钒暴露对大鼠小胶质细胞炎症反应和迁移的影响

目的观察偏钒酸钠(Na VO3·2H2O)暴露对小胶质细胞炎症反应和迁移的影响,探讨钒神经毒性的相关机制。方法偏钒酸钠孵育原代培养的SD大鼠小胶质细胞,免疫荧光技术显示小胶质细胞形态的变化及其特异性标志物Iba1的表达,免疫印迹技术检测i NOS、COX-2、ERK和p-ERK蛋白表达,酶联免疫吸附实验检测炎症因子TNF-α,IL-1β的释放水平;构建划痕迁移模型,免疫荧光技术记录偏钒酸钠对小胶质细胞迁移的影响。结果偏钒酸钠孵育小胶质细胞后,神经小胶质细胞形态由静息态的分支状向吞噬细胞样形态转变,其特异性标志物Iba1表达显著增加;i NOS和COX-2的蛋白表达和TNF-α,IL-1β释放水平与对照组相比较均显著升高;偏钒酸钠促进小胶质细胞的迁移。结论偏钒酸钠显著促进了小胶质细胞的炎症反应和迁移。     

地黄饮子对阿尔茨海默病小鼠神经炎性损伤的改善作用

目的:研究地黄饮子对阿尔茨海默病(AD)转基因小鼠炎性损伤的保护作用。方法:60只雄性APPsw/PS1ΔE9转基因小鼠,随机分为模型组,阳性药(安理申)组、地黄饮子高、中、低剂量组,每组12只。以同背景、月龄的C57BL/6J小鼠为空白对照。小鼠4月龄开始灌服地黄饮子水煎液150d。Western blot检测小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(p38、phospho-p38、NF-κB p65、NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2)的表达,ELISA法测定促炎性反应因子TNF-α和IL-1β的含量。结果:地黄饮子各剂量组小鼠脑组织中胶质细胞激活标记蛋白(GFAP和Iba-1)、炎性信号通路蛋白(phospho-p38和NF-κB phospho-p65)、促炎性反应因子(i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β)的表达量均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:地黄饮子能通过抑制炎性反应信号通路p38-NF-κB的活性,降低促炎性反应因子的i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β表达,抑制胶质细胞激活,改善AD小鼠脑内炎性损伤。     

不同鼠种在Morris水迷宫学习记忆行为中的种属差异

目的研究三种鼠在Morris水迷宫中空间学习与记忆能力的种间差异.方法选成年SD大鼠、C57/BL小鼠和昆明种小鼠,以相同实验条件进行5d的Morris水迷宫学习与记忆测试,包括前4d的隐藏平台获得实验和第5天的空间搜索实验.结果三组动物寻找隐藏平台的逃避潜伏期均迅速下降,第2天C57/BL小鼠和SD大鼠的逃避潜伏期(25.19±4.09)s和(27.87±5.09)s明显低于昆明种小鼠(42.76±4.70)s,第3天C57/BL小鼠(16.62±3.46)s仍显著低于与昆明种小鼠(34.69±3.07)s.目标象限游泳时间C57/BL小鼠(26.94±6.53)s明显长于SD大鼠和昆明种小鼠(19.98±5.27)s和(17.53±7.29)s;游泳路径的区域百分比分布显示,C57/BL和昆明种小鼠在中心区最多,而SD大鼠在20%边缘区最多.结论三种大小鼠采取不同的空间搜索策略;C57/BL小鼠是一稳定的、适于水迷宫实验的良好鼠种.     

氯硝柳胺抑制小胶质细胞炎症作用研究

目的:探讨氯硝柳胺对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎症作用的影响。方法:建立脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞系BV2炎症反应模型;采用Griess法检测细胞上清中NO释放量,MTT法检测细胞活性;实时定量PCR(qPCR)检测促炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的表达量。分析氯硝柳胺对小胶质细胞炎症的影响。结果:氯硝柳胺能够显著抑制LPS激活的BV2细胞中NO释放量;qPCR结果显示,与正常细胞组相比,LPS组BV2中促炎因子的表达水平明显升高;氯硝柳胺显著降低LPS诱导的BV2细胞中促炎因子表达。结论:氯硝柳胺对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有明显抑制作用。     

依达拉奉干预LPS介导原代小胶质细胞的激活实验

目的 探索依达拉奉 (edaravone, EDA) 对脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) 介导原代小胶质细胞 (Microglia) 激活后的一氧化氮 (nitric oxide, NO) 调控作用.方法 麻醉SD大鼠新生鼠断头取脑, 消化离心等实验方法完成混合胶质细胞的原代培养, 通过生物摇床方法分离、纯化小胶质细胞.利用Griess法检测一氧化氮释放量.结果 通过荧光方法鉴定小胶质细胞的纯化可达到95%以上, 与对照组 (Control) 相比, LPS介导小胶质细胞后激活可见NO浓度显著上升 (P<0.05) , 建模成功;用EDA预处理原代小胶质细胞24 h后, LPS介导的NO下调, 与LPS单独组比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) .同时, EDA先预处理24 h, MAPK inhibitor (丝裂原活化蛋白激酶抑制剂) 预处理30 min, 10 ng/m L LPS介导小胶质细胞16 h, NO释放量显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) .结论 EDA单独应用可抑制LPS介导原代小胶质细胞激活后NO的释放量;EDA同时加用MAPK信号传递通路抑制剂, 加强了EDA减轻LPS介导小胶质细胞激活NO产生.EDA可能与p38MAPK、JNK、ERK信号传导通路抑制剂协同抑制LPS介导的原代小胶质细胞激活有关.     

不同鼠种在Morris水迷宫学习记忆行为中的种属差异

目的研究三种鼠在Morris水迷宫中空间学习与记忆能力的种间差异。方法选成年SD大鼠、C57/BL小鼠和昆明种小鼠,以相同实验条件进行5d的Morris水迷宫学习与记忆测试,包括前4d的隐藏平台获得实验和第5天的空间搜索实验。结果 三组动物寻找隐藏平台的逃避潜伏期均迅速下降,第2天C57/BL小鼠和SD大鼠的逃避潜伏期(25.19±4.09)s和(27.87±5.09)s明显低于昆明种小鼠(42.76±4.70)s,第3天C57/BL小鼠(16.62±3.46)s仍显著低于与昆明种小鼠(34.69±3.07)s。目标象限游泳时间C57/BL小鼠(26.94±6.53)s明显长于SD大鼠和昆明种小鼠(19.98±5.27)s和(17.53±7.29)s;游泳路径的区域百分比分布显示,C57/BL和昆明种小鼠在中心区最多,而SD大鼠在20％边缘区最多。结论 三种大小鼠采取不同的空间搜索策略;C57/BL小鼠是一稳定的、适于水迷宫实验的良好鼠种。     

淫羊藿苷对慢性阻塞性肺疾病模型的抗炎和抗氧化作用

目的探讨淫羊藿苷对香烟烟雾和脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)和大鼠模型炎症的影响。方法以LPS刺激NR8383细胞系建立细胞炎症模型,以香烟烟雾和LPS联合刺激SD大鼠建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,采用淫羊藿苷干预。采用MTT检测细胞活力;采用微板酶标法和分光光度计检测细胞培养上清和血清中NO,i NOS和SOD含量;采用流式细胞技术检测外周血CD4+和CD8+T细胞含量;采用病理切片HE染色观察肺组织病理变化。结果体外研究表明:淫羊藿苷80μM时显示出最接近空白组的细胞活力,淫羊藿苷10、20、40、80和160μM均显示出抑制NO和i NOS的释放(P0.05),而淫羊藿苷5、10、20、40、80和160μM均提高了SOD的活力(P0.05)。体内研究表明:淫羊藿苷干预之后的大鼠血清NO和i NOS释放均明显降低,SOD活力显著升高(P0.05),CD8+T细胞比例比例下降(P0.05),CD4+/CD8+T细胞的比值升高(P0.05),减轻大鼠肺部炎症细胞浸润。结论淫羊藿苷是一种安全有效的天然抗炎抗氧化药物,可能通过改变NO、i NOS、SOD和T淋巴细胞的含量来实现疗效。     

枫叶黄酮抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7细胞激活的作用

目的 探讨枫叶黄酮对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导破骨前体细胞Raw264.7细胞炎性因子释放的抑制作用.方法 用LPS(5 mg/mL刺激Raw264.7细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测Raw264.7细胞的活力影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测一氧化氮(N0)和前列腺素E2,PGE2表达;运用免疫荧光染色方法 检测诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶-2,COX-2、子肿瘤坏死因子-αTNF-α和白介素-1β,IL-1β、核因子-κB,NF-κB蛋白与mRNA的表达变化.结果 不同浓度的枫叶黄酮明显抑制了LPS诱导的Row246.7细胞NO、PGE2,iNOS和COX-2,TNF-α和IL-1β与NF-κB的上调,并且.NO、PGE2、iNOS、COX-2和NF-κB蛋白的表达呈剂量依赖性.结论 枫叶黄酮可抑制LPS诱导的破骨前体细胞Raw264.7细胞iNOS、COX-2和NF-κB/P65蛋白表达和炎性因子释放从而抑制破骨细胞的激活.     

化风丹对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用

目的 观察化风丹对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用.方法 采用原代大鼠小胶质细胞培养,通过脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞激活引起神经炎症反应.实验随机分为空白对照组、化风丹组(0.3 mg/mL)、模型组(10 ng/mL LPS)、LPS+化风丹组(0.03、0.1和0.3 mg/mL).实时反转录聚合酶链反应(Real - time RT - PCR)检测细胞中炎症因子mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Griess试剂检测细胞培养上清液中炎症因子蛋白含量的变化.结果 化风丹能够抑制LPS诱导的小胶质细胞内肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-1β(IL- 1β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的过度表达以及降低细胞培养上清液中TNFα、IL - 1β和一氧化氮(NO)的含量.结论 化风丹能够抑制小胶质细胞介导的神经炎症反应.     

COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖诱导下巨噬细胞炎症因子表达的影响

研究COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖(LPS)诱导下RAW 264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用LPS (1μg/mL)刺激生长良好的RAW 264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,在不同浓度的ZLJ-6( 3,10,30 μmol/L)作用下,用Griess法检测细胞培养液中NO的含量,用ELISA法检测TNF-α、IL-6含量,并用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮激酶(iNOS) 的表达。ZLJ-6能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6等炎症因子的生成,同时抑制COX-2和iNOS的表达。结果表明,ZLJ-6具有抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达以及炎症介质NO以及TNF-α、IL-6的产生。     

山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其机制

目的： 探究山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其潜在机制。方法： 将60只SPF级昆明小鼠随机均分为6组,每组10只,分别为正常对照组,模型组,阳性对照组,山奈素低、中、高剂量组。正常对照组和模型组给予0.5% 羧甲基纤维素钠,其他4组分别给予雷尼替丁(100 mg/kg)、低剂量山奈素(31.7 mg/kg)、中剂量山奈素(63.4 mg/kg)、高剂量山奈素(126.8 mg/kg);所有小鼠灌胃容积均为20 mL/kg,连续给药7 d;然后用无水乙醇10 mL/kg灌胃建立急性胃溃疡模型;采用溃疡指数评估胃黏膜损伤情况,ELISA法检测血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO含量,免疫印迹法检测胃组织COX-2、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、NF-κB p65蛋白表达。结果： 与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜出现明显的血斑和上皮细胞脱落;与模型组相比,山奈素组可显著降低胃溃疡指数且高剂量组优于中、低剂量组(P均<0.05)。与正常对照组相比,模型组炎症介质COX-2、PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO血清含量明显升高,胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达明显增加(P均<0.05);与模型组相比,山奈素组胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达及血清中炎症介质含量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论： 山奈素对乙醇型胃溃疡具有保护作用,可能通过抑制NF-κB/COX-2通路,减少下游炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量,降低iNOS活性,进而抑制NO产生。     

改良三甲散含药脑脊液对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症模型相关因子及蛋白表达的影响

目的探讨改良三甲散含药脑脊液对脂多糖(LPS)所诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响。方法将BV2细胞分为空白对照组,模型组,10.0%、5.0%、2.5%改良三甲散组,石杉碱甲组。细胞培养贴壁后,改良三甲散各组及石杉碱甲组分别加入10.0%、5.0%、2.5%、10.0%含药脑脊液,37℃孵育2 h后除空白对照组均加入LPS(终浓度为1 mg/L),继续孵育24 h后收集培养上清,提取蛋白样品。应用硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;ELISA法检测各组细胞培养上清中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western blot法检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果模型组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显升高,p-JNK表达上调;10%、5%改良三甲散组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显下降,p-JNK表达下调。结论改良三甲散含药脑脊液对LPS所致的BV2小胶质细胞的炎性反应具有调节作用,其作用机制可能与调控p-JNK的表达、减少炎性介质的产生有关。     

脂多糖及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中孕激素受体、IL-1β及COX-2的影响

目的:研究脂多糖(LPS)或拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(Toll-like receptor 4 antagonist,TLR4 mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后其孕激素受体(progesterone receptor,PR)、IL-1β及COX-2的表达改变,以探讨LPS及其拮抗剂对蜕膜细胞中PR的影响,以及PR与炎症因子之间的关系。方法:分离培养早孕人蜕膜细胞,将细胞培养至第4代时随机分为6组,对照组:仅加培养液。研究1组:加入终质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究2组:加入终质量浓度为1 μg/ mL TLR4 mAb。研究3组:加入终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb。研究4组:终质量浓度为1 μg/mLTLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究5组:终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。均培养24 h 后,采用RT-PCR半定量技术检测蜕膜细胞中PR,IL-1β及COX-2mRNA的表达情况。结果: LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2 mRNA的表达上调(P<0.05);TLR4 mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高质量浓度TLR4 mAb使COX-2 mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后,PR mRNA表达下调;IL-1β,COX-2的mRNA表达增加;使用TLR4 mAb后能拮抗LPS对蜕膜细胞中PR,IL-1β以及COX-2的作用。     

手术创伤对老龄大鼠海马炎症介质表达的影响

目的:探讨手术创伤对老龄大鼠海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及一氧化氮(NO)表达水平的影响。方法:健康雄性SD大鼠45只,月龄18月,体重500-600g,随机分成3组(n=15):对照组(C组)腹腔注射生理盐水3ml;麻醉组(A组)腹腔注射1%戊巴比妥钠注射液50mg/kg(稀释至3ml)麻醉,不行手术;手术组(S组)腹腔注射1%戊巴比妥钠注射液50mg/kg(稀释至3ml)麻醉后,行腹腔探查+阑尾切除+脾切除术。于麻醉或术后1,3,7d(T1,3,7)采用ELISA法测定海马TNF-α和IL-1β的表达,采用NO和NOS试剂盒测定海马组织NO和iNOS表达水平。结果:与C组和A组比较,在T1和T3时点,S组大鼠海马TNF-α、IL-1β蛋白水平以及iNOS和NO的表达上调(P<0.05),C组与A组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手术创伤导致的海马TNF-α、IL-1β及iNOS、NO的表达上调,可能与老龄大鼠术后认知功能障碍有关。     

鱼油对老年Ⅰ期压疮模型大鼠免疫功能、炎症反应及细胞凋亡的影响

目的探讨鱼油对老年Ⅰ期压疮大鼠细胞免疫、炎症反应及细胞凋亡的影响。方法随机将20只老年SD大鼠分成三组,正常组和模型组各6只,采取普通饲料喂养,鱼油干预组8只给予普通饲料加1.6 g/（kg.d）鱼油灌胃喂养20 d。正常组不受压,模型组和鱼油干预组承受22.47 kPa压力2 h后三组大鼠一起实施安乐死。采集受压组织中心标本,行常规石蜡切片、HE染色及TUNEL荧光标记;光镜下观察三组大鼠皮肤肌肉组织病理变化;检测10%匀浆肌组织中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的含量和活性及细胞凋亡指数（AI）的变化。结果受压组织病理形态学显示,与模型组相比,鱼油干预组受压表皮及组织炎症细胞浸润少,受压组织受损程度明显减轻（P=0.00）。与正常组比较,模型组IL-2、IL-6、NO、NOS及AI水平均显著增高（P=0.00）;与模型组比较,鱼油干预组IL-2、IL-6、NO、NOS及AI水平均显著降低（P=0.00）。结论鱼油的早期应用可有效抑制受压组织的免疫、炎症反应和细胞凋亡,从而降低老年压疮发生率。     

地西泮和莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响

目的：研究地西泮、莫达非尼对小鼠试验性急性肝衰竭的影响。方法：雄性昆明小鼠240只,给予D-半乳糖胺(D-GalN)和脂多糖（LPS）同时腹腔注射,制备小鼠急性肝衰竭模型;并于造模前2h,治疗组分别给予相应药物灌胃,对照组给予蒸馏水灌胃。比较各组小鼠的24h存活率,血清转氨酶水平,肝脏组织病理学改变,血清TNF-α,IL-1的水平,肝脏组织中SOD,MDA ,GR,１GSH,NO,NOS的水平。结果：地西泮可以提高小鼠存活率,减轻肝脏病变程度,降低血清转氨酶活性及TNF-α,IL-1的浓度,增加肝脏组织中SOD,GR的活性,降低NOS的活性及MDA,NO的浓度。莫达非尼可加重肝脏病变程度,升高血清转氨酶的活性及 TNF-α,IL-1的浓度,降低肝脏组织中SOD,GR的活性及升高MDA的浓度。结论 ：地西泮可减轻D-GalN/LPS所致的急性肝衰竭,提高小鼠的存活率,莫达非尼可加重小鼠的肝损伤。     

穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）生成的影响。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别加入脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,终质量浓度1μg/mL）和不同浓度的穿心莲内酯（终浓度1、10、50μmol/L）进行干预,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO产量;用Elisa法检测TNF-α、IL-6浓度。结果与空白组比较,LPS明显促进了RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-6等炎症因子的生成;穿心莲内酯单独作用不影响炎症因子的表达,但穿心莲内酯能显著下调LPS诱导的炎症因子表达,与LPS组差异有显著性。结论穿心莲内酯可明显降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子表达,抑制炎症反应。     

IL-18抑制剂对脓毒症并发血小板减少小鼠的保护作用

目的:探究白细胞介素（IL）-18抑制剂 （IL-18Bp）对脓毒症并发血小板减少小鼠的保护作用。方法:将30只C57BL/6雄性小鼠依次编号，按照随机数字表法分为3组:对照组、脂多糖（LPS）注射模型组（LPS组）、LPS加IL-18Bp干预组（LPS/IL-18Bp组）。其中LPS组和LPS/IL-18Bp组给予单次腹腔注射30 mg/kg LPS制备脓毒症并发血小板减少模型，对照组给予等体积生理盐水；LPS/IL-18Bp组在注射LPS后给予单次腹腔注射50 μg/kg IL-18Bp，其余各组给予等体积生理盐水。观察各组72 h生存率，并于LPS注射后24 h时收集血液样本和脾脏组织，全血细胞分析仪检测血小板计数，ELISA法检测各组富血小板血浆中血小板活化标志物sCD40L以及IL-18和IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达情况；HE染色观察并分析各组脾脏的病理变化。结果:LPS/IL-18Bp组各时间点的生存率均高于LPS组（χ2=0.63，P<0.05）；LPS注射后24 h时LPS/IL-18Bp组血小板计数显著高于LPS组（t=8.37，P=0.001）；LPS/IL-18Bp组sCD40L表达量较LPS组低（t=4.34，P=0.012）；LPS/IL-18Bp组小鼠富血小板血浆中IL-18、IL-6、IL-10和TNF-α的表达均较LPS组显著降低（t=8.18、10.95、5.34、10.68，均P＜0.05）；脾脏病理分析显示，LPS/IL-18Bp组脾脏炎症细胞较LPS组明显减少。结论:IL-18Bp能够缓解LPS诱导小鼠血小板减少、血小板活化和炎症反应，并提高LPS诱导血小板减少小鼠模型的生存率，对LPS诱导血小板减少模型小鼠具有一定的保护作用。