金银花多糖的指纹图谱及体外抗病毒活性研究

目的:建立金银花多糖的指纹图谱,并考察其对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抑制作用。方法:通过水提、二次醇沉制备金银花多糖;所得多糖经三氟乙酸水解和盐酸羟胺、吡啶等衍生化后,采用气相色谱法(GC)建立指纹图谱。色谱柱为HP-5毛细管色谱柱,检测器为火焰离子化检测器,进样口温度为250℃,检测器温度为300℃,程序升温,载气为氮气(流速50 mL/min),分流进样(分流比60∶1),进样量为2.0μL。以鼠李糖为参照,绘制12批金银花药材样品(S1～S12)的GC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价并确定共有峰;采用SPSS 21.0软件进行聚类分析和主成分分析。以利巴韦林为阳性对照,以半数有效浓度(EC50)、治疗指数(TI)为指标,采用MTT法考察金银花多糖对RSV的体外抑制作用。结果:12批金银花药材样品的GC指纹图谱有12个共有峰,相似度≥0.994;共指认鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、肌醇六乙酸酯等7个共有峰。12批药材样品共聚为两类,即S1、S7、S10、S11聚为一类,其余聚为一类;主成分分析中,3个主成分的特征值...     

琼枝麒麟菜多糖抗单纯疱疹病毒2型活性研究

目的：探讨琼枝麒麟菜多糖（EGP）抗单纯疱疹病毒2型（HSV-2）的活性及其作用机制。方法：采用观察细胞病变效应（CPE）法和MTT法评价EGP对Vero细胞的毒性。空斑减数实验检测EGP对HSV-2的综合抗病毒活性、直接灭活作用、吸附及穿刺过程的抑制作用、和感染后的治疗作用。Real-time PCR检测EGP对HSV-2基因表达及其DNA复制的影响。结果： EGP浓度低于125 μg/mL对Vero细胞无毒性。EGP具有较强的综合抗病毒活性,在实验所用最低浓度（1.95 μg/mL）下,EGP可达到80 %的HSV-2病毒抑制率。EGP对HSV-2具有很强的直接灭活和抑制吸附作用,治疗作用相对较弱。同时,EGP可以下调HSV-2早期基因UL52和晚期基因UL27的表达,但是对病毒的DNA复制过程无影响。结论：麒麟菜多糖具有显著的抗HSV-2感染活性,主要通过干扰病毒对细胞的粘附、侵入而发挥作用。     

醇析水提法提取金银花多糖

目的探讨水提醇沉法提取金银花多糖的最佳工艺。方法用正交设计法研究影响金银花多糖提取的因素，用硫酸 苯酚法测定金银花多糖的相对百分含量。结果金银花多糖的最佳提取工艺为水浸提2 h，浸提温度90 ℃，氯仿萃取1次，沉析用乙醇浓度为80%。结论该工艺适合金银花多糖的提取，为深入研究金银花多糖提供了基础。     

多糖抗病毒作用的研究概况

目的：综述近年来多糖的抗病毒作用及其作用机制。方法：通过各种多糖对多种病毒的作用．阐述其作用机制。结果：多糖对多种病毒具有一定的抑制作用。且不良反应小。结论：多糖是一种高效、低毒的抗病毒成分．具有广阔的应用前景。     

盾果藻Carpopeltis affinis多糖的提取分离、理化性质及抗病毒活性研究

目的 采用不同方法提取盾果藻(Carpopeltis affinis)中多糖,对其理化性质和结构进行分析,并初步评价其抗病毒活性。方法 依次通过冷水、热水(80 ℃)和2% NaOH溶液提取盾果藻多糖,通过硫酸苯酚、离子色谱法、PMP柱前衍生高效液相色谱法等对其总糖、硫酸根含量、单糖组成等进行分析,利用核磁共振波谱技术初步探究其结构。通过CPE和假病毒抑制实验初步探究其抗病毒活性。结果 3种多糖CCAP(冷水提取)、HCAP(热水提取)、ACAP(2% NaOH提取)均主要含硫酸半乳糖,热水浸提的HCAP得率及纯度较高,且主要为τ-卡拉胶。抗病毒活性研究表明HCAP对流感病毒、疱疹病毒和新冠假病毒具有显著的抑制作用,其中对H1N1株Influenza(A/Virginia/ATCC1/2009)的抑制作用最为显著(IC₅₀=0.03 μg.mL^_-1,SI>66666.6)。结论 热水提取获得的盾果藻多糖为τ-卡拉胶,其对多种病毒均具有显著的抑制作用,本研究结果丰富了海洋糖库,为海洋抗病毒药物的开发提供了理论基础。     

牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性

从中药牛膝中提取得到的一种新多糖化合物一牛膝多糖,用不同的硫酸化试剂合成牛膝多糖硫酸酯。研究了最佳反应条件,其产物水溶性好,呈中性,最高产率达82.11%,取代度(Ds)···达到三以上,硫含量达21%以上。根据牛膝多糖的分子结构,多糖分子中的羟基已最大限度地被酯化。体外抗病毒试验初步表明牛膝多糖硫酸酯有很强的抑制乙型肝炎病毒HBsAg和HBeAg的活性,对I型单纯性疱疹病毒也有明显的抑制力。     

海洋硫酸多糖PAE的结构和抗病毒活性研究

目的 对肠浒苔来源的硫酸多糖的结构和抗病毒活性进行研究。 方法 通过稀碱提取法,从肠浒苔中提取硫酸多糖,采用强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱对多糖进行分离纯化;采用高效液相色谱(HPLC)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、傅里叶变换红外光谱(IR)以及气质联用色谱(GC-MS)方法对多糖的结构进行表征;采用细胞病变效应测定PAE对不同病毒的抑制率。 结果 从肠浒苔中分离得到多糖PAE,其分子量为13.98 kDa,主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸和木糖构成,糖链主要由(1→4)-Rhap,(1→3,4)-Rhap,(1→2,4)-Rhap,Xylp(1→和(1→4)-Glcp组成,硫酸根主要位于(1→4)-Rhap 的C-2或C-3位以及Xylp(1→的C-4位上,PAE具有良好的抗病毒活性,特别是对呼吸道合胞体病毒的抑制率较高。 结论 海洋多糖PAE是一种结构新颖的由鼠李糖、葡萄糖醛酸和木糖组成的硫酸多糖,具有良好的抗病毒活性。     

半枝莲多糖的提取纯化及抗氧化活性研究

目的研究半枝莲多糖的分离纯化及抗氧化作用。方法采用正交试验L9(34)对半枝莲多糖提取工艺进行优化,并利用DEAE-Cellulose-52和Sepharose 4B柱色谱进一步纯化多糖组分;分光光度法测定半枝莲多糖对小鼠红细胞溶血、小鼠血清、肝组织中的超氧化物岐化酶(SOD)活力以及过氧化产物丙二醛(MDA)生成的影响。结果半枝莲多糖提取工艺的最佳条件为温度70℃,提取6 h,料水比1∶30,温度是提取多糖的关键影响因素。抗氧化活性实验表明半枝莲多糖的两个组分SBPW、SBPS在一定浓度范围内均能降低化学法诱导的红细胞溶血和肝组织过氧化物损伤;能剂量依赖性提高小鼠血清、肝组织中的SOD活力,降低小鼠血清、肝组织中MDA的水平。结论SBPW和SBPS具有较好的抗氧化作用。     

带形蜈蚣藻硫酸多糖的提取、分析及其抗病毒活性

目的提取带形蜈蚣藻硫酸多糖,研究其理化性质和抗病毒活性。方法用热水浸提、乙醇沉淀法提取带形蜈蚣藻硫酸多糖、再经DEAE C-52纤维素离子交换柱层析得到2个较纯组分。并对其进行了单糖组成和硫酸基含量等理化性质分析。采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)抑制法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,研究带形蜈蚣藻多糖的抗病毒活性。结果带形蜈蚣藻多糖主要由半乳糖组成,还含有少量的葡萄糖、木糖等,其硫酸基含量达到15%以上;该多糖具有较好的抗病毒活性,其中经提纯的两个组分抗HSV-1对细胞病变的半抑制浓度(IC50)分别为7.81,3.91μg.mL-1,选择(指数)SI值分别大于128,256。结论带形蜈蚣藻硫酸多糖抗CoxB3和HSV-1病毒活性均比较好。     

金银花多糖对脾淋巴细胞的增殖作用

目的研究金银花多糖对脾淋巴细胞的增殖作用。方法用MTT法体外观察金银花多糖在不同浓度对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果金银花多糖在浓度10～250μg／ml时可显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,以浓度100μg／ml时作用最为明显。结论金银花多糖体外具有免疫促进作用。     

The relationship between the antiviral activity of 5'-amino-5'-deoxythymidine and its incorporation into herpes simplex virus type 1 DNA

As part of our studies on the molecular basis for the antiherpes activity of 5'-AdThd (5'-amino-5'-deoxythymidine), a study of the HSV-1 DNA synthesized in infected Vero cells exposed to 5'-AdThd was undertaken. Unlike many other antiviral nucleoside analogs, 5'-AdThd did not inhibit HSV-1 DNA synthesis. Analysis of the DNA synthesized in the presence of [14C]5'-AdThd revealed that the analog was incorporated into the viral DNA in a dose-dependent manner and that the degree of incorporation correlated with the antiviral activity as measured by yield reduction assays. Analysis of the 5'-AdThd substituted DNA by centrifugation in neutral and alkaline sucrose gradients revealed no double-stranded breaks but an increase in single-stranded breaks, at very high concentrations of the analog. Analysis of HSV-1-specific RNAs revealed a shift from poly(A+) to poly(A-) RNA. The degree of this shift paralleled the substitution of 5'-AdThd for thymidine in the HSV-1 DNA.     

金银花类药用植物FatB基因克隆和生物信息学分析

从忍冬(Lonicera japonica Thunb.)转录组测序结果中分析获得1个FatB基因。分别以忍冬、红白忍冬(Lonicera japonica Thunb.var.chinensis(Wats.)Bak.)、红腺忍冬(Lonicera hypoglauca Miq.)和水忍冬(Lonicera dasystyla Rehd.)新鲜花蕾为材料,利用RT-PCR技术克隆获得了LJFatB、LHFatB、LJCFatB、LDFatB基因的全长cDNA,并进行生物信息学分析。结果表明LJFatB、LJCFatB、LHFatB和LDFatB与拟南芥AtFatB具有较近的亲缘关系。LJFatB、LJCFatB、LHFatB和LDFatB的核苷酸序列、蛋白特性及其二级结构有所差异,但其蛋白均具有保守的FatB底物结合位点和催化活性位点,且在花蕾中的转录水平没有显著差异。因此推测LJFatB、LJCFatB、LHFatB和LDFatB可能具有与AtFatB相同的生物学功能。     

红白忍冬的染色体及核型分析

目的对红白忍冬[Lonicera japonica Thunb.var.chinensis(Wats.)Bak.]的染色体数目和核型进行研究。方法采用常规制片方法,经显微摄影后对染色体进行分析。结果红白忍冬的体细胞染色体数目2n=18,核型公式为K(2n)=2x=18=2m+12sm(2SAT)+4st(4SAT),染色体相对长度组成为2n=18=4L+2M2+10M1+2S,染色体总长为31.269μm,长臂总长为21.963μm,核型不对称系数(AS.K)为70.24%,属于"3B"型。结论红白忍冬体细胞染色体的数目、核型等清晰准确。     

Qualitative analysis of the chemical constituents of Lonicera japonica and its tetraploid cultivar Jiufengyihao

In the present study, we, for the first time, developed an UPLC-IT-TOF/MS method to compare the chemical constituentsof the flower buds of Lonicera japonicaThunb. (Jinyinhua, JYH, in Chinese) and its tetraploid cultivar Jiufengyihao (JFYH). The samples were separated on a C₁₈ ultra-column (100 mm×2.1 mm, 1.8 μm) eluted with a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid using a gradient program. Based on the accurate masses, fragmental MS² ions and fragmentation pathway, we unambiguously affirmed or tentatively identified 30 compounds, including 11 phenolic acids, 10 iridoid glycosides, 8 flavonoids and 1 saponin, from JYH and JFYH. Among them, all compounds were detected in Lonicera japonica, but only 21 compounds were detected in JFYH. In addition, the relative contents of the 21 common chemical constituents were also different in JYH and JFYH, suggesting an obvious chemical difference between JYH and JFYH.     

忍冬叶的化学成分

目的研究忍冬(Lonicera japonica Thunb.)叶中的化学成分。方法采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析鉴定了其化学结构。结果从忍冬叶的体积分数为75%的乙醇溶液提取物中分离得到4个化合物,并鉴定其结构为:似梨木双黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(ochnaflavone,1)、似梨木双黄酮(ochnaflavone7-O-β-D-gluco-pyranoside,2)、次大风子素(hydnocarpin,3)、忍冬苷(lonicerin,4)。结论化合物2为一新化合物,化合物3,4为首次从该植物叶中分离得到。     

Aromatic glycosides from the flower buds of Lonicera japonica

Six new glycosides (1–6) have been isolated from the flower buds of Lonicera japonica. Their structures including the absolute configurations were determined by spectroscopic and chemical methods as ( ? )-2-hydroxy-5-methoxybenzoic acid 2-O-β-d-(6-O-benzoyl)-glucopyranoside (1), ( ? )-4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoic acid 4-O-β-d-(6-O-benzoyl)-glucopyranoside (2), ( ? )-(E)-3,5-dimethoxyphenylpropenoic acid 4-O-β-d-(6-O-benzoyl)-glucopyranoside (3), ( ? )-(7S,8R)-(4-hydroxyphenylglycerol 9-O-β-d-[6-O-(E)-4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenylpropenoyl]-glucopyranoside (4), ( ? )-(7S,8R)-(4-hydroxy-3-methoxyphenylglycerol 9-O-β-d-[6-O-(E)-4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenylpropenoyl]-glucopyranoside (5), and ( ? )-4-hydroxy-3-methoxyphenol β-d-{6-O-[4-O-(7S,8R)-(4-hydroxy-3-methoxyphenylglycerol-8-yl)-3-methoxybenzoyl]}-glucopyranoside (6), respectively.     

忍冬叶中黄酮类成分的分离与鉴定

目的为忍冬(Lonicera japonicaThunb.)叶中黄酮类化学成分药效学物质基础提供依据。方法采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等对忍冬叶进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从忍冬叶75%乙醇提取物中分离得到7个黄酮类化合物,并鉴定其结构分别为5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(5,7,4′-trihydroxy-8-me-thoxyflavone,1)、木犀草素(luteolin,2)、苜蓿素(tricin,3)、山萘酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-7-O-β-D-glucopyranoside,4)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glu-copyranoside,5)、洋芹素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside,6)、香叶木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(diosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside,7)。结论化合物1、4为首次从忍冬属植物中分离得到,化合物3、6、7为首次从植物忍冬中分离得到。     

金银花总黄酮粗提物体外抑菌作用研究

目的:考察金银花总黄酮粗提物对临床主要致病菌的体外抑菌作用。方法:以DM130大孔吸附树脂为固定相,经不同浓度的乙醇梯度洗脱金银花水煎液得到各组分(水洗含糖较多组分为A、含糖较少组分为B,20%洗脱组分为C,40%洗脱组分为D,60%洗脱组分为E),测定各组分对临床主要致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:组分B对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,MIC值为1mg·mL-1。结论:B组分对临床主要致病菌有较强的抑制作用。     

EV71非结构蛋白的结构和功能及其为靶点的药物研究进展

近年肠道病毒71型(EV71)等引起的手足口病在中国大陆呈现上升的流行趋势,其正链的RNA基因组翻译成一个多聚蛋白,进一步自剪切为结构蛋白和非结构蛋白;随着研究的深入,非结构蛋白在病毒生命周期中的功能逐一被鉴定,本文就EV71非结构蛋白的结构功能及针对这些靶点的抗病毒药物进行综述。