咪唑安定联合miR-135a-5p影响宫颈癌细胞HeLa增殖 迁移及侵袭的机制研究

目的 探讨咪唑安定对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移及侵袭的影响及分子机制。方法 以RPMI-1640培养基对HeLa细胞常规培养，分别用25、50、100μmol/L的咪唑安定处理，记为低、中、高剂量组，常规培养的细胞作为NC组；将miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞，记为anti-miR-135a-5p组、anti-miR-NC组；miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞后用100μmol/L的咪唑安定处理，记为anti-miR-135a-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组。CCK-8检测细胞活性；Western blot法检测蛋白表达；克隆形成实验检测细胞克隆；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-135a-5p表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 不同剂量咪唑安定处理后，HeLa细胞活性、CyclinD1、MMP2、MMP9表达、细胞克隆、迁移和侵袭数量、miR-135a-5p表达降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。下调miR-135a-5p降低HeLa细胞活性、MMP2、CyclinD1、M...     

扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖 迁移 侵袭的影响及机制研究

目的 探究扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用扶正合剂进行干预。将anti-miR-NC、anti-miR-210分别转染至MDA-MB-231细胞；将miR-NC、miR-210 mimics分别转染MDA-MB-231细胞，再使用扶正合剂处理细胞。CCK-8检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-210表达，Western blot检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与正常对照组(0.56±0.05)比较，乳腺癌细胞组OD值明显上调，为(0.96±0.09),差异有统计学意义(t=11.655,P=0.000);与乳腺癌细胞组比较，扶正合剂组OD值显著降低，为(0.32±0.03),差异有统计学意义(t=20.239,P=0.000)。正常对照组迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白及MMP-9蛋白表达水平分别为(62.31±5.30)个、(70.33±8.26)个、(0.25±0.02)、(0....     

白藜芦醇对人肾癌786-O细胞迁移和侵袭能力影响

目的观察白藜芦醇(resveratrol)对人肾癌786-O细胞迁移和侵袭能力影响,并探讨其作用机制。方法体外培养786-O细胞,分别以0(对照组)、10、20、40、80μmol/L白藜芦醇处理24、48、72 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测786-O细胞活力。以0(对照组)、20、40、80μmol/L白藜芦醇处理786-O细胞24 h,Annexin V/PI双染法检测786-O细胞凋亡;克隆形成实验检测786-O细胞克隆形成能力;划痕损伤实验和Transwell小室体外侵袭实验分别检测786-O细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot检测786-O细胞基质金属蛋白酶–2(MMP-2)、基质金属蛋白酶–9(MMP-9)表达。结果白藜芦醇以剂量和时间依赖性的方式抑制786-O细胞活力(P 0.05),其24、48、72 h IC50约为52.8、18.6、13.7μmol/L;与对照组[(4.30±0.55)%]比较,20、40、80μmol/L白藜芦醇组786-O细胞凋亡率[分别为(15.07±1.91)%、(19.70±2.25)%、(33.16±4.25)%]明显升高(P 0.05)。与对照组比较,20、40、80μmol/L白藜芦醇组786-O细胞迁移率[分别为(77.68±8.42)%、(52.40±5.46)%、(39.73±4.35)%]明显降低(P 0.05),786-O细胞侵袭率[分别为(57.57±9.47)%、(31.87±5.21)%、(30.83±5.07)%]明显降低(P 0.05);与对照组比较,20、40、80μmol/L白藜芦醇组786-O细胞MMP-2、MMP-9表达明显降低(P 0.05)。结论白藜芦醇可明显抑制786-O细胞迁移能力和侵袭能力,其机制可能与其抑制MMP-2和MMP-9表达有关。     

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。 结论 宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。     

LINC00943靶向调控miR-125a-5p对幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响

目的 探讨LINC00943对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响及其分子机制。方法 将GES-1细胞分为Control组、Hp组、Hp+si-NC组、Hp+si-LINC00943组、Hp+miR-NC组、Hp+miR-125a-5p组、Hp+si-LINC00943+anti-miR-NC组和Hp+si-LINC00943+anti-miR-125a-5p组,实时荧光定量PCR检测LINC00943和miR-125a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫蛋白印迹检测凋亡蛋白表达;酶联免疫吸附法检测白细胞介素-8(IL-8)和IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00943和miR-125a-5p靶向关系。结果 与Control组比较,Hp组LINC00943表达、凋亡率、Bax蛋白、IL-8、IL-1β、LDH升高,miR-125a-5p表达、Bcl-2蛋白降低(P<0.05);敲减LINC00943或过表达miR-125a-5p可减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤;LINC00943靶向调控miR-125a-5p...     

CD26在肾癌细胞中的表达及对迁移能力的影响

目的:探讨CD26在肾癌细胞中的表达及对迁移能力的影响。方法:采用分子生物学的方法检测人肾癌细胞系A498和786-0中CD26蛋白的表达及对迁移能力的影响。结果:A498细胞内CD26蛋白表达相对水平高于786-O细胞内CD26蛋白表达,二者具有统计学意义(P<0.05);抗CD26抗体和酶抑制剂能够显著抑制细胞迁移的进程。结论:CD26蛋白表达水平可能和肾癌细胞恶性度及迁移能力相关。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

骨桥蛋白的表达与肾癌细胞增殖能力的研究

目的:研究骨桥蛋白(OPN)的表达水平与肾癌细胞增殖能力的相关性。方法:细胞增殖实验:使用MTT法对各组细胞的增殖活力进行测定,检测OD570值比较各组间增殖活力差异,采用细胞计数法,对各组细胞进行计数,以验证OPN对786-O细胞增殖的影响。结果:MTT及细胞计数结果表明,用人重组OPN蛋白对786-O细胞进行处理,细胞的增殖活性明显增强,细胞数目明显增多(P<0.05)。结论:OPN增强肾癌细胞的增殖能力。     

姜黄素对人喉癌细胞株Hep-2增殖和端粒酶活性的影响

目的研究姜黄素（curcumin）对人喉癌细胞Hep-2增殖和端粒酶活性表达水平的影响。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后24h、48h、72h的细胞增殖活性：集落形成试验检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后的细胞增殖抑制率;StretchPCR-银染法检测细胞端粒酶活性变化。RT—PCR分析端粒酶主要组分hTERT的mRNA表达情况。结果①姜黄素对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。五种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μol／L、80μmol／L、100μol／L）姜黄素作用12、24、48、72小时后,IC50分别为81．17μmol／L、40．90μmol／L、33．26μmol／L、31．63μmol／L;②四种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μmol／L、80μmol／L）姜黄素作用于Hep-2细胞48h,-周后各组Hep-2细胞集落形成数和细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性．其细胞增殖抑制率与对照组相比,分别为36．25％、57．4％、98．48％、100％;③60μmol／L姜黄素作用于Hep-2细胞24、48、72小时后。与对照组相比,端粒酶活性总光密度值（IOD）分别下降23．19％、60．28％和70．15％,各时间组间有显著性差异（P〈0．01）;端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达水平IOD值分别下降2．90％、58．69％和88．35％,各时间组间有显著性差异（P〈o．01）。结论姜黄素可抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖活性,下调hTERTmR．NA的转录水平并抑制细胞的端粒酶活性,有较好的临床应用前景。     

姜黄素对高脂饮食大鼠血脂含量和caveolin-1表达的影响

目的观察姜黄素对高脂饮食大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量和caveolin-1表达的影响。方法将40只健康成年雄性大鼠分为正常对照组(普通饲料喂养)、高脂血症模型组(高脂饲料喂养)、姜黄素低剂量组(高脂饲料+姜黄素100mg/kg.bw/d)、姜黄素高剂量组(高脂饲料+姜黄素200mg/kg.bw/d)。分别于实验开始前1d、实验第8周末禁食12h后,测血清TC、TG、LDL-C含量的变化。同时Western-Blot印迹法检测大鼠血管壁caveolin-1表达的变化。结果与正常对照组比较,高脂血症模型组的TC、TG、LDL-C分别由对照组的(1.58±0.25)、(0.55±0.06)、(0.49±0.06)mmol/L升高到高脂饮食组的(3.47±0.35)、(0.92±0.07)、(0.88±0.04)mmol/L,并伴随caveolin-1蛋白表达水平下降3.25倍。姜黄素的介入能降低高脂饮食大鼠TC、LDL-C、TG的含量以及促进其caveolin-1的表达(P0.05)。结论姜黄素具有降低高脂饮食大鼠TC、LDL-C、TG含量的作用,其作用机制可能与促进caveolin-1表达有关。     

下调LOX基因对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨LOX对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其作用机制。方法 将si-con、si-LOX质粒分别转染至786-0细胞中,记为si-con组、si-LOX组,转染采用脂质体法。蛋白质印迹（Western Blot）检测赖氨酰氧化酶(LOX)、周期素依赖性激酶4（CDK4）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 与正常肾小管上皮细胞HK-2相比,肾癌细胞786-0、GRC-1、A498中LOX表达水平显著升高（P＜0.001）。敲减LOX肾癌细胞786-0的活力显著降低（t=8.440,P＜0.001）,786-0细胞的凋亡率显著升高（t=25.628,P＜0.001）,G0/G1期细胞所占比例增加（t=7.211,P＜0.001）,S期细胞所占比例减少（t=13.190,P＜0.001）,786-0细胞中CDK4、Bcl2、p-Akt表达水平显著降低（t=15.660、13.914、12.349,P＜0.001）,786-0细胞中Bax表达水平显著升高（t=22.057,P＜0.001）。结论 敲减LOX能抑制肾癌细胞增殖,促进细胞凋亡,影响细胞周期,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关,可为肾癌的治疗提供新思路。     

微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用

目的：探讨微小RNA（miR）-21在乳腺癌细胞（MCF7）中的作用。方法：对MCF7细胞转染miR-21,采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4（PDCD4）表达;用噻唑蓝（MTT）比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖;流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果：经免疫组织化学检测,转染组未见染色,对照组细胞胞质呈棕褐色,转染组PDCD4的表达明显低于对照组,MTT法检测转染组细胞活力增加（P〈0.05）。转染组的凋亡率为（3.14±0.24）%,明显低于空白组、空质粒组的（8.04±0.02）%、（9.41±0.53）%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：PDCD4是miR-21的靶基因之一,miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。     

miR-181a在子宫内膜异位症中的表达情况分析

目的探讨miR-181a在子宫内膜异位症中的表达及其对细胞增殖及迁移能力的影响。方法选取2016年5月-2017年1月该院收治的子宫内膜异位症患者共45例作为观察组,另选择同期进行健康检查的45例女性作为对照组,使用实时荧光定量PCR技术检测所有患者子宫内膜组织中的miR-181a指标表达情况,分析miR-181a在子宫内膜异位症中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响。结果检测结束后发现观察组患者子宫内膜组织中miR-181a表达量△Ct计算结果显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05);比较各分期患者miR-181a表达量发现Ⅲ期、Ⅳ期患者显著高于Ⅰ期和Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0. 05);Ⅳ期患者miR-181a表达量明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期,差异有统计学意义(P<0. 05);miR-181a表达量越高的子宫内膜异位症患者发生病灶细胞增殖、迁移的概率越高。结论 miR-181a在子宫内膜异位症患者中的表达量明显高于正常人群,miR-181a表达量与子宫内膜异位症患者病灶细胞增殖、迁移呈正相关,miR-181a可作为子宫内膜异位症的诊断指标之一。     

黄芪对新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞TLR_4/MyD88表达的影响

目的:探讨黄芪(Astragalus)对新生儿窒息后血清诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)TLR4/MyD88(Toll-like receptors 4/myeloid differentiation factor 88)表达的影响。方法:以人HK-2为研究对象,分为对照组、窒息组、黄芪组,以200 ml/L窒息血清作为攻击因素,分别检测如下指标:倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)检测各组细胞TLR4特异性荧光抗体阳性结合率表达情况;采用免疫组织化学法(SP法)检测各组细胞MyD88表达情况。结果:与对照组相比较,窒息组细胞形态变化显著,TLR4特异性荧光抗体阳性结合率和MyD88明显增加;与窒息组相比较,黄芪组细胞形态明显改善,TLR4特异性荧光抗体阳性结合率和MyD88的表达明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪具有减轻新生儿窒息后血清诱导的人肾小管上皮细胞TLR/MyD88表达的作用。     

姜黄素对博莱霉素致小鼠急性肺损伤的影响

摘要：目的探讨姜黄素对博莱霉素（BLM）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的治疗作用。方法昆明雄性小鼠60只,分为假手术组、模型组、姜黄素高、中、低剂量组,每组12只。除假手术组外其余各组小鼠气管内1次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组1次性滴注等体积的生理盐水。造模后24h开始给药,持续到处死动物的前1天。姜黄素高、中、低剂量组给药剂量分别为200、100、50mg／（kg·d）,假手术组、模型组分别灌服等体积的生理盐水。各组动物分别于给药后第3天和第7天各随机处死6只,观察肺组织形态学改变,测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH～Px）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）含量。结果姜黄素能降低肺组织中iNOS含量,提高小鼠体内GSH—Px含量。与假手术组相比,第3、7天时模型组iNOS含量明显增高（P〈0．01）,GSH—Px含量明显降低（P〈0．01）。姜黄素中、高剂量组和模型组相比,iNOS含量显著下降（P〈0．01）,GSH—Px含量显著增加（P〈O．01）。病理组织学检查亦表明,一定剂量的姜黄素可明显减轻肺组织损伤的程度。结论100-200mg／（kg·d）姜黄索在BLM诱导的小鼠急性肺损伤中有一定的防治作用。其机制可能与通过升高肺组织的GSH—Px水平,降低iNOS的水平,重建机体氧化、抗氧化平衡有关。     

姜黄素通过增强自噬水平抑制急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应

目的 观察脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠模型肺组织中自噬表达,探讨姜黄素是否通过上调急性肺损伤大鼠自噬水平抑制肺组织的炎症反应。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、急性肺损伤组（ALI组）、姜黄素组、自噬抑制剂3 - 甲基腺嘌呤组（3 - MA组）。采用一次性气管内滴注LPS（4 mg/kg）制备ALI大鼠模型。姜黄素组与3 - MA组于造模前15 min分别腹腔注射姜黄素（200 mg/kg）或自噬抑制剂3 - MA（15 mg/kg）。于造模后24 h取材HE染色观察肺组织形态变化;ELISA法测定支气管肺泡灌洗液中（BALF）中细胞总数及肿瘤坏死因子 -α（TNF -α）、白介素- 1β（IL - 1β）及白介素 - 6（IL - 6）的含量;real - time PCR检测自噬基因ATG5、 ATG7的mRNA水平;western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC - 3）、Beclin - 1。结果 与对照组相比,ALI组大鼠肺组织中大量炎症细胞浸润,BALF中细胞总数增加,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平较对照组显著上调（P＜0.05）,自噬指标ATG5、ATG7 mRNA水平与LC - 3、Beclin - 1蛋白表达量明显上调（P＜0.05）。与ALI组相比,姜黄素组炎症细胞浸润减轻,BALF中细胞总数减少,TNF -α、IL - 1β及IL - 6水平显著减少（P＜0.05）,自噬相关基因和蛋白表达进一步上调（P＜0.05）。3 - MA处理显著抑制自噬相关指标的表达,加重炎症细胞浸润, 增多BALF中TNF -α、IL - 1β的含量（P＜0.05）。结论 姜黄素处理通过进一步增强ALI的细胞自噬水平减轻大鼠肺组织的炎症损伤,进而发挥保护性疗效。