤治疗的主要靶细胞。     

肝细胞癌组织B7-H3表达与巨噬细胞浸润水平的相关性分析

目的 探讨肝细胞癌（HCC）组织中B7-H3的表达与肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）浸润水平的相关性。方法 采用免疫组织化学法和实时定量PCR技术检测116例HCC组织中B7-H3蛋白的表达,采用免疫组织化学法检测HCC组织中CD68的表达情况,分析二者的相关性及其与HCC临床病理特征的关系。结果 116例HCC组织中B7-H3的高表达率为79.3％（92／116）; TAMs低、中、高浸润分别为21、49和46例。B7-H3表达与TNM分期、血管侵袭和微卫星病灶有关（P＜0.05）;TAMs浸润水平与TNM分期、血管侵袭、淋巴结转移和微卫星病灶有关（P＜0.05）。HCC组织中B7-H3 mRNA相对表达量与TAMs浸润水平呈正相关（r=0.473,P＜0.001）。结论 HCC组织中B7-H3的表达水平与TAMs的浸润水平呈显著正相关,且参与HCC的发生、发展。     

CD133和巢蛋白阳性细胞在脑胶质瘤中的表达及分布特征

目的：探讨脑肿瘤干细胞标记物CD133、巢蛋白（Nestin）和CD34标记的微血管密度（CD34-MVD）在人脑胶质瘤中的表达情况,分析三者的关系及其意义。方法：应用免疫组化方法分析62例人脑胶质瘤中的CD133、Nestin和CD34-MVD的表达情况。结果：脑肿瘤干细胞标记物CD133、Nestin在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异（P〈0．05）。CD133表达与Nestin表达之间有相关性,两者呈正相关（P〈0．05）。CD133、Nestin均阳性染色组的CD34-MVD值高于两者均阴性组（P〈0．01）。结论：CD133和Nestin表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病理分级呈正相关,与CD34-MVD在分布及数量上存在相关性。     

Cat B、p53在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义

目的:分析Cat B、p53在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取我院2012年4月至2017年4月期间存档的54例胶质瘤石蜡标本以及同期存档的54正常脑组织标本作为研究对象。采用免疫组化SP法测量两组样本中Cat B、p53蛋白表达水平的差异,观察Cat B、p53蛋白在不同级别脑胶质瘤组织中的表达,分析其相关性。结果:胶质瘤组织中p53、Cat B蛋白阳性表达率显著高于正常脑组织（P＜0.01）;且不同级别胶质瘤组织中Cat B蛋白阳性表达率显著高于p53蛋白（P＜0.01）;随着恶性程度增加p53和Cat B蛋白表达量明显上调,差异显著（H=17.343,8.053;P＜0.01）;经Spearman相关性分析显示:Cat B、p53蛋白与肿瘤的恶性程度均呈正相关（r=0.701,0.714;P＜0.01）;Cat B与p53蛋白在胶质瘤中表达呈正相关（r=0.703,P＜0.05）。结论:Cat B、p53蛋白在脑胶质瘤组织中均存在不同程度阳性表达,且与其恶性程度呈正相关,Cat B与p53蛋白在胶质瘤组织中呈正相关。Cat B蛋白对于胶质瘤早期诊断具有重要意义。     

高低级别脑胶质瘤的MRS 代谢产物与Ki-67表达相关性研究*

目的:通过研究明确高低级别脑胶质瘤的磁共振波谱分析（magnetic resonance spectroscopy,MRS ）代谢产物与Ki-67表达的关系。方法:选取沈阳军区总医院2013年7 月至2015年7 月病理证实为胶质瘤的56例患者均行Ki-67和MRS 检查;分析Ki-67表达程度与瘤体Cho 值、NAA 值的关系。结果:35例低级别组脑胶质瘤（WHOⅠ～Ⅱ级）Ki-67的表达程度与瘤体Cho 值呈正相关（r s = 0.714,P < 0.05）,与瘤体NAA 值呈负相关（r s =-0.708,P < 0.05）;21例高级别组脑胶质瘤（WHOⅢ～Ⅳ级）Ki-67的表达程度与瘤体Cho 值呈正相关（r s = 0.624,P < 0.05）,Ki-67的表达程度与肿瘤实质NAA 值呈负相关（r s =-0.769,P < 0.05）。 结论:高低级别脑胶质瘤MRS 代谢产物与Ki-67表达相关。      

INPP4B和PTEN在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的:检测磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型（inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在人脑胶质瘤中的表达情况及二者的相关性,希望对胶质瘤的诊断分级、预后判断及治疗等方面提供理论依据。方法:采用免疫组织化学法（IHC）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法分别测定25例正常脑组织和60例不同级别胶质瘤中INPP4B和PTEN蛋白及mRNA的表达情况。结果:在IHC、qRT-PCR中显示:INPP4B、PTEN在正常脑组织组和低级别胶质瘤组、高级别胶质瘤组三组间表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;低级别胶质瘤组中 INPP4B、PTEN表达均高于高级别胶质瘤组（P＜0.05）,正常脑组织组中 INPP4B、PTEN表达均高于低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组（P＜0.05）。INPP4B与PTEN mRNA在正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤三组中表达呈正相关（P=0.000）。结论:INPP4B与PTEN的表达水平均与胶质瘤的恶性级别呈负相关,随着胶质瘤恶性程度的增高二者的表达水平下降。INPP4B与PTEN在胶质瘤中的表达水平具有正相关性,推测其可能在抑制胶质瘤的发生、发展、侵袭增殖等方面具有协同作用。     

Mipu1和HIF-1ɑ在人脑胶质瘤中表达及相关性分析

摘 要：［目的］ 探讨脑胶质瘤标本中Mipu1和HIF-1ɑ表达及其相关性。［方法］ 胶质瘤患者24例,根据WHO病理分级分低级别组12例（Ⅰ级5例,Ⅱ级7例）,高级别组12例（Ⅲ级7例,Ⅳ级5例）,以其中10例低级别胶质瘤患者瘤旁部分脑组织作为对照组。对三组标本进行针对Mipu1和HIF-1的免疫组化、实时荧光定量核酸扩增检测和免疫印迹分析检测,对所得得数据进行统计分析。［结果］ 免疫组化结果显示Mipu1和HIF-1ɑ表达蛋白均主要定位在细胞核内,且有随着胶质瘤病理级别升高而增强表达的趋势。三组标本的Mipu1和HIF-1ɑ的相对mRNA表达量和相对蛋白表达量组间差异有统计学意义（P<0.05）;且Mipu1和HIF-1ɑ 在胶质瘤中的表达呈正相关（P<0.05）。［结论］ HIF-1ɑ和Mipu1在胶质瘤中表达升高,且两者表达呈正相关。     

ITGA5在胶质瘤组织中的表达及临床意义

目的:探究整合素α5（integrinα5,ITGA5）在脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法:比较TCGA数据库中胶质瘤和正常脑组织ITGA5的表达差异和临床预后的生物学信息。收集临沂市人民医院54例脑胶质瘤手术患者的脑胶质瘤组织标本和临床资料,以及20例脑外伤患者颅内减压后的脑组织标本。以外伤后的脑组织为对照,采用免疫组织化学染色法与蛋白质印迹法检测ITGA5蛋白在胶质瘤中的表达。采用统计学方法研究ITGA5表达水平与临床病理参数的相关性。通过绘制生存曲线,比较ITGA5高表达和低表达患者的预后差异。结果:TCGA数据库中ITGA5在LGG与GBM中的表达均有显著差异（P＜0.001）,表达量随着胶质瘤WHO病理分级的升高而增加,且与患者的不良预后相关。ITGA5在胶质瘤组织中的高表达率为59.2%（32/54）,外伤后脑组织中的高表达率为5.0%（1/20）,两者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。ITGA5在胶质瘤组织中的表达与WHO分级、Ki-67和p53基因型相关（P＜0.05）,而与年龄、性别和肿瘤部位无关（P＞0.05）。ITGA5高表达胶质瘤患者的生存时间显著低于ITGA5低表达胶质瘤患者（P＜0.05）。结论:ITGA5在胶质瘤组织中的表达增加,且ITGA5的表达与胶质瘤病理分级和患者生存密切相关。     

Expression of the B7-related molecule B7-H1 by glioma cells: a potential mechanism of immune paralysis

Human glioblastoma is a highly lethal tumor that is known for its immune inhibitory capabilities. B7-homologue 1 (B7-H1), a recently identified homologue of B7.1/2 (CD80/86), has been described to exert costimulatory and immune regulatory functions. We investigated the expression and the functional activity of B7-H1 in human glioma cells in vitro and in vivo. Although lacking B7.1/2 (CD80/86), all 12 glioma cell lines constitutively expressed B7-H1 mRNA and protein. Exposure to IFN-gamma strongly enhanced B7-H1 expression. Immunohistochemical analysis of malignant glioma specimens revealed strong B7-H1 expression in all 10 samples examined, whereas no B7-H1 expression could be detected on normal brain tissues. To elucidate the functional significance of glioma cell-related B7-H1 expression, we performed coculture experiments of glioma cells with alloreactive CD4+ and CD8+ T cells. Glioma-related B7-H1 was identified as a strong inhibitor of CD4+ as well as CD8+ T-cell activation as assessed by increased cytokine production (IFN-gamma, interleukin-2, and interleukin-10) and expression levels of the T-cell activation marker (CD69) in the presence of a neutralizing antibody against B7-H1 (mAb 5H1). B7-H1 expression may thus significantly influence the outcome of T-cell tumor cell interactions and represents a novel mechanism by which glioma cells evade immune recognition and destruction.     

B7-H3, a potential therapeutic target, is expressed in diffuse intrinsic pontine glioma

Diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG) is a brain cancer with a median survival of only 1 year. Lack of molecular characterization of this tumor impedes the development of novel therapies. Membrane protein B7-H3, aka CD276, involved in interactions with host defenses in certain cancers, has been shown to be over-expressed in the majority of malignant neuroectodermal tumors including adult high-grade glioma. Targeting B7-H3 with a monoclonal antibody has demonstrated safety and efficacy in the salvage treatment of stage IV childhood neuroblastoma, another neuroectodermal tumor. It thus stands to reason that B7-H3 might serve as a therapeutic target in DIPG. B7-H3 immunoreactivity was determined in DIPG and non-diffuse brainstem glioma specimens with immunohistochemistry. In addition, B7-H3 mRNA expression was evaluated with microarrays in another set of specimens. All of the nine (100 %) DIPG specimens were shown to be B7-H3 immunoreactive. In the non-diffuse brainstem glioma group, none of the eight WHO grade I specimens showed B7-H3 immunoreactivity and nine of the 24 WHO grade II specimens (37.5 %) showed B7-H3 immunoreactivity. The association between histological grade and B7-H3 immunoreactivity was statistically highly significant. B7-H3 mRNA expression was also significantly higher in DIPG samples than in normal brain and juvenile pilocytic astrocytoma (WHO grade I) specimens. In summary, B7-H3 is over-expressed in DIPG. Given the need for novel treatment in this disease, antibody-based immunotherapy against B7-H3 in DIPG warrants further investigation.     

IMP3和Ki-67在人脑胶质瘤中的表达及其相关性

目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factor-Ⅱ mRNA-binding protein 3,IMP3）和Ki-67在脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法:收集神经外科手术切除后经病理证实的胶质瘤标本126例,另收集脑外伤行内减压术患者的正常脑组织20例作为对照组,采用免疫组化SP法检测IMP3、Ki-67在不同级别胶质瘤组织和正常脑组织中的表达水平;应用Spearman秩相关分析IMP3和Ki-67在胶质瘤组织中表达水平的相关性。结果:IMP3、Ki-67在胶质瘤组织中阳性率为53.17%、56.35%;IMP3、Ki-67在Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率均高于Ⅱ级(P＜0.05)。免疫组化半定量评分结果显示:正常脑组织和Ⅰ级胶质瘤中IMP3、Ki-67均为阴性表达;Ⅱ级胶质瘤中IMP3、Ki-67阳性表达多为弱阳性;Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中IMP3、Ki-67多数表达为弱阳性、中度阳性和强阳性;Ⅲ 级与Ⅱ级、Ⅳ级与Ⅱ级胶质瘤中IMP3、Ki-67阳性表达率比较,差异有统计学意义(P＜0.05);IMP3、Ki-67阳性表达均与胶质瘤的病变程度密切相关(P＜0.05)。胶质瘤组织中IMP3、Ki-67阳性表达率在不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置和病理类型之间差异均无统计学意义(P＞0.05);IMP3和Ki-67在胶质瘤组织中阳性表达率呈正相关(P＜0.05)。结论:IMP3、Ki-67分别可以有效地反映胶质瘤的病变程度,两者联合诊断可以客观反映胶质瘤病变程度,两者联合检测可能成为胶质瘤生物标记的新指标。     

敲减lncRNA RP1-261G23.7抑制胶质瘤细胞增殖和迁移及其机制探讨北大核心

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP1-261G23.7对人胶质瘤细胞增殖及迁移的影响及可能的调控机制。方法:采用GEPIA数据库分析RP1-261G23.7在胶质瘤组织中的相对表达。采用qRT-PCR检测RP1-261G23.7在4种胶质瘤细胞系(U87MG、SNB-19、U251、LN382)中的相对表达。采用Lipofectamine3000向胶质瘤细胞U87MG中单独转染si-RP1-261G23.7质粒(si-RP1-261G23.7组)和si-NC对照质粒(si-NC组)。采用CCK-8实验和细胞划痕实验检测转染后U87MG细胞的增殖及迁移能力。采用生物信息学、qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验研究RP1-261G23.7和miR-525-5p表达的关系。Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白的表达。结果:与正常组织相比,RP1-261G23.7在胶质瘤组织中表达上调(P<0.01)。与人脑星型胶质正常细胞系(HEB)相比,RP1-261G23.7在四种胶质瘤细胞系中表达均上调(P<0.01),U87MG细胞中RP1-261G23.7相对表达量最高(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7显著抑制了U87MG细胞的增殖(P<0.05)和划痕愈合(P<0.01)。RP1-261G23.7能够直接互补结合miR-525-5p(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7表达显著促进了U87MG细胞中miR-525-5p的表达(P<0.01),NF-κB信号通路蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:胶质瘤组织和细胞系中RP1-261G23.7表达明显上调,敲减RP1-261G23.7通过促进miR-525-5p表达、干扰NF-κB信号通路活化,抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖和迁移,可能为胶质瘤的靶向治疗开辟新的路径。     

B7-H1和Bcl-2在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 探讨B7-H1与Bcl-2在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与上皮性卵巢癌临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组织化学法检测手术切除的80例上皮性卵巢癌组织及20例正常卵巢组织蜡块中B7-H1及Bcl-2的表达情况,并分析其表达与不同临床病理特征之间的相关性.结果 上皮性卵巢癌组织B7-H1及Bcl-2阳性表达率分别为77.5％ (62/80)和58.8％ (47/80),均高于正常卵巢组织的15.0％ (3/20)和10.0％ (2/20),差异有统计学意义(x2=27.473,P＜0.05;x2=15.216,P＜0.05).Bcl-2及B7-H1在上皮性卵巢癌组织中的表达均与分化程度呈负相关(x2=9.367,P＜0.01;x2=11.702,P＜0.01),而且Bcl-2与国际妇产科联合会分期呈正相关(x2=7.766,P＜0.01).另外,在上皮性卵巢癌组织中B7-H1和Bcl-2阳性表达之间呈正相关(r =0.400,P＜0.01).结论 B7-H1和Bcl-2在上皮性卵巢癌组织中表达明显上调,二者存在正相关性,与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,联合检测B7-H1和Bcl-2可能对上皮性卵巢癌的诊治有一定的指导作用.