FBXW7调控非小细胞肺癌上皮间质转化的作用机制

目的:研究FBXW7在非小细胞肺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)过程中发挥的作用。方法:收集100对非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织,利用免疫组化检测FBXW7在癌组织和癌旁组织中的表达。利用Western blot检测FBXW7在细胞系中的表达及FBXW7对EMT部分标志蛋白的影响。利用Transwell实验检测FBXW7对NSCLC细胞迁移能力的影响。免疫共沉淀实验和泛素化的Western blot验证FBXW7与Snail1的关系。结果:FBXW7在NSCLC组织中的表达明显低于对应癌旁组织中的表达。FBXW7在正常肺上皮细胞中的表达也明显高于4种非小细胞肺癌细胞系中的表达。FBXW7过表达显著抑制A549细胞的迁移能力。FBXW7过表达也明显抑制NSCLC细胞的EMT。机制研究发现,FBXW7可以直接结合并泛素化降解Snail1蛋白,并且Snail1部分逆转FBXW7对NSCLC细胞EMT标志蛋白的影响。结论:FBXW7对NSCLC细胞EMT的调控部分依赖于泛素化降解Snail1蛋白。     

姜黄素逆转电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化

目的 探讨姜黄素对电离辐射诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法 用电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化,将其命名为A549R。CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测姜黄素对A549R上皮/间质标志物表达的影响;划痕实验及Transwell实验检测姜黄素对A549R细胞迁移能力的影响。结果 A549R细胞经姜黄素处理后,细胞形态由纺锤形转变为椭圆形上皮形态;E-cadherin表达下调,pan-Keratin表达上调,Vimentin、Twist表达显著下调,N-cadherin表达水平无明显变化;划痕愈合面积随姜黄素浓度的升高而显著下降;A549R细胞迁移能力随姜黄素浓度的升高而显著下降。结论 姜黄素通过下调E-cadherin、Vimentin、Twist的表达,并上调Keratin的表达,从而逆转电离辐射诱导A549细胞发生上皮间质转化。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性研究

目的 研究GOLPH3与非小细胞肺癌上皮间质转化的相关性。方法 选取72例非小细胞肺癌患者作为研究对象。对比患者肺癌组织和癌旁正常组织中高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)、上皮间之转化标志物E-钙黏素(E-cadherin)以及波形蛋白(vimentin)水平;对比不同临床特征(病理类型、分化程度、淋巴结转移情况)GOLPH3表达情况,同时分析GOLPH3与E-cadherin和vimentin表达相关性。结果 肺癌组织GOLPH3和vimentin阳性率均显著高于癌旁正常组织,E-cadherin阳性率显著低于癌旁正常组织(P<0.05);不同分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同TNM分期患者GOLPH3、E-cadherin和vimentin阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05);经过相关性分析得出：GOLPH3阳性表达率与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin呈正相关(P<0.05)。结论 GOLPH3与非小细胞肺癌患者E-cadherin表达呈负相关,与vimentin呈正相关,与患者上皮间质转化存在明显的相关性。     

上皮-间质转化在非小细胞肺癌侵袭与转移中作用的研究进展

上皮-间质转化（Epithelial—mesenchymal transition,EMT）与恶性肿瘤的侵袭及转移有着密切的关系,是目前研究恶性肿瘤侵袭及转移的热点。有大量研究表明在多种恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌的侵袭与转移过程中都有上皮-间质转化现象,并阐述上皮-间质转化的信号通路及其蛋白分子。本文对上皮-间质转化在非小细胞肺癌侵袭与转移的研究成果做一综述。     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

非小细胞肺癌的miRNA-29a表达及临床意义

目的 探讨miRNA-29a在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR技术检测55例NSCLC组织及癌旁组织中miRNA-29a的表达水平,并分析其与临床病理特征及预后的关系。结果 NSCLC组织中miRNA-29a的表达下调43例,表达上调12例,其表达仅与性别有关（P＜0.05）,而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小及TNM分期均无关。miRNA 29a表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征（ROC）曲线的面积（Az）为0.669（95％CI：0.568～0.770）,灵敏度和特异度分别为49.1％和85.5％。生存分析显示,不同miRNA-29a表达的NSCLC患者的生存率有明显差异（P=0.032）;多因素回归分析显示,miRNA-29a表达是总生存期的独立预后因素。结论 miRNA-29a在NSCLC组织中表达下调,其可作为NSCLC的诊断、预后判断指标及治疗靶标。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。     

芒柄花黄素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及上皮间质转化的抑制作用

目的 探讨芒柄花黄素（Form）对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 采用终浓度为0.1、1、10、100 μmol／L Form处理A549细胞,应用四甲基偶氮唑盐比色法测定对照组（不加药物）及不同浓度Form处理24、48、72和96 h的细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC／PI双染联合流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应检测不同浓度Form处理48 h的凋亡率及凋亡相关基因的表达情况,Western blotting检测各组处理48 h后的EMT相关分子标志物（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平,采用酶联免疫吸附法测各组处理24、48、72及96 h的细胞上清液中纤连蛋白（FN）水平。结果 Form在1～100 μmol／L的范围内对A549细胞有增殖抑制作用,增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,且除24～48 h 0.1 μmol／L外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于对照组（P＜0.05）;与对照组比较,Form处理48 h后的早期、晚期凋亡率及Bax、Bak的mRNA水平均升高,而Bcl-2水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;与对照组比较,不同浓度Form处理48 h后的N-cadherin和Vimentin水平及上清液FN水平均降低,而E-cadherin水平升高,以上差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Form对非小细胞肺癌A549细胞有毒性作用,不仅抑制其增殖还诱导凋亡,可能与抑制其EMT过程有关。     

miR-506通过调控MCL-1抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的作用机制

目的:探究miR-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）及侵袭转移的影响和作用机制。方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检及药敏试验确诊为耐阿立替尼的74例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织以及人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,分别采用细胞转染、免疫组化染色（IHC）、qRT-PCR和Western Blot法检测上述临床组织和细胞样本中miR-506、MCL-1、BAX/Bcl-2凋亡信号途径及EMT标志蛋白表达水平;此外,采用Transwell细胞实验观察miR-506过表达和MCL-1敲减对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:免疫组化（IHC）结果显示肺癌患者癌组织中浸润性坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重,且癌组织中MCL-1的阳性表达率为94.64%,明显高于癌旁组织的23.27%（P＜0.05）。qRT-PCR和Western Blot结果显示,肺癌组织中miR-506、BAX和E-cadherin的表达明显低于癌旁组织,而MCL-1、Bcl-2和N-cadherin的表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）。细胞实验结果表明miR-506过表达和MCL-1敲减能够明显上调BAX和E-cadherin的表达,同时抑制Bcl-2和N-cadherin的表达（P＜0.05）;此外,miR-506过表达和MCL-1敲减均能显著抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力（P＜0.05）。结论:miR-506可能通过抑制BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径发挥抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞EMT及诱导细胞凋亡作用,有望为临床抗肺癌转移及凋亡抑制靶向治疗提供新分子和靶点。     

非小细胞肺癌Twist表达与EMT相关性分析

目的：探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织转录因子Twist的表达及其与上皮一间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的相关性。方法：选取2010—02—2011-11山东省肿瘤医院62例NSCLC患者肺癌组织和20例癌旁组织标本,采用免疫组织化学PV两步法检测Twist、EMT表型分子E-cadherin和Vimentin蛋白表达,并分析其与患者临床病理因素的相关性。结果：NSCLC组织Twist阳性表达率为64．5％（40／62）,癌旁组织为5．0％（1／20）,X2=21．426,P〈0．001;癌组织E—cadherin阳性表达率为54．8％（34／62）,癌旁组织为100．0％（20／20）X2=13．716,P〈0．001;癌组织Vimentin阳性表达率为51．6％（32／62）,癌旁组织为10．0％（2／20）,X2=8．697,P=0．003。Twist表达增加与NSCLC分化程度（X2=6．282,P=0．043）、淋巴结转移（X2=11．806,P=0．001）和临床分期（X2=6．277,P=0．017）有关。Spearman相关分析显示,Twist与E-cadherin表达呈负相关,r=-0．470,P〈0．001;与Vimentin表达呈正相关,r=0．429,P=0．001。结论：Twist高表达与肺癌发生发展、转移和EMT有关,Twist检测有助于肺癌评估恶性程度及预后。     

PTEN蛋白阳性在非小细胞肺癌的临床意义

目的：研究FTEN蛋白阳性对非小细胞肺癌临床意义。方法：应用免疫组化SP法检测10例正常肺组织和56例非细胞肺癌中PFEN基因的表达。结果：非小细胞肺癌中PTEN蛋白阳性率为59％，而正常组织均阳性。PTEN蛋白阳性与肿瘤组织分化程度、临床分期以及有无淋巴结转移相关。PTEN蛋白阴性者预后较差，结论：从蛋白水平揭示PTEN基因与非小细胞肺癌发展有关．PTEN蛋白的检测有望成为判断非小细胞肺癌预后的参考指标之一。     

miR-573调控神经导向因子4促进肺癌细胞上皮间质转化

目的:探讨miR-573通过调控神经导向因子4(NTN4)对肺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人肺癌组织和细胞系中miR-573和NTN4 mRNA水平。采用Lipofectamine 2000转染试剂对肺癌A549细胞进行转染并分组为Control组(不转染)、NC inhibitor组(转染NC inhibitor)、miR-573 inhibitor组(转染miR-573 inhibitor)、miR-573 inhibitor+si-NC组(转染miR-573 inhibitor和si-NC)和miR-573 inhibitor+si-NTN4组(转染miR-573 inhibitor和si-NTN4)。qRT-PCR检测miR-573表达水平;划痕法检测迁移能力;Transwell法检测侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测NTN4及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平;双荧光素酶实验验证miR-573和NTN4的靶向关系。结...     

MicroRNA-7对非小细胞肺癌表柔比星化疗的增敏作用

目的:研究microRNA-7(miR-7)对非小细胞肺癌A549和H1299细胞表柔比星(epirubicin,EPI)化疗的增敏作用及其机制。方法:EPI、miR-7 mimics单独或联合处理A549和H1299细胞后,CCK-8法检测A549和H1299细胞的增殖,Annexin-V/PI染色流式细胞术检测A549和H1299细胞的凋亡,实时定量PCR检测A549和H1299细胞中EGFR及Raf-1mRNA的表达。结果:单独使用EPI或转染miR-7 mimics均可抑制A549和H1299细胞的增殖(P<0.05),而转染miR-7 mim-ics后再以50～400 ng/ml EPI处理,较单独EPI处理显著增强对A549和H1299细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。当miR-7mimics与EPI联用时,A549和H1299细胞的凋亡率则分别较EPI单独处理组增加(54.9±0.4)%和(67.2±0.5)%(均P<0.01),且伴随EGFR及Raf-1 mRNA表达量的显著下降(P<0.01),A549细胞中分别降低(68.0±6.0)%和(78.2±3.9)%,H1299细胞中分别降低(94.8±6.2)%和(87.8±4.3)%。结论:miR-7可通过下调EGFR及Raf-1 mRNA的表达,协同EPI抑制非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,并促进细胞凋亡。     

Implication of epithelial-mesenchymal transition in IGF1R-induced resistance to EGFR-TKIs in advanced non-small cell lung cancer

The underlying mechanisms for acquired resistance to epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKIs) in about 30%-40% of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients remain elusive. Recent studies have suggested that activation of epithelial-mesenchymal transition (EMT) and type 1 insulin-like growth factor receptor (IGF1R) is associated with acquired EGFR-TKIs resistance in NSCLC. Our study aims to further explore the mechanism of EMT and IGF1R in acquired EGFR-TKIs resistance in NSCLC cell lines with mutant (PC-9) or wild-type EGFR (H460). Compared to parental cells, EGFR-TKIs-resistant PC-9/GR and H460/ER cells displayed an EMT phenotype and showed overexpression of IGF1R. SiIGF1R in PC-9/GR and H460/ER cells reversed EMT-related morphologies and reversed their resistance to EGFR-TKIs. Exogenous IGF-1 alone induced EMT in EGFR-TKIs-naïve PC-9 and H460 cells and increased their resistance against EGFR-TKIs. Inducing EMT by TGF-β1 in PC-9 and H460 cells decreased their sensitivity to EGFR-TKIs, whereas reversing EMT by E-cadherin overexpression in PC-9/GR and H460/ER cells restored their sensitivity to EGFR-TKIs. These data suggest that IGF1R plays an important role in acquired drug resistance against EGFR-TKIs by inducing EMT. Targeting IGF1R and EMT may be a potential therapeutic strategy for advanced NSCLC with acquired EGFR-TKIs resistance.