miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

目的研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA）,探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株（SACC-LM/SACC-83）,采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235,P〈0.05）;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713,P〈0.05）。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。     

miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨miR-21对人唾液腺腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)增殖、凋亡的影响及其相关作用机制。方法：将SACC-LM细胞分为 3 组,采用LipofectamineTM2000做瞬时转染。干扰组转染miR-21 inhibitor,阴性对照组转染无关核苷酸序列,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-21和PDCD4、Bcl-2 mRNA的表达水平。以CCK8法检测转染24、48、72、96 h后细胞的增殖活性,Annexin-V/PI 双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Western免疫印迹检测转染后靶蛋白 PDCD4、Bcl-2的表达量。采用 SPSS 16.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果：转染miR-21 inhibitor的细胞中miR-21、Bcl-2表达下调（P＜0.01）,而PDCD4基因表达上调（P<0.05）。CCK8检测结果表明,miR-21表达下调可以明显抑制SACC-LM细胞的增殖活性,并呈时间依赖性（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明,干扰组细胞凋亡率显著高于阴性对照组和空白组（P<0.05）;Western 免疫印迹结果显示, PDCD4蛋白的表达较对照组显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论：下调miR-21的表达可抑制SACC-LM细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞内PDCD4表达上调,Bcl-2表达下调有关。     

PRRX1对唾液腺腺样囊性癌细胞自噬的影响

目的: 探讨配对相关同源框 1（paired related homeobox1,PRRX1）对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）细胞自噬的影响。方法: 用PRRX1过表达慢病毒载体及PRRX1慢病毒空载体转染SACC细胞后,应用Western蛋白免疫印迹法检测转染效果。利用透射电子显微镜观察自噬小体,通过细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测自噬标志物（LC3-II/Beclin1）水平。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与未转染的空白对照组和阴性空病毒载体转染组相比,PRRX1过表达组的PRRX1表达量升高,自噬小体减少,自噬标志物水平降低（P<0.05）。结论: PRRX1对SACC细胞的自噬有抑制作用。     

DNMT1干扰对唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M E-cadherin表达的影响

目的：建立DNA甲基转移酶1（DNMT1）表达稳定抑制的唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M,探讨DNMT1表达抑制对ACC-M细胞E-cadherin表达的影响。方法：设计靶向干扰DNMT1的shRNA序列,构建携带该序列的慢病毒载体并转导ACC-M细胞,对筛选出的抗性克隆采用RT-PCR、荧光定量PCR、免疫印迹方法分别检测DNMT1mRNA、蛋白质水平,筛选获得DNMT1表达稳定抑制的ACC-M细胞,并通过甲基化特异性PCR检测E-cadherin基因启动子的甲基化状态,荧光定量PCR检测E-cadherin的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果：筛选获得DNMT1稳定表达抑制的ACC-M细胞,其mRNA、蛋白相对表达水平（0.156±0.008,0.163±0.013）显著低于空白对照组和空载对照组。进一步检测发现,E-cadherin基因启动子甲基化水平明显降低,E-cadherinmRNA表达水平显著增高,P〈0.05。结论：shRNA慢病毒载体介导的RNA干扰能够有效、稳定地抑制ACC-M细胞DNMT1的表达,并降低ACC-M细胞E-cadherin基因启动子的甲基化水平,从而使E-cadherin基因表达增强。     

苦参碱对唾液腺腺样囊性癌细胞黏附侵袭抑制的影响及机制探讨

目的:研究苦参碱对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞黏附侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养ACC-M细胞系,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用黏附试验和Matrigel侵袭实验,研究苦参碱注射液及其不同浓度对ACC-M细胞黏附及侵袭能力的影响,采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:苦参碱注射液浓度在0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL时,对ACC-M细胞均有一定增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系。不同浓度苦参碱注射液处理ACC-M细胞24h后,其体外黏附和侵袭能力呈剂量依赖性下降。经苦参碱(0.75 mg/mL)作用后,ACC-M细胞的E钙黏素(E-cad蛋白)表达明显增强,与对照组有显著差异。结论:一定浓度的苦参碱可以抑制唾液腺腺样囊性癌细胞生长,降低细胞黏附和侵袭能力,其机制可能与上调E-cad蛋白表达有关。     

MicroRNA-320a调控唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨microRNA-320a（miR-320a）对唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移能力的调控作用。方法：以唾液腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M为实验样品,通过脂质体介导,将miR-320a的拟似物（miR-320a mimics）转染至ACC-M细胞,升高miR-320a的表达水平。采用荧光实时定量RT-PCR检测转染前、后ACC-M中miR-320a的表达变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变,并通过细胞计数试剂盒-8检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测miR-320a对细胞凋亡的影响,Western印迹检测miR-320a的靶基因整合素β3（integrinβ3,ITGB3）的表达变化。应用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果：转染miR-320amimics后的ACC-M中miR-320a的表达明显上调（P〈0.001）。ACC-M细胞的侵袭迁移能力显著降低（P〈0.001）,而细胞的增殖和凋亡无显著变化。Western印迹检测结果显示,Integrinβ3在低转移细胞株ACC-2表达阴性,在ACC-M中高表达;升高miR-320a在ACC-M中的表达,Integrinβ3表达明显降低。结论：低表达miR-320a有助于维持ACC的侵袭转移特性,调高其表达水平能有效抑制ACC-M的侵袭迁移能力。miR-320a可能通过调控其靶基因Integrinβ3的表达而发挥作用。     

p120连环蛋白对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨p120ctn-shRNA对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及p120ctn-shRNA对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。方法 选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83细胞系进行培养,p120ctn-shRNA慢病毒表达载体转染SACC-83,同时转染空载体NC shRNA作为对照组,嘌呤霉素筛选稳定表达p120ctn-shRNA的细胞系。通过RT-PCR和Western Blot检测敲低效果。分别通过CCK8、划痕实验、迁移实验和侵袭实验观察p120连环蛋白基因敲低对人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。通过RT-PCR和Western Blot检测p120连环蛋白基因敲低对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,实验组p120连环蛋白的基因表达量和蛋白表达量都大幅度降低。与对照组相比,实验组的增殖能力明显降低（P<0.05）,与对照组相比,实验组的迁移能力明显降低。与对照组相比,实验组的侵袭能力明显降低（P<0.01）。E-钙粘蛋白表达略微下降,N-钙粘蛋白表达显著下降。结论 抑...     

不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌(SACC-83、SACC-LM)细胞生物学行为的影响.方法:采用不同放疗剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)作用SACC-83、SACC-LM细胞并继续培养48 h,CCK-8检测细胞存活,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,细胞划痕实验观察细胞迁移能力变化.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:放疗对SACC-LM细胞的细胞存活率、细胞凋亡率、异倍体、细胞迁移力的影响较SACC-83显著(P＜0.05);与其他放疗剂量相比,SACC-83细胞在6 Gy剂量照射下细胞存活率最低,细胞凋亡比例及异倍体比例最高,细胞迁移能力最弱.结论:SACC-LM细胞放疗敏感性较SACC-83更高,SACC-83细胞对6 Gy剂量放疗最为敏感.     

MAB225对人唾液腺腺样囊性癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究表皮生长因子受体单克隆抗体(MAB225)对人唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞放射敏感性的影响。方法:通过双荧光染色法、四氮唑还原法(MTT)、流式细胞仪观察经MAB225处理后的ACC-2细胞放射后凋亡的变化,以评价MAB225对ACC-2细胞放射敏感性的影响。采用SPSS11.0软件包的单因素方差分析对数据进行统计学处理。结果:经MTT检测、双荧光染色和流式细胞仪检测,经MAB225和放射联合处理后的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例较未处理组上升3倍;而单纯放射处理的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例只增加1倍。结论:MAB225可以提高放射线对ACC-2细胞的杀伤作用,降低ACC-2细胞的放射后生存率。     

唾液腺腺样囊性癌转移相关机制的研究进展

唾液腺腺样囊性癌发生发展以及转移是一个多因素参与、多步骤完成的复杂过程,受许多基因及其产物的调控。黏附因子、蛋白水解酶及转移抑制基因等参与唾液腺腺样囊性癌转移的过程,揭示了唾液腺腺样囊性癌转移的分子机制。     

ras癌基因产物P21在涎腺腺样囊性癌与腺淋巴瘤中的表达意义

目的　通过对涎腺腺样囊性癌与腺淋巴瘤中的ras 癌基因产物P21 蛋白的表达研究, 探讨ras 癌基因与涎腺恶性肿瘤的关系。方法　采用免疫组化S- P 法对25 例腺样囊性癌与22 例腺淋巴瘤中ras- P21 蛋白表达状况行了检测。结果　腺样囊性癌阳性表达率为92 % (23/25) , 腺淋巴瘤阳性率为22 .7 % (5/22) 。经χ2 检验二者阳性率差异有非常显著意义( P< 0 .005) 。结论　腺样囊性癌的发病与ras 癌基因的激活有密切关系。     

miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移

目的 研究miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.方法 利用生物信息学软件预测出侵袭转移相关基因SLUG为miR-181a的候选靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-181a对靶基因SLUG的直接调控作用.在SACC-LM细胞中沉默SLUG后通过细胞划痕和Transwell实验检测转染后细胞侵袭迁移能力的改变.结果 生物信息学软件预测发现,SLUG mRNA序列中包含miR-181a的结合位点.双荧光素酶报告基因实验证实,与对照组相比,miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-3' UTR共转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),而miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-mut-3'UTR共转染组细胞内荧光素酶活性无明显变化(P＞0.05),即SLUG为miR-18la的靶基因.转染SLUG siRNA可成功沉默SACC-LM细胞中内源性表达的SLUG,同时细胞的侵袭迁移能力明显下降(P＜0.05).结论 SLUG为miR-181a的靶基因.miR-181a可靶向调控SLUG,从而调控涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.     

肿瘤转移抑制基因nm23在涎腺腺样囊性癌表达的研究

目的：探讨肿瘤转移抑制基因nm23与涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)预后的关系。方法：采用免疫组织化学链亲和素法分析52例SACC的nm23表达,并分析nm23与SACC病理学分型、临床分期、局部复发、远处转移和患者生存率的关系。结果：nm23表达与SACC病理学分型、临床分期、局部复发和患者生存率无明显相关（P＞0．05）,而与远处转移呈高度负相关关系（P＜0．01）。结论：nm23能抑制SACC远处转移的发生,并可作为预后指标来预测SACC的远处转移,指导临床治疗。     

NDRG2对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭的影响

目的:探讨NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其对SACC-LM细胞增殖、侵袭的影响。方法:采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析唾液腺腺样囊性癌组织及癌旁组织样本中NDRG2的表达,采用RNA干扰技术降低腺样囊性癌细胞SACC-LM中NDRG2基因的表达,利用CCK-8实验及集落形成实验检测细胞增殖能力的变化,利用划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化,利用Western 免疫印迹实验检测侵袭标志蛋白以及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。采用SPSS 17.0软件包进行数据处理。结果:NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达低于癌旁组织（P=0.017）。在降低NDRG2基因的表达后,SACC-LM细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增强（P<0.05）,侵袭标志蛋白MMP2表达量显著升高（P=0.0004）,上皮标志物E-Caherin表达量显著降低（P=0.0229）,间充质标志物N-Cadherin表达量显著升高（P=0.0009）。结论:NDRG2基因在腺样囊性癌中低表达,降低NDRG2的表达可增强SACC-LM的增殖、迁移及侵袭能力。     

唾液腺腺样囊性癌中RASSF1A基因的表达

目的:研究唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)中RASSF1A基因的蛋白表达,并分析其与ACC临床病理参数之间的关系。方法:免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法分析57例唾液腺ACC和9例瘤旁腺体中RASSF1A基因的蛋白表达,根据染色强度和染色面积对每例病例进行评分,分为0(无)、1(弱)、2(中)、3(强)4个级别。应用SPSS13.0软件包分析RASSF1A蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分级、分期、复发、转移及患者预后之间的关系。结果:在ACC肿瘤组织的肌上皮和导管上皮的细胞质和细胞核中均见RASSF1A基因的蛋白表达。57例肿瘤组织中,21%(12/57)的病例中无RASSF1A基因的蛋白表达,47%(27/57)的病例中呈弱表达,23%(13/57)呈中度表达,9%(5/57)呈强表达。在瘤旁腺体中,RASSF1A均为强表达。统计学分析显示,RASSF1A基因的蛋白表达与肿瘤的TNM分期呈负相关(P=0.012)。RASSF1A蛋白表达低的患者,生存期显著低于表达高的患者(P=0.035)。结论:RASSF1A基因蛋白表达水平在ACC中下调,并与肿瘤分期及患者的生存期相关,提示RASSF1A基因可作为ACC患者肿瘤发展及预后判断的一个生物学标志物。     

三氧化二砷诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人涎腺腺样囊性(SACC)细胞的作用机制,寻找治疗SACC的新途径.方法 应用As2O3对SACC细胞株作用,以 MTT、软琼脂集落形成和形态学分析法观察细胞的变化.结果 三氧化二砷作用后,癌细胞异形性逐渐消失,细胞凋亡现象明显,可见凋亡小体.结论 As2O3对SACC细胞株具有显著的抑制增殖、诱导分化和促进凋亡作用.