葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨糖鞘脂合成代谢在肝细胞增殖中的可能作用机制。方法体外培养肝细胞株7702细胞,利用UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)si RNA转染肝细胞。采用MTT法检测细胞增殖,采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase 3基因水平,采用Western blot法检测肝细胞Caspase 3蛋白表达情况。结果 UGCG si RNA干扰组细胞糖化神经酰胺合成酶基因水平比对照组明显下调(P0.05);干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,转染组细胞Bcl-2 m RNA水平显著下降(P0.05),Bax m RNA水平显著升高,Caspase 3 m RNA及其蛋白表达水平均上调(P值均0.05)。结论糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖的过程中,这可能与BCL2/BAX调节的细胞信号通路有关。     

miR-21对HepG2细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响*

目的 研究miR-21对HepG2 细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养HepG2细胞,并将细胞分为增强组、抑制组和对照组,分别给予Lipofectamine 2000和Hsa-miR-21 mimics （50 nm/L）、Lipofectamine 2000和Has-miR-21 inhibitor（100 nm/L）转染或者给予Lipofectamine 2000处理干预。采用Western blot法检测B细胞异位基因2（BTG2）蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,使用流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡变化。结果 增强组细胞BTG2 蛋白表达水平最低,抑制组细胞BTG2 蛋白表达水平最高,对照组细胞BTG2蛋白表达水平强于增强组而低于抑制组,组间差异比较有统计学意义（P<0.05）;抑制组细胞增殖率较增强组和对照组明显降低（P<0.05）,增强组较对照组明显增强（P<0.05）;与增强组或对照组比,抑制组细胞周期S期明显减少（P<0.05）,而G2期则明显增多（P<0.05）,与对照组比,增强组S期明显增加,而G2期明显较少（P<0.05）;与增强组和对照组比,抑制组细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,而与对照组比,增强组细胞凋亡率显著减少（P<0.05）。结论 miR-21可能通过直接靶向调控BTG2表达而影响HepG2细胞的生长,可能成为干预肝癌生长的新途径。     

LPS诱导的HepG2细胞NOTCH与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的“会话”研究*

目的 探讨在脂多糖（LPS）刺激下HepG2细胞Notch与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的相互影响。方法 给予LPS处理HepG2细胞,提取细胞RNA,采用qRT-PCR法检测HepG2细胞Notch信号通路受体及其配体mRNA水平,给予γ分泌酶抑制剂（DAPT）、LPS或LPS联合DAPT处理细胞,采用Western blot法检测Notch受体胞内区域（NICD）和LPS-Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。结果 经LPS处理HepG2细胞后,Notch 1和Jag 1 mRNA水平分别升高了2.25倍（P<0.001）和2.47倍（P<0.001）,NOTCH 3仅增加的0.0700倍（P>0.05）,Jag 2仅增加了0.420倍（P>0.05）,Dll 4增加了0.947倍（P<0.01）,而NOTCH 2却降低了0.857倍（P<0.01）,NOTCH 4降低了0.283倍（P>0.05）,Dll 1降低了0.750倍（P<0.01）、Dll 3降低了0.393倍（P>0.05）;与对照组比,LPS处理组NICD和NF-κB蛋白表达水平显著增加,而DAPT处理组NICD和NF-κB蛋白表达显著减少。结论 本研究结果揭示了在LPS刺激下,HepG2细胞Notch与TLR4-NF-κB信号通路之间的相互作用,抑制Notch信号通路可以显著改善LPS-TLR4引起的炎症反应。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究*

目的 探讨微小RNA-363（miR-363）靶向调控E2F转录因子3（E2F3）的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果 对照组HepG2细胞增殖率为（96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组【（72.3±6.5）%,P<0.05】,凋亡率为（8.2±1.4）%,显著低于抑制剂处理组【（9.7±0.8）%,P<0.05】;对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.2）,P<0.05】,E2F3蛋白表达量为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.1）,P<0.05】,而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为（0.4±0.0）和（0.5±0.1）,均显著低于抑制剂处理组【（0.6±0.1）和（0.7±0.0）,P均<0.05】。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究*

目的 探讨冬凌草甲素（oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF） 小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-α mRNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果 模型组小鼠肝细胞凋亡率为（36.4±1.8） %,显著高于两个oridonin干预组的[（19.4±3.3）%和（11.4±0.3）%,P<0.01];模型组小鼠肝组织TNF-α mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个oridonin干预组肝组织TNF-α mRNA水平显著低于模型组（P<0.01）;模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异（P>0.01）。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

IL-6上调SCD1表达对HepG2细胞脂质合成功能的影响*

目的 探讨IL-6对HepG2细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶1 （SCD1）基因的影响及其SCD1基因表达的改变对细胞脂质合成的影响。方法 应用rIL-6刺激HepG2细胞,检测细胞内脂质合成以及细胞SCD1基因水平变化。分别构建人SCD1真核表达质粒和小干扰（small interfering） RNA,转染HepG2细胞,观察改变SCD1水平后HepG2细胞脂代谢相关基因表达的变化以及细胞内脂质合成的变化。结果 rIL-6刺激HepG2细胞甘油三酯水平显著高于对照组（P<0.05）;与空质粒组比,转染真核表达质粒细胞SCD1 蛋白表达增加,细胞脂质合成相关基因SREBP1c和FASN相对水平增加1.35倍和1.27倍,脂质氧化代谢相关基因PPARα和ASCL3水平降低12.3%和13.5%;细胞甘油三酯水平显著升高（P<0.01）,而转染small interfering RNA,再用rIL-6刺激HepG2细胞SCD1蛋白表达显著降低,细胞甘油三酯水平也显著降低（P<0.05）,脂质合成相关基因SREBP1c和FASN水平显著下降了32.3%和51.9%,脂质分解相关基因PPARα相对水平也下降了80%（P<0.05）,而ASCL3水平无显著变化（P=0.832）。结论 rIL-6通过上调HepG2细胞SCD1基因表达,引起细胞内脂质合成增加,导致甘油三酯含量增多。     

CIAPIN1对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察调控细胞因子诱导的凋亡抑制分子1（CIAPIN1）基因表达对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,并分析其作用机制。方法 分别构建重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体,感染HepG2细胞,获得稳定高表达和低表达CIAPIN1基因的细胞后,实验分为4组,即CIAPIN1高表达组、CIAPIN1低表达组、无关沉默RNA（siRNA）干扰组和空白对照组,检测各组细胞增殖及CIAPIN1基因和蛋白表达,使用流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blotting法检测cyclinD1、CDK4、cyclin E、CDK2水平以及总蛋白中IKKβ、磷酸化IKBα、p65和磷酸化p65水平。结果 CIAPIN1低表达组细胞增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞比例为（73.2±2.5）%,明显高于GIAPIN1高表达组【（58.8±2.2）%,P<0.05】、无关siRNA干扰组【（62.4±1.8）%,P<0.05】或空白对照组【（63.2±2.6）%,P<0.05】;CIAPIN1 高表达组cyclinD1、CDK4、CDK2、cyclinE相对表达量明显高于其它各组,差异有统计学意义（P<0.05）;CIAPIN1高表达组磷酸化IKBα、磷酸化P65相对表达量分别为（1.335±0.182）和（0.731±0.106）,明显高于GIAPIN1低表达组【（0.108±0.035）和（0.028±0.010）,P均<0.05】、无关siRNA干扰组【（0.251±0.082）和（0.318±0.058）,P均<0.05】或空白对照组【（0.238±0.067）和（0.322±0.061）,P均<0.05】。结论 CIAPIN1对肝癌细胞增殖有促进作用,可能与其对NF-кB信号通路的激活作用有关。     

肝细胞癌患者IL-18基因-137G/C和-607A/C位点单核苷酸多态性变化及其意义探讨*

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者白细胞介素-18（IL-18）基因-137G/C和-607A/C位点单核苷酸多态性（SNP）的变化。方法 在178例伴有HBV感染的HCC患者和251例健康人,取外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）行基因分型,测定IL-18基因-137G/C和-607A/C位点SNP。结果 HCC患者和健康人IL-18-37 G/C基因GG基因型、GC基因型和CC基因型分布频率分别为75.3%对47.0%（P<0.05）、20.8%对51.4%（P<0.05）和3.9%对1.6%（P>0.05）,G等位基因和C等位基因分布频率分别为93.6%对72.7%（P<0.05）和6.4%对27.3%（P<0.05）;HCC患者和健康人IL-18-607A/C位点AA基因型、AC基因型和CC基因型分布频率分别为37.6%对13.5%（P<0.05）、43.3 %对66.9%（P<0.05）和19.1%对19.5%（P>0.05）,A等位基因和C等位基因分布频率分别59.3%对47.0%（P<0.05）和40.7%对53.0%（P<0.05）;HCC组IL-18-137G/C位点的GG基因和G等位基因频率显著高于健康人（P<0.05）,HCC组IL-18-607A/C位点的AA基因和A等位基因频率也显著高于健康人（P<0.05）,提示携带IL-18-137G/C和IL-18-607A/C位点基因型和A等位基因者罹患HCC的风险增加。结论 携带IL-18基因-137G/C位点GG基因型和G等位基因以及-607A/C位点AA基因型和A等位基因者可能更容易发生HCC,对HBV感染者筛查这些基因可能有助于早期发现肝肿瘤,以利于早期处理和改善预后。     

乙型肝炎相关性肝细胞癌患者预后的多因素分析*

目的 探讨影响乙型肝炎相关性肝细胞癌（HCC）患者预后的因素。方法 2008年1月~2015年11月在上海瑞金医院确诊和治疗的乙型肝炎相关性HCC患者469例,根据血清HBV DNA水平将患者分为高病毒载量组（HBV DNA≥1×10⁴ copies/ml）和低病毒载量组（HBV DNA<1×10⁴copies/ml）,比较两组患者肝功能、甲胎蛋白、应用核苷或核苷酸类（NAs）治疗、巴塞罗那分期对生存时间的影响。结果 在入组的469例患者中,低病毒载量组243例（51.8 %）,高病毒载量组226 例（48.2 %）;低病毒载量组平均年龄为54±10岁,高病毒载量组平均年龄为52±10岁,无显著差异（P>0.05）;在低病毒载量组中男性213例（87.7%）,女性30例（12.3%）,而在高病毒载量组中分别为205例（90.7 %）和21例（9.2 %,P>0.05）;低病毒载量组血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平显著低于高病毒载量组（P<0.05）;低病毒载量组平均生存时间为（1144±732） d,显著长于高病毒载量组[（496±278） d,P<0.05];单因素分析发现影响乙型肝炎相关性HCC患者预后的因素包括是否接受NAs抗病毒治疗（P<0.01）、血清AFP≥40 μg/L（P<0.05）、血清 ALT≥64 IU/L（P<0.01）、血清AST≥40 IU/L（P<0.001）、血清总胆红素≥24 μmol/L（P<0.001）、血清直接胆红素≥6.8 μmol/L （P<0.001）、血清HBV DNA≥1×10⁴ copies/ml （P<0.001）;经多因素分析,发现BCLC 分期为晚期（HR为1.84,CI 为1.57~2.15,P<0.001）、未接受NAs治疗（P<0.01）、血清AST≥40 IU/L（P<0.05）和HBV DNA≥1×10⁴ copies/ml （P<0.001）为影响乙型肝炎相关性HCC预后的独立危险因素。结论 HCC患者的预后受到多种因素的影响,其中血清病毒载量和是否接受NAs抗病毒治疗极其重要。     

UDCA联合维生素D治疗原发性胆汁性肝硬化患者外周血T细胞亚群变化及其对疗效的影响

目的 探讨补充外源性维生素D辅助熊去氧胆酸（UDCA）治疗原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血T细胞亚群的变化及其效果。方法 2014年1月~2015年12月我院收治的PBC患者92例,采用随机数字表法均分为两组,每组46例。对照组常规应用UDCA治疗,观察组采用口服维生素D联合UDCA治疗。使用美国Roche E-602全自动免疫分析仪及其配套试剂检测外周血25-羟基维生素D[25（OH）D],使用流式细胞术检测外周血CD4⁺Treg和Th17细胞水平。结果 治疗前两组实验室检测指标水平差异无统计学意义（P>0.05）;治疗1年后,观察组外周血25（OH）D为（18.2±6.8） ng/ml,明显高于对照组【（15.1±5.0） ng/ml,P<0.05】,Th17细胞占比为（1.4±0.4）%,明显低于对照组【（2.0±0.5）%,P<0.05】,CD4⁺Treg细胞占比为（3.5±0.8）%,明显高于对照组【（3.1±0.4）%,P<0.05】,外周血丙氨酸氨基转移酶（ALT）为（41.8±31.5） U/L,明显低于对照组【（68.8±33.5） U/L,P<0.05】,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）为（37.5±30.7） U/L,明显低于对照组【（68.2±35.3）U/L,P<0.05】,碱性磷酸酶（ALP）为（131.7±62.8） U/L,明显低于对照组【（237.7±105.8） U/L,P<0.05】,γ-谷氨酰转肽酶（GGT）为（71.8±35.8）U/L,明显低于对照组【（121.7±41.2）U/L,P<0.05】;治疗前后血清25（OH）D水平与CD4⁺Treg细胞占比呈正相关（P<0.05）,而CD4⁺Treg细胞与GGT和ALP水平呈正相关（P<0.05）。结论 补充外源性维生素D有助于改善PBC患者病情,可能与其对CD4⁺Treg细胞的激活作用有关。     

γ-谷氨酰转肽酶/血小板比值对血清转氨酶正常的慢性HBV感染者肝纤维化的预测价值分析*

目的 探讨γ-谷氨酰转肽酶/血小板比值(GPR)预测转氨酶正常的慢性HBV感染者肝纤维化分期的价值。方法 2010年~2016年我院诊治的血清转氨酶正常的慢性HBV感染者202例,经肝活检诊断肝纤维化,计算GPR、AST与PLT比值指数（APRI）和基于4因素的肝纤维化指数（FIB-4）预测明显肝纤维化（≥F2）、进展期肝纤维化（≥F3）和早期肝硬化（F4）的效能。应用ROC曲线下面积（AUC）判断诊断效能。结果 经肝组织病理学检查,本组发现F1、F2、F3和F4 分别为82例、60例、39例和21例;F4组GPR、APRI和FIB-4分别为0.4（0.2,1.0）、（0.6±0.2）和1.6（0.9,1.8）,而F3组分别为0.2（0.2,0.4）、（0.6±0.2）和0.9（0.9,1.2）,F2组则分别为0.2（0.1,0.3）、0.4±0.2和0.9（0.7,1.3）,差异显著（P<0.05）;GPR预测明显肝纤维化（≥F2）、进展期肝纤维化（≥F3）和早期肝硬化（F4）的AUC分别是0.739、0.790和0.824,显著高于APRI（分别为0.547、0.731和0.736,P<0.05）;GPR预测肝纤维化≥F3的AUC为0.790,显著高于FIB-4（0.748,P<0.05）,而FIB-4预测肝纤维化≥F2的AUC为0.777,显著高于GPR（0.739,P<0.05）,FIB-4和GPR预测肝硬化（F4）的效能之间无显著性差异（分别为0.824和0.792,P>0.05）。结论 GPR可以预测转氨酶正常的慢性HBV感染者肝纤维化分期,其效能优于APRI,而与FIB-4相比,各有优缺点。GPR可以作为对转氨酶正常的慢性HBV感染者肝纤维化一个无创生化预测指数。     

茵栀黄口服液对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脂肪变的保护作用研究*

目的 探讨茵栀黄口服液对蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝脂肪变的保护作用。方法 将30只大鼠随机均分为对照组、MCD组和茵栀黄灌胃组。给予对照组普通饮食,给予另两组动物MCD饮食,于第4周末开始分别给予生理盐水或茵栀黄口服液灌胃,第8 w末处死大鼠。取肝组织行病理学检查。取血,使用全自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶 （AST）、总胆红素（TBIL）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、空腹血糖（FBG）。结果 对照组和MCD组大鼠体质量分别为【（487.2±6.5）g和（155.8±3.1）g,P<0.05】,肝指数分别为【（2.92±0.06）%和（5.09±0.19）%,P<0.05】;MCD组大鼠肝组织出现明显的肝脏脂肪变、小叶炎症和气球样变,同时伴有轻度纤维化,茵栀黄处理组大鼠肝指数为（4.47±0.18）%,显著低于MCD组（P<0.05）;茵栀黄组和MCD组大鼠肝组织NAFLD活动度积分（NAS）分别为【（5.9±0.2）分和（7.2±0.1）分,P<0.05】,肝纤维化积分为【（0.3±0.2）分和（0.8±0.2）分,P<0.05】;茵栀黄组和MCD组大鼠血清ALT水平分别为【（68.4±6.4） U/L和（111.9±5.5） U/L,P<0.05】,AST分别为【（110.5±7.9） U/L和（170.5±10.8） U/L,P<0.05】,但是茵栀黄口服液灌胃对MCD大鼠血脂和血糖无显著影响。结论 茵栀黄口服液可以改善MCD诱导的NASH大鼠肝脏脂肪变、肝细胞气球样变、小叶炎症和纤维化,降低NASH大鼠血清转氨酶水平,为应用茵栀黄口服液处理NAFLD提供了实验依据。     

Possible mechanism for hepatitis B virus X gene to induce apoptosis of hepatocytes

AIM: To investigate the possible mechanism for HBV X gene to induce apoptosis of hepatocyte HL-7702 cells. METHODS: HBV X gene eukaryon expression vector pcDNA3-X was established and transfected into HL-7702 cells by Iipid-mediated transfection, including transient and stable transfection. Positive clones were screened by incubating in the selective medium with 600 μg/mL G418 and named HL-7702/HBV-encoded X protein (HBx) cells. The expressions of Fas/FasL, Bax/Bcl-2, and c-myc mRNA were measured by semi-quantitative RT-PCR in HL-7702/HBx and control group, respectively. RESULTS: RT-PCR analysis confirmed that HBV X gene was transfected into HL-7702 cells successfully. By semi-quantitative RT-PCR analysis, Bax and c-myc mRNA levels in HL-7702/HBx cells of transient transfection were significantly higher than those in control, FasL and c-myc mRNA levels in HL-7702/HBx cells of stable transfection were significantly higher than those in control, whereas the Bcl-2 mRNA levels in HL-7702/HBx cells of transient and stable transfection were significantly lower than those in control. CONCLUSION: HBV X gene may promote the apoptosis of hepatocytes by regulating the expressions of Fas/FasL, Bax/Bcl-2, and c-myc gene in a dose-dependent manner.     

弓形虫ROP16蛋白在人白血病细胞THP-1表达及对其细胞增殖与凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨弓形虫Ⅱ型(Me49)ROP16蛋白在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中的表达及其对THP-1细胞增殖与凋亡的影响。方法构建过表达ROP16(overExp-ROP16)和空载体(overExp-NC)慢病毒,通过转染THP-1细胞,72 h后观察荧光表达情况,采用PCR与Western blot验证ROP16在THP-1细胞中的表达。免疫荧光技术检测ROP16蛋白在THP-1细胞中的定位。CCK-8与流式细胞术检测细胞增殖及凋亡。采用qRT-PCR检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA相对表达水平。Western blot检测Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达变化。结果构建的过表达ROP16重组慢病毒转染到THP-1细胞后,可观察强荧光信号,ROP16蛋白在THP-1细胞中成功表达。免疫荧光结果表明ROP16蛋白定位于THP-1细胞核。CCK-8与流式细胞术证实ROP16蛋白抑制THP-1细胞的增殖并促进其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比,过表达组促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA高表达(P<0.05),抗凋亡因子Bcl-2 mRNA低表达(P<0.01),Bax与Cleaved-Caspase-3蛋白水平上调(P<0.01),Bcl-2与Pro-Caspase-3蛋白水平下调(P<0.01)。结论构建的慢病毒表达质粒overExp-ROP16可在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中表达且通过入核调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3而抑制THP-1细胞增殖,促进其凋亡。     

基于数据库分析肝细胞癌细胞XPO5基因水平变化及其临床意义*

目的 利用数据库分析肝细胞癌(HCC)组织核转运蛋白XPO5基因水平及其与患者预后的关系。方法 在Oncomine数据库,分析HCC组织XPO5基因水平,并在GEPIA数据库中选择TCGA数据进行验证。在MethHC数据库分析HCC组织XPO5基因甲基化水平。在GEPIA的TCGA数据库,分析XPO5基因水平对HCC患者生存期的影响以及不同病理学分级的HCC组织XPO5基因水平差异。在STRING数据库分析与XPO5相互作用的蛋白种类。结果 与正常肝组织比,HCC组织XPO5基因呈高水平（P<0.01）,且在病理学分级为III级组织XPO5基因水平最高;HCC组织XPO5基因高水平患者总体生存期和无病生存期较低水平患者显著缩短,差异具有统计学意义（P<0.01）;HCC组织XPO5基因较正常肝组织甲基化水平显著降低,差异具有统计学意义（P<0.005）,甲基化降低区域主要位于基因体区域;蛋白相互作用网络分析显示,XPO5与DICER1和RAN等蛋白相互作用,并参与了miRNA的调控。结论 XPO5基因在HCC组织中呈高水平状态,这种高水平状态可能与癌组织不同病理学分级有关,并影响患者的生存期。采用数据库进一步挖掘分析研究结果可能为临床采用生物学方法HCC患者提供参考依据。     

聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平变化*

目的 研究聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平的变化。 方法 2014年1月~2016年1月我院收治的184例慢性乙型肝炎患者,92例接受聚乙二醇干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗48 w,另92例只接受恩替卡韦治疗。使用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群,采用放射免疫法检测血清IL-6、INF-ɑ、IL-4,采用酶联免疫吸附法检测血清IL-17、TGF-β1和HBV标记物,采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA、核转录因子RORγt、Foxp3、IL-17mRNA。 结果 在停药随访24 w,联合组与恩替卡韦组血清HBV DNA阴转率分别为86.96%和84.78%（P>0.05）;联合组血清HBeAg阴转率为28.89%（13/45）,与恩替卡韦组的15.22%（7/46）比,无显著性差异（P>0.05）;联合组血清ALT水平为（34.6±11.6） U/L,显著低于恩替卡韦组【（64.6±20.5） U/L,P<0.05】;联合组外周血CD3+、CD4+细胞和CD4+/CD8+比值分别为（75.6±14.5）%、（42.7±10.3）%和（1.4±0.6）,显著高于恩替卡韦组【（66.8±14.4）%、（36.7±8.5）%和（1.0±0.5）,P<0.05】,CD8+细胞百分比为（29.3±7.3） %,显著低于恩替卡韦组【（34.8±8.5） %,P<0.05】,两组NK细胞百分比比较无显著性差异（P>0.05）;治疗前两组血清IL-6、IL-17、IL-4、INF-ɑ、TGF-β1水平比较无显著性差异（P>0.05）,治疗后联合组血清IL-6水平为（6.8±1.2）pg/ml,显著高于恩替卡韦组【（3.5±0.8） pg/ml,P<0.05】,IL-17水平为（0.7±0.3） pg/ml,显著低于恩替卡韦组【（2.8±0.9） pg/ml,P<0.05】,IL-4水平为（1.4±0.5）pg/ml,显著低于恩替卡韦组【（3.8±1.5）pg/ml,P<0.05】,INF-ɑ水平为（4.0±1.3） pg/ml,显著高于恩替卡韦组【（2.6±0.9）pg/ml,P<0.05】,两组血清TGF-β1水平比较无显著性差异（P>0.05）;治疗前两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比较无显著性差异（P>0.05）,治疗后联合组血清RORγt水平为（0.86±0.31）,显著低于恩替卡韦组【（1.56±0.43）,P>0.05】,而两组血清Foxp3和IL-17mRNA水平比较无显著性差异（P>0.05）。 结论 聚乙二醇干扰素α-2b能通过调控细胞因子和核转录因子水平,从多个环节调控慢性乙型肝炎患者免疫功能,发挥抗病毒作用。     

小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用*

目的 探讨小檗碱（BBR）对脂多糖（LPS）刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法 体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组：①对照组（培养基）;②LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml）;③BBR组（培养基+BBR 10 μM）;④BBR/LPS组（培养基+LPS 2 μg/ml+BBR 10μM）。在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western-blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达。结果 在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为（683.3±98.9）μg/ml和（849.0±89.7）μg/ml)以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义（P>0.05）;与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度（1886±176.0 μg/ml）显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度（1071.0±65.9 μg/ml）显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱。结论 BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性。     

肝源性糖尿病患者肝组织干扰素诱导蛋白-10表达变化*

目的 观察肝源性糖尿病患者肝组织和血清干扰素诱导蛋白-10（IP-10）水平变化,并分析其在肝源性糖尿病发病过程中的可能作用。方法 2016年3月~2018年5月我院诊治的乙型肝炎肝硬化并发肝源性糖尿病患者70例和不伴有糖尿病的乙型肝炎肝硬化患者70例,采用ELISA法检测血清IP-10水平,采用PCR法和免疫组化法分别检测肝组织IP-10 mRNA水平和蛋白表达。结果 伴有糖尿病的肝硬化血清IP-10水平为（236.59±28.30） pg/mL,显著高于不伴有糖尿病的肝硬化患者【（205.31±26.92） pg/mL,P<0.001】;糖尿病患者肝组织IP-10 mRNA水平为（0.59±0.91） lg copies/ml,显著高于肝硬化患者【（0.21±0.66） lg copies/ml,P<0.05】,差异具有统计学意义;糖尿病患者肝组织IP-10表达阳性率为31.4%,显著高于肝硬化患者的12.9%,差异具有统计学意义（x2=7.002,P<0.05）。结论 乙型肝炎肝硬化并发肝源性糖尿病患者血清和肝组织IP-10水平显著升高,其意义还有待于进一步探讨。     

血清前白蛋白和MELD评分对失代偿期乙型肝炎肝硬化患者预后的预测价值*

目的 研究应用血清前白蛋白（PA）水平联合终末期肝病模型（MELD）评分预测失代偿期乙型肝炎肝硬化患者预后的临床价值。方法 2015年12月~2016年12月我院治疗的失代偿期乙型肝炎肝硬化患者231例,随访6个月。常规检测血清PA水平、计算MELD评分和Child-Pugh评分（CTP评分）,在MELD评分的基础上,加入PA项目的 评分,建立MELD联合PA评分模型。应用受试者工作特征曲线（ROC）分析各指标对患者死亡的预测效能。结果 在随访的6个月里,死亡83例;死亡组血清PA水平为（32.2±9.3）mg/L,显著低于生存组的[（47.3±26.4） mg/L,P<0.05];死亡组MELD评分为（24.1±5.6）分,明显高于生存组的[（18.0±6.7）分,P<0.05];死亡组CTP评分为（11.8±1.2）分,明显高于生存组的[（9.0±2.0）分,P<0.05];ROC曲线分析结果显示,MELD评分预测死亡的ROC下面积（AUC）为0.868（95%CI：0.823~0.912）,显著高于CTP评分的[0.753（95%CI：0.690~0.816）,P<0.05]或血清PA的[0.675（95%CI：0.606~0.743）,P<0.05];进一步采用MELD联合PA评分分析的AUC为0.896（95%CI：0.857~0.935）,显著高于MELD评分（P<0.05）。结论 应用血清PA联合MELD评分对失代偿期乙型肝炎肝硬化患者6个月内死亡的预测效能显著高于MELD评分或CTP评分,其临床应用价值还需要扩大验证。