雷公藤甲素对ERα蛋白介导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制的影响

目的：研究雷公藤甲素对激素依赖性人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用及可能的机制。方法：MTT法检测雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖的抑制作用,Hoechst染色法检测其对细胞凋亡的影响,Western blotting法观察雷公藤甲素对雌激素受体（ER）α蛋白表达的影响。结果：雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖有显著的抑制作用,并且呈现良好的时效和量效关系,雷公藤甲素能有效诱导MCF-7细胞凋亡,并且对ERα具有明显的下调作用。结论：雷公藤甲素能抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖并且诱导其凋亡,其诱导MCF-7细胞凋亡的作用机制可能与其下调ERα的表达有关。     

保护性自噬对顺铂诱导人乳腺癌 MCF-7细胞凋亡的抑制作用探讨

目的：探讨顺铂对乳腺癌 MCF-7细胞自噬的影响及自噬在顺铂诱导凋亡中的作用。方法顺铂处理乳腺癌 MCF-7细胞,MTT 检测细胞增殖的能力,Hoechst 33342染分析细胞的凋亡,吖啶橙染色分析细胞的自噬,Western blot 分析自噬蛋白 LC3Ⅰ／Ⅱ和 p62的表达和凋亡蛋白多聚 ADP-核糖聚合酶 PARP 表达。结果顺铂呈时间和剂量依赖性抑制乳腺癌 MCF-7细胞的增殖,并且凋亡细胞数量随顺铂浓度的递增而增加;同时顺铂能诱导微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白的增加,p62蛋白的减少以及酸性自噬溶酶体的增加,顺铂联合氯喹明显增加了 LC3Ⅱ和 p62的蛋白的表达;与单药顺铂相比,自噬抑制剂氯喹明显降低细胞存活率（89．17％±2．56％）vs （74．63％±1．51％）,（P ＜0．05）,而且 PARP 蛋白发生了明显的裂解（P ＜0．05）。结论顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞保护性自噬,抑制自噬可以增加顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,自噬抑制剂联合顺铂为乳腺癌提供了新的治疗策略。     

紫草素通过PI3K/Akt通路促进人乳腺癌MCF-7细胞自噬

目的研究紫草素(Shikonin)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测紫草素处理人乳腺癌MCF-7细胞24、48 h细胞的存活率,Western blot方法检测紫草素处理24 h和48 h时LC3、p62、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果 1μmol.L-1紫草素处理细胞48 h以及2.5、5μmol.L-1紫草素处理MCF-7细胞24 h和48 h时,MCF-7细胞的活力受到明显抑制,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值增加,p62表达减少,总PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt均减少。结论紫草素促进乳腺癌MCF-7细胞自噬,其作用机制可能与PI3K/Akt通路受到抑制有关。     

自噬介导的雷公藤甲素提高西妥昔单抗对SW480细胞治疗效果的实验研究

目的观察雷公藤甲素联合表皮生长因子受体单克隆抗体西妥昔单抗对人结直肠癌细胞SW480细胞株生物学行为的影响。方法雷公藤甲素、西妥昔单抗单独或联合作用于SW480细胞株, MTT法、细胞克隆实验检测细胞增殖抑制率;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测雷公藤甲素诱导细胞自噬性凋亡标记物p62、LC3-Ⅱ;雷公藤甲素及西妥昔单抗单独和联合作用细胞后,Western blot分析上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、Vimentin以及mTOR、Snail、Twist蛋白水平。结果雷公藤甲素及西妥昔单抗对SW480细胞的增殖抑制作用均呈剂量依赖性,两药联用可明显抑制SW480细胞增殖;雷公藤甲素诱导SW480细胞p62蛋白下调,LC3-Ⅱ上调,发生自噬性凋亡;雷公藤甲素单药组、联合用药组均能明显抑制SW480细胞发生EMT,其标记分子E-cadherin蛋白上调,Vimentin蛋白下调,关键分子Snail、Twist表达下调。结论雷公藤甲素联合西妥昔单抗抑制SW480细胞增殖和转移具有明显协同作用,雷公藤甲素通过抑制mTOR通路,可以诱导细胞自噬性凋亡,自噬介导的雷公藤甲素抑制肿瘤细胞EMT可能是逆转西妥昔单抗耐药的机制。     

野马追总黄酮的体内外抗乳腺癌活性及机制研究

目的 探究野马追总黄酮(TFE)的体内外抗乳腺癌活性及相关的作用机制。方法 MTT法检测TFE对乳腺癌细胞(MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-468)和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A增殖的影响;流式细胞术检测TFE对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响;吖啶橙(AO)染色法检测TFE对细胞自噬的影响;Western blot检测细胞周期、凋亡、自噬相关蛋白的变化,以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化;建立MDA-MB-231细胞的裸鼠移植瘤模型,观察TFE的体内抗肿瘤活性。结果 TFE能明显抑制乳腺癌细胞增殖,并呈剂量依赖性,而对人正常乳腺上皮细胞无显著的抑制作用;TFE能增加G₂/M期细胞比例,上调p-cdc-2蛋白表达,下调cdc-2和Cyclin B1蛋白表达;TFE能显著增加乳腺癌细胞凋亡比例,上调促凋亡蛋白Bad和Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达;TFV能够诱导乳腺癌细胞产生自噬,自噬相关蛋白LC3-II表达上升,p62表达降低;TFE能够抑制显著抑制PI3K和Akt的磷酸化水平;TFE能够在体内抑制裸鼠肿瘤的体积。结论 TFE通过抑制PI3K/Akt信号通路,阻滞细胞周期、诱导凋亡和自噬,进而在体内外抑制乳腺癌细胞的生长。     

酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究

目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。     

双硫仑螯合铜对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响

目的 探讨双硫仑螯合铜(DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年1月至2019年10月,培养MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞,用定量紫杉醇持续诱导MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数;通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)干预不同时间(24 h和48 h)后的抑制率,并分析细胞抑制率与DSF-Cu浓度和作用时间的关系;通过划痕实验检测DSF-Cu对MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬效应蛋白Beclin-1基因和蛋白的表达,并在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预MCF-7/紫杉醇细胞中后,检测Bcl-2、Bax和Beclin-1蛋白的表达;通过流式细胞计数技术检测不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7...     

雷公藤甲素增加乳腺癌细胞对阿霉素敏感性的实验研究

目的探索雷公藤甲素对于人耐药乳腺癌细胞的抑制作用及其对阿霉素化疗敏感性的影响。方法体外培养阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR细胞株,采用不同浓度的雷公藤甲素和阿霉素单药或联合用药处理。利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡及细胞周期。结果雷公藤甲素可抑制阿霉素耐药乳腺癌癌细胞的增殖,且存在着明显的剂量-效应关系。与单独使用雷公藤甲素或者阿霉素相比,雷公藤甲素联合阿霉素组的细胞凋亡率明显增高。结论雷公藤甲素不仅能对耐药乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用,同时也可以增强乳腺癌细胞对阿霉素化疗的敏感性。     

香贝散通过激活AMPK/mTOR信号通路抑制人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231生长

目的 探讨香贝散体外抗乳腺癌作用及其分子机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7、MDA-MB-231,给予香贝散 1、2、3、4、5 mg·mL^-1加药处理,对照组不加药。利用 MTT 法和克隆形成实验检测细胞增殖,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕和细胞侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,借助吖啶橙染色法观察细胞自噬,借助转录组测序技术探索香贝散诱导乳腺癌细胞死亡的作用机制,并采用 Western blotting 法检测 AMP 依赖的蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、LC-3、Beclin-1 蛋白表达水平。结果 与对照组比较,香贝散显著抑制人乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231 细胞活力（P＜0.05、0.001）,48 h 半数抑制浓度（IC₅₀）分别为 2.344、1.961 mg·mL^-1,且具有时间、浓度相关性;显著抑制 MCF-7、MDA-MB-231 细胞的集落形成能力;显著诱导 MCF-7、MDA-MB-231 细胞凋亡（P＜0.001）;明显抑制人乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231 细胞的体外迁移能力和侵袭能力;吖啶橙染色实验结果提示香贝散能够诱导 MCF-7、MDA-MB-231 细胞发生自噬,Western blotting 实验结果显示香贝散能够显著上调 MCF-7、MDA-MB-231 细 胞 中 自 噬 关 键 蛋 白 Beclin-1 和 LC3-Ⅱ的表达（P＜0.01、0.001）;转录组测序技术发现差异基因变化最明显的通路包括 mTOR 信号通路、自噬信号通路等 ,Western blotting 实验结果显示香贝散显著下调 mTOR 的磷酸化水平（P＜0.001）,显著上调 AMPK 的磷酸化水平（P＜0.001）。结论 香贝散能够显著抑制人乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,能够诱导凋亡和自噬的发生,激活 AMPK/mTOR 信号通路可能是其重要机制。     

金合欢素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

目的 探讨金合欢素（Aca）通过调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶（Parkin）通路介导的线粒体自噬对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将肝癌HepG2细胞分为对照组（正常培养的HepG2细胞）、Aca组（10μmol/L Aca）、PINK1小干扰RNA阴性对照（si-NC）组（转染si-NC）、PINK1小干扰RNA(si-PINK1)组（转染si-PINK1）、Aca+si-NC组（转染si-NC后用10μmol/L Aca处理）、Aca+si-PINK1组（转染si-PINK1后用10μmol/L Aca处理）。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移；透射电镜观察自噬小体的形成；Western blot检测细胞中自噬相关蛋白[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ]及PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较，Aca组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目降低，凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平...     

SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长

目的研究SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的作用和机制。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为研究目标,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA及蛋白表达的影响,同时检测利用siRNA干扰技术敲除CTSV后的细胞CTSV表达水平;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3II分子的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA诱导自噬过程中相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后利用Western blot和Muse细胞分析仪分别检测p62蛋白水平和SAHA作用后的细胞活力。结果SAHA可以抑制MCF-7细胞的增殖,并促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNA和蛋白水平均显著性降低。SAHA增加了LC3免疫荧光点的分布,与CTSV-siRNA共同作用可恢复由CTSV-siRNA敲减引起的细胞自噬减弱。SAHA在增强ATG4C和Beclin1表达的同时,LC3B也随之升高而mTOR则下降。抑制CTSV表达后也同时逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力显著增强。结论SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。     

Autophagy contributes to IL-17-induced plasma cell differentiation in experimental autoimmune myocarditis

Although IL-17 is considered to promote B cell differentiation into antibody-secreting plasma cells in some autoimmune diseases, its mechanism remains unclear. Recent studies revealed that autophagy, a lysosome-mediated catabolic process for providing nutrients under starvation, could regulate plasma cell homeostasis, so this study aimed to explore whether and how autophagy participates in IL-17-mediated plasma cell differentiation by MyHC-α-induced experimental autoimmune myocarditis (EAM) mouse model. It showed that IL-17 could not only induce B cell autophagy, but also facilitate the myocarditis severity, serum anti-MyHC-α autoantibody production and splenic CD38⁺ CD138⁺ B cell percentages, while the autophagy inhibitor 3-methyladenine attenuated these effects. Furthermore, serum anti-MyHC-α IgG autoantibody productions and CD38⁺ CD138⁺ B cell percentages were positively correlated with B cell autophagy levels respectively. In vitro, we further revealed that IL-17 could directly promote B cell autophagy, which boosted Blimp-1 expressions and CD38⁺ CD138⁺ B cell percentages. Moreover, elevated autophagy mediated by IL-17 enhanced ubiquitin–proteasome system activity and B cell anti-apoptotic ability by Beclin-1 and p62 through Erk1/2 phosphorylation, and these changes brought by IL-17 could be also inhibited with 3-methyladenine. Therefore, we concluded that autophagy contributed to IL-17-mediated plasma cell differentiation by regulating Blimp-1 expression and Beclin-1/p62 associated B cell apoptosis in EAM.     

基于NLRP3-IL-1β-NF-κB信号轴研究野菊花总黄酮对 脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响

摘要：目的 探究野菊花总黄酮（TFC）对脂多糖（LPS）诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响,并初步探究其可 能的作用机制。方法 体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为阴性对照（Control）组、LPS处理（LPS）组、TFC 预处理（TFC）组、NLRP3激活预处理（4-MET）组、TFC联合4-MET预处理（TFC+4-MET）组。CCK-8法检测细胞增殖 情况;Hoechst 33342染色观察各组细胞形态变化;免疫印迹法检测各组细胞核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）、凋 亡相关斑点样蛋白（Asc）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（caspase-1）、p-IκB、IκB、自噬相关蛋白（Beclin1）、微管相关蛋 白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、LC3Ⅰ、蛋白表达情况;ELISA法检测细胞中白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平;透射电镜观察细胞 自噬情况。结果 与Control组相比,LPS组细胞增殖率降低,细胞核破碎情况加重,细胞凋亡率升高,NLRP3、Asc、 caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低 （P＜0.05）。与LPS组相比,TFC组细胞增殖率升高,细胞核破碎减轻,细胞凋亡率降低,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白 表达降低、IκB蛋白磷酸化水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,细胞自噬程度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达升 高;4-MET组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,细胞核破碎情况加重,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋 白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,细胞自噬程度降低,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低（P＜0.05）。 TFC+4-MET组细胞增殖率、细胞自噬程度、LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达高于4-MET组,细胞核破碎情况减轻, 细胞凋亡率、NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达、IκB蛋白磷酸化、IL-1β、IL-18水平低于4-MET组（P＜0.05）。结论 野菊花总黄酮可能通过抑制NLRP3-IL-1β-NF-κB信号通路活化,进而抑制脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应,诱导 细胞自噬     

积雪草酸联合奥沙利铂对结肠癌HCT116细胞凋亡、自噬和焦亡的调控作用研究

目的:探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)联合奥沙利铂(oxaliplatin,OXP)对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、自噬和焦亡的调控作用.方法:采用CCK8法检测AA、OXP、AA与OXP联用对HCT116细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;JC-1染...     

紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响

目的:研究紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin-1、p62的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照比较,10、20、40μg/mL紫草素作用48 h后HCT116细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01)。10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后均可不同程度地升高细胞中LC3、Beclin-1、p62 mRNA及其蛋白的表达水平,除10μg/mL紫草素作用后细胞中LC3 m RNA表达水平升高不显著外,其余指标水平与空白对照比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草素可诱导人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,并激活其自噬途径。     

Cornin protects astrocytes against autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion via PI3K/Akt/mTOR pathway

OBJECTIVE The purpose of this study was to investigate the effect of cornin against astrocytes autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion and its mechanism. METHODS In vitro, U87 cells were used to establish oxygen glucose deprivation/reperfusion(OGD/R) as a cerebral ischemia model. In vivo, a SpragueDawley(SD) rat middle cerebral artery occlusion(MCAO) model was used to evaluated the effects of cornin against autophagy in astrocytes. RESULTS The results demonstrated that cornin was able to increase the ratio of apoptosis regulator Bcl-2/Bax and decrease the level of cleaved-caspase-3 protein. Similarly, cornin reduce the rate of apoptotic cells by flow cytometry. In addition, cornin(100 nmol·L~(-1)) decreased the expression of microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3 B(LC3-Ⅱ) and Beclin-1 protein, increased the level of p62,and upregulated phosphorylated protein kinase m TOR(m TOR), phosphorylated(p) RAC α serine/threonine protein kinase(Akt) in OGD treated U87 cells. However,following PI3 K inhibitor LY294002 and m TOR si RNA reversed this result. Cornin(10 mg · kg~(-1)) significantly reduced the cerebral infarction volume and the leakage rate of blood-brain barrier(BBB). The expression of autophagy proteins(LC3-Ⅱ, Beclin-1, P62) and apoptosis-associated proteins(Bcl-2/Bax, cleaved caspase-3) in brain tissue showed the similar results as in cells. Similarly, PI3 K inhibitor LY294002 was able to reversed the protective effect of cornin and upregulate autophagy-associated proteins. In addition, immunohistochemistry staining was applied for Neu N, GFAP, LC3 B and Beclin-1, and cornin could alleviated pathological injury 24 h after ischemiareperfusion. CONCLUSION These results indicated that cornin against astrocytes autophagy induced by cerebral ischemia-reperfusion through PI3 K/Akt/m TOR signaling pathway.