EGCG诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡相关基因的差异表达

  目的   研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制。   方法   运用DNA含量分析、Annexin Ⅴ/PI双标记法、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学方法来观察细胞凋亡。通过SuperArray人细胞凋亡基因芯片检测100μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞12 h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR和Western blot技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1。   结果   25、50、100、200 μmol/L EGCG作用于MGC-803细胞24 h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;100 μmol/L EGCG作用4、8、12、24 h后,Annexin Ⅴ/PI双标记法表明早期凋亡细胞显著增加。100 μmol/L EGCG作用24 h后,在琼脂糖凝胶上电泳可见DNA凋亡特征性的阶梯状条带。电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变。通过基因芯片检测发现,100 μmol/L EGCG作用12 h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1运用RT-PCR和Western blot技术进行验证,其结果与基因芯片一致。   结论   EGCG能够诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果。      

EGCG对体外培养喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响

[目的]研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。[方法]采用CCK-8法检测EGCG对喉癌细胞增殖的影响;流式细胞法检测细胞凋亡及细胞周期;细胞划痕法和Transwell法检测体外侵袭;蛋白质免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。[结果]EGCG 5~160mg/L作用Hep-2细胞24~72h,可对细胞增殖产生明显的抑制作用,其24、48、72h的IC50值分别为139.6、38.7、24.3mg/L。10、20、40mg/L EGCG作用48h,Hep-2细胞凋亡率分别为(3.1±0.2)%、(9.9±0.6)%、(11.7±1.2)%,细胞被阻滞于G1期。5、10、20、40 mg/L EGCG作用48h,Hep-2细胞侵袭抑制率分别为(19.6±2.2)%、(37.2±3.8)%、(49.3±4.1)%和(62.6±3.4)%,VEGF蛋白表达下调率分别为(15.8±2.2)%、(51.4±2.1)%、(78.4±3.1)%和(89.6±2.4)%,与对照组相比差异均有统计学意义。[结论 ]EGCG可通过下调VEGF蛋白表达对喉癌细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低侵袭等作用。     

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV /PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和 p21的表达水平。结果EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl-2表达下调的研究

目的：探讨表没食子儿茶素投食子酸酯[（－）－epigallocatechin-3-gallate,EGCG]诱导胃癌MGC－803细胞和肝癌BEL－7402细胞凋亡的作用及其调亡相关基因bcl-2产物表达的改变。方法：用MTT法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及bcl－2蛋白表达水平的变化。结果：EGCG以剂量依赖的方式抑制MGC－803细胞和BEL－7402细胞的生长,其IC50值分别为188．52和264．53μg／ml。200～300μg／ml的EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞24～36h,在琼脂糖凝胶电泳上可见凋亡细胞特征性的“梯状”带和PI染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;流式细胞术显示EGCG以时间依赖的方式下调bcl-2蛋白的表达。结论：EGCG对胃癌MGC-803细胞和肝癌BEL-7402细胞生长具有抑制作用,其机制之一是诱导这两株肿瘤细胞的凋亡。诱导细胞凋亡的机制可能与其下调bcl-2蛋白的表达水平有关。     

二甲亚砜促进5-氨基酮戊酸光动力疗法对A431细胞杀伤和小鼠皮肤鳞癌的抑制效应

目的:研究DMSO参与5-氨基酮戊酸介导的光动力疗法（ALA-based photodynamic therapy,ALA-PDT）对A431细胞杀伤和小鼠皮肤鳞癌的抑制效应,探讨治疗皮肤肿瘤的优化作用。方法:DMSO干预后,采用流式细胞仪检测A431细胞内PpⅨ水平和PDT后细胞凋亡率。激光共聚焦显微镜检测小鼠鳞癌瘤体组织的荧光强度,比较PDT后各组鳞癌小鼠的抑瘤率。结果:实验组A431细胞PpⅨ荧光强度率高于ALA组和空白对照组（P<0.01）,与DMSO含量呈浓度依赖性。PDT后实验组细胞凋亡率高于ALA组和空白对照组（P<0.01）。实验组瘤体组织PpⅨ荧光强度值高于10%ALA对照组和10%DMSO对照组（P<0.01）,与DMSO含量呈浓度依赖性。实验组鳞癌小鼠 PDT治疗后,抑瘤率高于对照组（P<0.05）,并有量效依从关系。结论:DMSO可促进ALA-PDT对A431细胞杀伤和小鼠皮肤鳞癌的抑制效应。     

CUGBP1基因对EGCG诱导人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用研究

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡影响及与CUGBP1表达的关系。方法:MTT法检测不同剂量EGCG对A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化和蛋白质印迹法检测各处理组CUGBP1蛋白的表达;Real-Time PCR对CUGBP1mRNA表达进行定量分析。结果:EGCG显著抑制A549细胞增殖活性,F=1 096.65,P<0.001;EGCG孵育4和24hA549细胞的凋亡率分别为(34.10±1.10)%和(51.62±1.50)%,较4和24h正常对照组的(3.90±0.97)%和(1.53±1.11)%明显增加,差异有统计学意义,F=1 254.28,P<0.001。A549细胞细胞核和细胞质内CUGBP1蛋白表达呈阳性,EGCG孵育4h可见A549细胞核CUGBP1蛋白表达呈阴性;孵育24h,部分A549细胞变圆、核固缩,CUGBP1蛋白表达又呈阳性。CUGBP1mRNA定量分析可见,EGCG明显抑制CUGBP1表达,EGCG孵育24h,A549细胞中CUGBP1mRNA相对表达量为(0.71±0.076),较4h的(0.40±0.017)高,差异有统计学意义,t=-6.782,P=0.020。结论:EGCG干扰CUGBP1基因表达抑制人肺癌细胞株A549的增殖,可能是EGCG促进A549细胞凋亡的途径之一。     

EGCG通过下调Bcl-2、NF-κB(p65)表达,活化Caspase-3诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨EGCG诱导移植瘤细胞凋亡作用的分子机制. 方法:建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照;采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况. 结果:EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用;TUNEL法发现EGCG导致移植瘤内细胞发生凋亡;Western blot分析表明EGCG能下调NF-κB(p65)蛋白的表达,促使Bax/Bcl-2蛋白表达的比值增高,并且可以促进Caspase-3的活化. 结论:EGCG对人胃癌细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并能诱导移植瘤细胞凋亡.其机制可能与通过NF-κB(p65)的下调,促使Bax/Bcl-2比值增高,进而导致Caspase-3的活化而诱导细胞发生凋亡相关.     

光动力对小鼠鼻咽癌移植瘤survivin表达及CD+8细胞毒性T细胞的影响

目的 观察氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,ALA)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对小鼠鼻咽癌移植瘤survivin蛋白表达及CD+8细胞毒性T细胞(CD+8 CTLs)的影响.探讨ALA-PDT治疗鼻咽癌的机制.方法 32只 SPF级BALB/c 小鼠皮下接种鼻咽癌CNE 2细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为2组:PDT组、对照组.PDT治疗后定期采用免疫组化法检测肿瘤组织survivin蛋白表达及CD+8细胞毒性T细胞.结果 治疗后24h,PDT组survivin蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05),肿瘤局部CD+8细胞数量较对照组无明显变化(P＞0.05).治疗后72h,PDT组肿瘤局部CD+8细胞数量均明显高于对照组(P＜0.05).结论 抑制survivin蛋白的表达以及产生局部免疫效应均可能是ALA-PDT治疗鼻咽癌的机制之一.     

光动力对小鼠鼻咽癌移植瘤survivin表达及CD8＋细胞毒性T细胞的影响

目的观察氨基酮戊酸（5-Aminolevulinic acid,ALA）介导的光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）对小鼠鼻咽癌移植瘤survivin蛋白表达及CD8＋细胞毒性T细胞（CD8＋ CTLs）的影响。探讨ALA-PDT治疗鼻咽癌的机制。方法32只SPF级BALB/c小鼠皮下接种鼻咽癌CNE2细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为2组：PDT组、对照组。PDT治疗后定期采用免疫组化法检测肿瘤组织survivin蛋白表达及CD8＋细胞毒性T细胞。结果治疗后24h,PDT组survivin蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,肿瘤局部CD8＋细胞数量较对照组无明显变化（P〈0.05）。治疗后72h,PDT组肿瘤局部CD8＋细胞数量均明显高于对照组（P〈0.05）。结论抑制survivin蛋白的表达以及产生局部免疫效应均可能是ALA-PDT治疗鼻咽癌的机制之一。     

谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

口腔癌组织中TRAF6的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响

目的:探讨口腔癌组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor-associated factor 6,TRAF6）的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blot检测沉默TRAF6在SCC-25细胞中的表达;EdU实验检测SCC-25细胞的增殖能力;Western blot检测SCC-25细胞中LC3 Ⅱ/LC3 I比例;细胞免疫荧光染色检测SCC-25细胞中自噬体数目;流式细胞术检测SCC-25细胞的凋亡率;Western blot检测SCC-25细胞中NF-κB和c-jun蛋白的表达。结果:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中高表达（P＜0.001）;沉默TRAF6使口腔癌细胞系中TRAF6的表达降低;沉默TRAF6使SCC-25细胞的增殖能力下降（P＜0.01）、LC3 Ⅱ/LC3 I比例下降（P＜0.001）和自噬体数目减少（P＜0.001）;沉默TRAF6使SCC-25细胞的凋亡率升高（P＜0.01）,NF-κB和c-jun蛋白磷酸化程度降低（均P＜0.001）。结论:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞中高表达,沉默TRAF6抑制SCC-25细胞自噬,增强SCC-25细胞的凋亡率及抑制NF-κB/c-jun信号途径的活性。