色素上皮衍生因子修饰的人脐带间充质干细胞构建方法

目的:构建携带色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因的重组慢病毒,感染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs),探讨PEDF在hUCMSCs中的表达及重组慢病毒对hUCMSCs活性的影响.方法:利用pLenti-CMV-hChR2-EYFP 载体系统,构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP,进一步感染hUCMSCs,获得携带PEDF基因的hUCMSCs(PEDF-hUCMSCs),激光共聚焦显微镜和ELISA法检测PEDF-hUCMSCs 的PEDF蛋白表达情况,采用CCK8法检测PEDF-hUCMSCs的活性.通过观察细胞形态和流式细胞术检测验证重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染hUCMSCs后对细胞传代、细胞表型的影响.结果:成功构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP,高效感染hUCMSCs,获得的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白,检测结果显示重组病毒感染组细胞与空白对照组细胞活性无统计学差异(P>0.05).重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染对hUCMSCs的增殖能力、细胞形态和细胞表型没有明显改变. 结论:携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP修饰的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白,为进一步探索应用PEDF-hUCMSCs治疗视网膜色素变性疾病奠定了实验基础和理论依据.     

色素上皮衍生因子的表达与早期糖尿病大鼠视网膜血管形态学的改变

目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)mRNA在不同病程糖尿病大鼠模型视网膜中的表达水平及其与早期糖尿病大鼠视网膜血管病变之间的关系。方法 48只健康Wistar大鼠随机分成糖尿病1个月组(DM1)、3个月组(DM3)和6个月组(DM6)与正常对照1个月组(CON1)、3个月组(CON3)、6个月组(CON6),每组各8只。链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,分别于造模后1个月、3个月、6个月行视网膜血管铺片和PEDFmRNA的原位杂交,观察大鼠视网膜微血管的改变和PEDFmRNA表达情况。结果 (1)DM3和DM6组可见毛细血管迂曲,走形不规则,管腔粗细不均,以DM6组病变最重,可见无细胞毛细血管。(2)周细胞数量:DM1组与CON1组相比差异无统计学意义(CON1组6.45±0.64,DM1组6.52±0.75,P>0.05),DM3及DM6组均较CON3组、CON6组明显减少(CON3组6.51±0.70、DM3组6.06±0.65,CON6组6.47±0.60、DM6组5.45±0.80),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。(3)CON1和DM1组PEDFmRNA在节细胞层、内核层及RPE层均有阳性细胞表达,CON1组64±10、DM1组53±8,差异无统计学意义(P>0.05);CON3组和DM3组PDEFmRNA在节细胞层、内核层、RPE层阳性反应细胞表达减少,CON3组68±11、DM3组49±12,差异有统计学意义(P<0.05);CON6组和DM6组PEDFmRNA仅在内核层和节细胞层表达,RPE层只见极少阳性细胞,CON6组58±8、DM6组34±14,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论糖尿病视网膜病变的发生、发展与周细胞数量减少、PEDFmRNA表达降低密切相关,两者的表达同糖尿病视网膜病变的发生、发展存在时效和空间关系。     

色素上皮衍生因子对糖尿病视网膜病变神经细胞的保护作用

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病眼部最严重的并发症,诸多研究表明,在糖尿病早期即已发生视网膜神经元损害,逐渐危害患者视力。色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor,PEDF）是从胎儿视网膜色素上皮细胞培养液中发现的具有保护神经元和抗新生血管形成双重效能的细胞因子。PEDF可修复DR受损的视网膜神经细胞及维持视网膜内环境稳定,从而为DR治疗提供新的理论依据。本文就PEDF对DR中神经细胞保护机制的研究现状和进展作一综述。     

色素上皮衍生因子在糖尿病视网膜病变中的研究进展

色素上皮衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)是与糖尿病视网膜病变关系密切的因子之一.PEDF通过抑制视网膜内皮细胞生长和迁移,弱化血管新生而延缓糖尿病视网膜病变病程进展和减轻视网膜的损伤.PEDF成为未来治疗糖尿病视网膜病变的新药具有广阔前景.本文就PEDF的功能及其在治疗糖尿病视网膜病变中的新进展进行综述.     

色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子（pigment epithelial-derived factor,PEDF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）模型中PEDF、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法　绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的慢病毒（lentivirus,LV）为载体,将PEDF基因以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组（N组）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）治疗组（PBS组）、hUCMSCs治疗组（M组）及 PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组（P组）;N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予 PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜 PEDF和VEGF的mRNA表达情况。结果　荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量（4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,转染后 PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量［（83.09±7.58）μg·L^-1］明显高于hUCMSCs［（12.30±1.24）μg·L^-1］,差异有统计学意义（P<0.05）。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组高于M组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA 表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF 表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。     

高度近视对糖尿病豚鼠视网膜血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响

背景 研究发现糖尿病合并高度近视患者较少发生糖尿病视网膜病变（DR）,高度近视对DR的发生和发展可能具有保护作用.DR的主要病理基础是新生血管的形成,而血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）在DR的发生和发展过程中具有重要作用. 目的 观察高度近视合并糖尿病豚鼠视网膜中VEGF和PEDF表达的变化,探讨高度近视对DR的影响.方法 将出生3d的豚鼠48只采用随机数字表法随机分为正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组,每组12只.高度近视组豚鼠用半透明眼罩行右眼遮盖,构建高度近视动物模型;采用60 mg/kg的链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射4次,每3天1次,制作糖尿病豚鼠模型;糖尿病合并高度近视组豚鼠采用半透明眼罩联合STZ制作糖尿病合并高度近视模型.造模成功后行常规苏木精-伊红染色观察视网膜结构,免疫组织化学染色检测视网膜中VEGF和PEDF的表达情况,应用Biosens数字成像分析系统分析阳性反应部位的平均吸光度（A）值. 结果 正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组的屈光度分别为（＋0.25±177;0.07）、（-7.50±177;0.04）、（＋0.25±177;0.03）和（-7.50±177;0.02）D;空腹血糖分别为（5.3±177;0.1）、（5.1±177;0.2）、（19.7±177;0.4）和（18.5±177;0.3）mmol/L.各组豚鼠均造模成功.与正常对照组相比,高度近视组视网膜组织变薄,神经节细胞数目减少;糖尿病组视网膜组织结构疏松、肿胀;糖尿病合并高度近视组视网膜组织变薄,结构肿胀.正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组VEGF阳性反应部位平均A值分别为128.61 ±177;5.57、118.24±177;2.59、155.60±177;9.70和135.15±177;5.22,各组间总体比较差异有统计学意义（F=17.365,P=0.032）,其中糖尿病合并高度近视组豚鼠视网膜中VEGF表达水平（A值）明显低于糖尿病组,差异有统计学意义（t=5.210,P＜0.05）;PEDF阳性反应部位平均A值分别为145.57±177;8.35、149.54±177;6.20、127.71 ±177;2.45和1 37.53±177;7.38,各组间总体比较差异有统计学意义（F=19.210,P=0.019）,其中糖尿病合并高度近视组豚鼠视网膜中PEDF水平明显高于糖尿病组,差异有统计学意义（t=4.521,P＜0.05）.结论 高度近视合并糖尿病的豚鼠视网膜中VEGF表达量下调,而PEDF表达上调,这可能是高度近视眼不易发生DR的主要机制.     

色素上皮衍生因子对高氧诱导的新生鼠视网膜病变的影响

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型的影响。方法出生7dWistar大鼠50只,分为空气组、空气PEDF组、高氧组、高氧PBS组和高氧PEDF组5组。氧箱内饲养5d建立高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型,12、14、16d时腹腔内注射PEDF或PBS。在鼠龄17d时,进行视网膜形态学及组织病理学检测,以及血管直径测量、周边视网膜血管覆盖率测定及视网膜新生血管计数。结果视网膜铺片可见高氧组、高氧PBS组较空气组、空气PEDF组新生血管丛增多,高氧PEDF组较高氧组、高氧PBS组视网膜新生血管减少。组织病理学检测突破视网膜内界膜的视网膜新生血管计数可见高氧PEDF组视网膜血管直径明显高于高氧组（P〈0.01）、与空气组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组周边视网膜血管覆盖率明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组视网膜新生血管数量明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PEDF对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型具有抑制作用。     

色素上皮衍生因子与视网膜疾病的研究进展

研究表明色素上皮衍生因子（ pigment epithelium-derived factor, PEDF） 能影响视网膜分化、发育和成熟，对视网膜缺血性损伤有促进修复作用，是新生血管的天然抑制剂。现将PEDF的研究历史、PEDF的结构、生理作用以及与视网膜疾病的关系研究现状综述如 下。（中华眼底病杂志，2003，19：68-70）     

色素上皮衍生因子对大鼠视网膜缺血 再灌注损伤的保护作用

目的已证实色素上皮衍生因子(pigment epithelium-deriv ed factor,PEDF)对中枢神经细胞有抗凋亡作用。本实验评价其对压力诱发的视网膜缺血再灌注的影响。方法经前房灌注维持眼压110 mm Hg (1 mm Hg = 0.133kpa),45 min,建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。 随后立即向玻璃体注射10　μ1(0.1μg/μl)PEDF,分别于2d和7d摘除眼球,测量塑 料包埋切片的平均视网膜内层厚度(mean thickness of inner retinal layer,MTIRL) 和视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGC)计数。结果PEDF玻璃体注射7d后治疗组的MTIRL和RGC明显高于对照组[(118.1±5．0) μm对(949±3.0)μm, P<0.05;(6.0±1．0)个/100 μm对(4.5±0.5)个/100 μm, P<0.05]。结论玻璃体内注射PEDF有助于防止视网膜缺血再灌注后神经变性和细胞死亡。(中华眼底病杂志,2001,17:138-140)     

重组腺相关病毒载体介导的人色素上皮衍生因子对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的影响

目的 以重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)栽体介导的人色素上皮衍生因子(human pigment epithelium-derived factor,hPEDF)转染糖尿病大鼠视网膜,观察其对血-视网膜屏障的影响.方法 雄性Wistar大鼠75只应用链脲佐菌素诱导形成糖尿病模型后,随机分为1个月组、3个月组和6个月组,每组各25只.所有大鼠右眼玻璃体内注射rAAV2-cMV-hPEDF作为治疗组,左眼注射rAAV2-CMV-GFP做自身对照.正常大鼠20只右眼假注射,左眼不注射.应用Evans-Blue 测定血-视网膜屏障的渗漏变化,应用Western-blotting测定ICAM-1和Occludin蛋白的表达情况.结果 随着糖尿病病程进展,视网膜渗漏不断增强,视网膜中Evans-Blue含量不断增加,一直持续到6个月达到高峰.各治疗眼组与自身对照眼组相比视网膜渗漏减轻,其中1个月治疗眼组Evans-Blue含量(68.673±24.083)ng·mg-1低于自身对照眼组(93.850 4±24.969)ng·mg-1,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05);3个月Evans-Blue含量(46.021±16.091)ng·mg-1及6个月(55.198±25.060)ng·mg-1治疗眼组均显著低于自身对照眼组Evans-Blue含量(102.528 4±39.421)ng·mg-1、(128.225±34.603)ng·mg-1(P<0.05).但各治疗眼组与正常眼注射组相比Evans-Blue含量仍显著增加(均为P<0.05).随糖尿病病程进展,视网膜中ICAM-1蛋白含量不断增加,Occludin蛋白含量不断降低.治疗眼组与自身对照眼组相比,ICAM-1蛋白含量均显著下降(均为P<0.01).3个月及6个月治疗眼组与自身对照眼组相比,Occludin蛋白含量均显著升高(均为P<0.01).糖尿病大鼠视网膜ICAM-1与Occludin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.754,P<0.01).结论 rAAV2-CMV-hPEDF玻璃体内注射可增加糖尿病大鼠视网膜Occludin的表达,抑制ICAM-1表达,从而减轻糖尿病大鼠视网膜血管的渗漏.     

A comparative study on the transplantation of different concentrations of human umbilical mesenchymal cells into diabetic rats

AIM: To observe the effects of intravitreal injections of different concentrations of human umbilical mesenchymal stem cells on retinopathy in rats with diabetes mellitus. METHODS: Healthy and adult male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly assigned to a normal control group (group A), a diabetic retinopathy (DR) blank control group (group B), a high-concentration transplantation group (group C), a low-concentration transplantation group (group D) and a placebo transplantation group (group E). The expression of nerve growth factor (NGF) protein in the retinal layers was detected by immunohistochemical staining at 2, 4, 6 and 8wk. RESULTS: The expression of NGF was positive in group A and most positive in the retinal ganglion cell layer. In groups B and E, the expression of NGF was positive 2wk after transplantation and showed an increase in all layers. However, the level of expression had decreased in all layers at 4wk and was significantly reduced at 8wk. In groups C and D, the expression of NGF had increased at 2wk and continued to increase up to 8wk. The level of expression in group C was much higher than that in group D. CONCLUSION: DR can be improved by intravitreal injection of human umbilical mesenchymal stem cells. High concentrations of human umbilical mesenchymal stem cells confer a better protective effect on DR than low concentrations.     

不同途径移植人脐带间充质干细胞对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的 观察人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对糖尿病（DM）大鼠血糖的影响及对视网膜病变的治疗作用。方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠45只,随机分为正常对照组（A组）、DM组,分别为10、35只大鼠。DM组经尾静脉注射链脲佐菌素诱导DM模型。10周时,A组、DM组分别随机选取2只大鼠行视网膜血管铺片。DM组剩余的33只大鼠随机分为糖尿病视网膜病变组（B组）、尾静脉注射hUCMSC 组（C组）、玻璃体腔注射hUCMSC 组（D组）,各组均为11只大鼠。A、B组不进行干预。干预后2、4、6、8周为观察处理时间点。各处理时间点前,连续3 d每次随机选取2只大鼠检测随机血糖。DM组大鼠血糖与同期A组大鼠血糖比较,差异均有统计学意义（t=-64.400、-60.601、-44.065、-43.872,P=0.000）。8周时从B、C、D组随机选取2只大鼠行视网膜血管铺片。免疫组织化学法观察视网膜脑源性神经营养因子（BDNF）阳性染色情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测视网膜BDNF mRNA相对表达量。结果 干预后,不同处理时间点A、B、C、D组大鼠血糖比较,差异均有统计学意义（F=400.017、404.410、422.043、344.109,P=0.000）;C组大鼠血糖与B、D组大鼠血糖比较,差异有统计学意义（t=4.447、4.990、P＜0.01）。免疫组织化学染色结果显示,A组BDNF表达呈阳性,主要分布在神经节细胞层;B组BDNF表达呈弱阳性;C、D组BDNF表达增多。RT-PCR检测结果显示,4、6、8周时,B、C、D组间视网膜BDNF mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义（F=29.372、188.492、421.537,P=0.000）;C、D组视网膜BDNF mRNA相对表达量与B组比较,差异均有统计学意义（t=66.781、72.401、63.880、88.423、75.120、83.002,P＜0.01）;C组视网膜BDNF mRNA相对表达量与D组比较,仅8周时差异有统计学意义（t=127.321,P=0.005）。结论 尾静脉注射hUCMSC能够显著降低大鼠血糖水平;尾静脉或玻璃体腔注射hUCMSC均可增加BDNF的表达。     

Effect of Sonic hedgehog gene-modified bone marrow mesenchymal stem cells on graft-induced retinal gliosis and retinal ganglion cells survival in diabetic mice

AIM: To investigate the effects of Sonic hedgehog (Shh) gene-modified bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) on graft-induced retinal gliosis and retinal ganglion cells (RGCs) survival in diabetic mice. METHODS: Bone marrow-derived MSCs were genetically modified with the Shh gene to generate a stably transfected cell line of Shh-modified MSCs (MSC-Shh). Intravitreal injections of MSC-Shh and green fluorescent protein-modified MSCs (MSC-Gfp; control) were administered in diabetic mice. After 4wk, the effects of MSC-Shh on retinal gliosis were evaluated using fundus photography, and markers of gliosis were examined by immunofluorescence and Western blotting. The neurotrophic factors expression and RGCs survival in the host retina were evaluated using Western blotting and immunofluorescence. The mechanisms underlying the effects of MSC-Shh was investigated. RESULTS: A significant reduction of proliferative vitreoretinopathy (PVR) was observed after intravitreal injection of MSC-Shh compared to MSC-Gfp. Significant downregulation of glial fibrillary acidic protein (GFAP) was demonstrated in the host retina after MSC-Shh administration compared to MSC-Gfp. The extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), protein kinase B (AKT) and phosphatidylin-ositol-3-kinase (PI3K) pathways were significantly downregulated after MSC-Shh administration compared to MSC-Gfp. Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and ciliary neurotrophic factor (CNTF) levels were significantly increased in the host retina, and RGCs loss was significantly prevented after MSC-Shh administration. CONCLUSION: MSC-Shh administration reduces graft-induced reactive gliosis following intravitreal injection in diabetic mice. The ERK1/2, AKT and PI3K pathways are involved in this process. MSC-Shh also increases the levels of neurotrophic factors in the host retina and promoted RGCs survival in diabetic mice.     

人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜光损伤的保护作用

目的　观察体外人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）能否由视网膜匀浆上清液诱导分化为神经样细胞及移植到视网膜光损伤大鼠玻璃体内后存活、迁移、整合及分化的情况。方法　无菌条件下采集健康足月剖宫产胎儿的正常脐带组织，经2.5 g·L^-1胰蛋白酶和1 g·L^-1胶原酶消化、贴壁培养获得hUCMSCs。将CM-Dil标记的hUCMSCs注入光损伤大鼠玻璃体内，观察眼内整合分化情况，对正常对照组、光损伤组、PBS治疗组和hUCMSCs治疗组大鼠视网膜外核层层数和厚度进行对比分析。结果　hUCMSCs培养48 h后贴壁生长，呈长梭形，14 d后可见细胞融合成片。光损伤后大鼠视网膜外核层结构紊乱、细胞层数减少，厚度变薄，与正常对照组［（40.73±1.32）μm］相比，hUCMSCs治疗组［（31.28±1.79）μm］与PBS治疗组［（17.21±1.02）μm］及光损伤组［（12.68±1.42）μm］的视网膜外核层厚度均变薄（均为P<0.05）。与光损伤组相比，PBS治疗组和hUCMSCs治疗组视网膜外核层层数显著增加。结论　HUCMSCs移植到光损伤大鼠玻璃体内后能存活、迁移及整合到受损伤视网膜，hUCMSCs玻璃体内移植可抑制光损伤大鼠光感受器的凋亡。     

Protective effects of umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes in a diabetic rat model through live retinal imaging

AIM: To assess the protective effect of human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes (hucMSC-Exs) in a diabetic rat model by using a variety of retinal bioassays. METHODS: hucMSCs were subjected to differential ultracentrifugation for the collection of exosomes, and transmission electron microscopy (TEM), nanoparticle tracking analysis (NTA) using a NanoSight analysis system and Western blotting (WB) were used to analyze the expression of surface marker proteins such as CD63, CD9 and Calnexin. Streptozotocin (STZ) was injected into the intraperitoneal cavity to establish a diabetic model. Rats were divided into a normal group, diabetic group and hucMSC-Ex group. Fundus fluorescein angiography (FFA), optical coherence tomography (OCT) and other live imaging methods were used to observe the fundus of the rats. Finally, the eyeballs of rats from each group were collected for hematoxylin-eosin (HE) staining to further analyze the retinal structure. RESULTS: Through TEM, NTA and WB, we successfully isolated hucMSC-Exs. Subsequent FFA and OCT confirmed that hucMSC-Exs effectively prevented early retinal vascular damage and thickening of the retina. Finally, HE staining of rat retinal sections revealed that exosomes effectively alleviated retinal structure disruption caused by diabetes. CONCLUSION: hucMSC-Exs have a protective effect on the retina in diabetic rat through FFA, OCT and HE staining.     

PDR及孔源性视网膜脱离玻璃体中PEDF的定量分析

目的定量测定色素上皮细胞衍生因子（PEDF）在增生型糖尿病视网膜病变（PDR）及孔源性视网膜脱离（RRD）患者玻璃体中的质量浓度，探讨其在PDR及RRD发病机制中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法定量检测56例PDR、11例RRD及9例对照组患者玻璃体中PEDF的质量浓度。结果PDR组、RRD组、对照组玻璃体中PEDF质量浓度分别为1．071、1.83、1.53μg／mL，PDR组玻璃体中PEDF质量浓度小于对照组（P〈0．05）及RRD组（P〈0．05）。RRD组玻璃体中PEDF质量浓度大于正常对照组（P〈0.05）。PDR组中Ⅳ期、Ⅴ期、Ⅵ期玻璃体中PEDF质量浓度分别为1．21、1．14、0．81μg／mL。Ⅵ期患者玻璃体中PEDF质量浓度小于Ⅳ期（P〈0.05）及Ⅴ期（P〈0．05）。结论PDR患者玻璃体中PEDF降低，随PDR患者眼底病变的加重，PEDF逐渐降低，PEDF降低与视网膜新生血管的形成有关，其在PDR中起着重要作用。RRD患者PEDF升高，PEDF可能在视网膜脱离的病变过程中起着神经营养作用。     

氩离子激光光凝前后糖尿病大鼠眼内组织中色素上皮衍生因子的表达

目的:观察氩离子激光视网膜光凝后糖尿病大鼠眼玻璃体及视网膜组织内色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)蛋白质表达的变化。方法:选用先天性糖尿病GK大鼠20只,对所有大鼠左眼施行氩离子激光视网膜光凝,右眼不进行光凝,作为自体对照。激光光凝后3d处死动物,取出眼球,WesternBlot和免疫组织化学染色检测玻璃体和视网膜组织中PEDF蛋白质表达的变化。结果:氩离子激光视网膜光凝后糖尿病大鼠玻璃体和视网膜中PEDF蛋白的表达均明显升高(P<0.01);且PEDF蛋白主要存在于RPE细胞层、光感受器细胞层、外核层和神经节细胞层,内核层表达的强度低于上述4层。结论:氩离子激光光凝可以上调糖尿病大鼠玻璃体和视网膜组织PEDF表达,抑制新生血管形成,达到治疗的目的。