miR-455-3p在糖尿病肾脏疾病大鼠肾小球硬化过程中的作用及厄贝沙坦的干预研究

目的：研究miR-455-3p在糖尿病肾脏疾病（Diabetic kidney disease, DKD）大鼠肾小球硬化过程中的作用,以及厄贝沙坦的干预对miR-455-3p及肾小球硬化过程的影响。方法：取雄性SD大鼠24只,随机取6只作为正常组（Control组）,余大鼠采用高脂高糖饲料喂养及链脲佐菌素（STZ）腹腔注射制备DKD模型,造模成功后随机分为模型组（STZ组）、过表达miR-455-3p组（STZ+miR-455-3p组）、厄贝沙坦干预组（STZ+厄贝沙坦组）。其中,STZ+miR-455-3p组在STZ注射后第二周和第五周以20mg/kg的剂量腹腔注射miR-455-3p 激动剂（miR-455-3p agomir）,STZ+厄贝沙坦组予50mg/kg的厄贝沙坦悬浊液灌胃,其他组予等剂量生理盐水灌胃,12周后记录大鼠24h尿量、24h尿白蛋白水平,采用qRT-PCR法检测各组大鼠血清及肾组织中miR-455-3p的表达水平,PAS染色法观察大鼠肾组织病理改变,Western blot方法检测肾组织中胶原蛋白I（Collagen I）和增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen ,PCNA）蛋白表达水平。结果：（1）STZ+miR-455-3p及STZ+厄贝沙坦组大鼠24h尿量、24h尿白蛋白水平较之STZ组明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;（2）STZ+miR-455-3p及STZ+厄贝沙坦组大鼠血清及肾组织中miR-455-3p表达水平较之STZ组明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;（3）STZ+miR-455-3p及STZ+厄贝沙坦组大鼠肾组织中Collagen I、PCNA表达水平较STZ组明显减少。结论：miR-455-3p参与DKD进程,可能是DKD治疗的新靶点,而厄贝沙坦能够通过调控miR-455-3p延缓DKD肾小球硬化进程。     

血清miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p在慢性心力衰竭大鼠中的表达及意义

目的 探讨血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在慢性心力衰竭(CHF)大鼠中的表达及意义。方法 SD大鼠随机分为对照(NC)组(n=15)和CHF组(n=15),采用腹腔注射阿霉素建立CHF模型。建模6周后检测两组心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平及氨基末端脑利钠肽前体(NTpro-BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用Pearson法分析血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与心功能指标、NTpro-BNP、cTnI相关性。结果 与NC组比较,CHF组心功能指标LVEDV和LVESV升高(P<0.05),miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p表达水平升高(P<0.05),NTpro-BNP和cTnI水平升高(P<0.05),LVEF降低(P&...     

肺癌患者血浆miR-197-3p和miR-361-3p表达的诊断评价

目的:评价血浆miR-197-3p和miR-361-3p用于肺癌诊断的价值。方法:采用实时定量PCR法检测57例肺癌患者和53例良性肺病患者血浆中miR-197-3p和miR-361-3p的表达水平。建立这两个血浆miRs的受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断肺癌的效果,并与血清癌胚抗原和细胞角蛋白19(Cyfra21-1)诊断效果进行比较。结果:miR-197-3p和miR-361-3p在肺癌患者血浆中的表达水平明显高于良性肺病患者(均P<0.001)。两指标诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.908和0.869(均P<0.001)。血浆miR-197-3p表达与肺癌的病理组织学类型显著相关(P=0.011);而血浆miR-361-3p表达与肺癌的分化程度及临床分期相关(P=0.005和P=0.015)。血浆miR-197-3p和miR-361-3p测定诊断肺癌的敏感性(78.9%和71.9%)和准确性(81.8%和80%)高于血清癌胚抗原(42.6%和60%)和Cyfra21-1(25%和58.9%),两种miR的联合检测可较大程度提高诊断的敏感性(89.5%)和准确性(85.5%),但特异性略有下降。结论:血浆miR-197-3p和miR-361-3p可作为诊断肺癌的肿瘤标志物,诊断效果优于血清癌胚抗原和Cyfra21-1。     

卵巢癌中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义

目的 检测卵巢癌中microRNA-144-3p（miR-144-3p）与血清和糖皮质诱导蛋白激酶（SGK3）的表达水平,并探究其临床意义。方法 收集2010年3月~2012年7月于笔者医院经手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织和12例正常卵巢组织。实时定量PCR（qRT-PCR）技术检测卵巢癌组织miR-144-3p水平;蛋白质印迹（Western blot）法技术检测卵巢癌组织SGK3水平;分析卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 （1）卵巢癌组织miR-144-3p表达水平显著低于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（2）卵巢癌组织SGK3蛋白表达水平显著高于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（3）卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3蛋白表达水平显著呈负相关（P<0.05）。（4）卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况、分化程度有关（P<0.05）,与患者的年龄、有无腹腔积液、组织学类型无关（P>0.05）。（5）全部患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累积生存率分别为76.56%、53.13%、25.00%。miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为67.57%、37.84%、10.81%;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为88.89%、74.07%、44.44%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.001）。（6）SGK3高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为68.29%、39.02%、9.76%;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为91.30%、78.26%、52.17%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.000）。结论 miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,可能成为上皮性卵巢癌临床治疗及预后的新靶点。     

食管癌组织和癌旁组织miR-9表达差异研究

目的：探讨食管癌癌组织和癌旁组织中miR-9的表达差异,并对潜在的miR-9靶基因进行预测。 方法：采用SYBR Green I染色的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对50例食管癌及配对癌旁正常组织 标本中miR-9基因的表达水平进行定量分析,并运用生物信息学技术对miR-9的靶基因进行预测。结 果：miR-9在食管癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P〈0. 05）,且与患者淋巴结转移有关（P〈0.05）,与性别、年龄、组织学分型、TNM分期无关（P〉0. 05）。对miR-9预测得到GOLPH3、RAB34、 ALCAM靶基因。结论：miR-9在食管癌组织中低表达,而且与淋巴结转移有关,可能在食管癌的发病 中起重要作用。     

绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达

目的：探讨绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p表达。方法：选取30例绝经后骨质疏松妇女(PMOP组)和30例非骨质疏松的绝经后妇女(对照组),髂前上棘穿刺取骨组织300mg,研磨、匀浆,通过RT-qPCR方法分析检测两组miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达水平。结果：miR-338-3p在PMOP组骨组织中的表达水平升高;miR-124-3p、miR-328-3p在PMOP组骨组织中的表达水平降低。结论：miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p可调节成骨、破骨引起PMOP,可通过调控其表达干预PMOP的发生和治疗。     

miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:研究miR-342-3p在乳腺癌中的表达及与临床病理联系?方法:收集2008年1月~2012年8月乳腺癌手术患者组织标本共85例,使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况,应用免疫组化的方法检测乳腺癌组织中雌激素受体(ER)?孕激素受体(PR)?Her-2及P53的表达?结果:miRNA-342-3p在Lumina型乳腺癌组织中高表达,在Her-2高表达型乳腺癌次之,在三阴性乳腺癌组织中表达最低,差异有统计学意义(P < 0.05);miRNA-342-3p的表达与不同ER?Her-2及P53的表达相关,差异有统计学意义(P < 0.05),在不同PR状态?不同年龄组?有无淋巴结转移及与肿瘤大小?组织分级和病理分期间,差异无统计学意义(P > 0.05),癌与癌旁组织间无显著性差异(P > 0.05)?结论:miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型中表达存在差异,可能成为乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌治疗的新靶点?     

不同阶段糖尿病肾病与血浆同型半胱氨酸相关关系的研究

目的;探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)与2型糖尿病(DM)病人合并早期糖尿病肾病的关系。方法:应用化学免疫分析法测定27例正常人及65例不同阶段糖尿病肾病患者血浆同型半胱氨酸水平。结果:①糖尿病正常白蛋白尿组血浆同型半胱氨酸的水平显著高于正常组(P<0.01);②微量白蛋白尿组血浆同型半胱氨酸水平明显高于正常白蛋白组(P<0.01)而显著低平临床白蛋白尿组(P<0.01)③合并高血压者血浆Hcy水平明显高于未合并者(P<0.01)。结论:在微量白蛋白尿阶段前已存在着内皮损伤并伴随肾脏损伤的加重而血浆Hcy水平升高,尤其在高血压组更明显。     

miR-141-3p和miR-22-3p在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨miR-141-3p和miR-22-3p在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法选择2014年1月—2017年1月在河北省邯郸市中心医院普外三科进行手术治疗的胰腺癌患者92例,取其病灶标本及癌旁组织标本,检测其miR-141-3p、miR-22-3p表达量的差异,进一步根据胰腺癌组织中的表达量中位数分为高表达、低表达组各46例。比较不同miR-141-3p、miR-22-3p表达的胰腺癌患者临床病理特征差异,分析不同miR-141-3p、miR-22-3p表达对患者预后的影响,采用COX多因素风险回归模型分析影响胰腺癌患者预后的危险因素。结果胰腺癌组织中miR-141-3p、miR-22-3p的表达量均低于癌旁组织(t=25.883、42.527,P均<0.01)。不同miR-141-3p表达的胰腺癌患者中TNM分期、肿瘤分化程度、远处转移的分布差异有统计学意义(χ~2=4.246、6.500、4.423,P均<0.05),不同miR-22-3p表达的胰腺癌患者中远处转移的分布差异有统计学意义(χ~2=14.331,P<0.01);miR-141-3p、miR-22-3p低表达组患者的生存率低于高表达组患者(χ~2=6.873、5.999,P均<0.05)。TNM分期较高、肿瘤分化程度较低、远处转移、miR-141-3p低表达、miR-22-3p低表达均是导致胰腺癌患者预后不良的危险因素(RR=2.771、1.781、3.185、1.609、1.717,P均<0.05)。结论胰腺癌组织中miR-141-3p、miR-22-3p均呈低表达,可能参与疾病发生发展,且在疾病预后的评估方面具有一定意义。     

miR-25-3p在40例子宫内膜腺癌组织中的表达及对KLE细胞生物学功能的影响

目的 探讨miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中的表达及其对KLE细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。 方法 选取2018年1月至12月在河北医科大学第四医院妇科行手术治疗的子宫内膜腺癌患者40例,采用Real-time PCR方法检测癌和癌旁正常组织中miR-25-3p的表达水平;应用细胞转染技术将miR-25-3p模拟物转染至子宫内膜腺癌细胞KLE中,转染后分为过表达组和对照组;采用Real-time PCR方法检测转染后两组KLE细胞中miR-25-3p的表达水平;分别应用流式细胞术、Transwell试验、基质胶试验及流式细胞Annexin v-PI 双染实验检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡能力。 结果 miR-25-3p在40例子宫内膜腺癌和癌旁组织中的相对表达量分别为0.38±0.91、0.17±0.51,癌组织表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=12.28,P=0.003);增殖实验检测结果显示,两组增殖指数分别为(59.41±0.78)%、(40.69±0.78)%,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(各期两组间均值差异均有统计学意义: G0G1 期t=12.504, P<0.001; S 期t=6.902, P=0.020; G2M期t=4.203, P=0.014;PI期t=12.475,P<0.001);迁移实验检测结果显示,两组迁移细胞个数分别为(28.54±1.73)个、(19.21±1.62)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=8.404, P=0.001);侵袭实验检测结果显示,两组的侵袭细胞个数分别为(36.66±1.53)个、(17.66±1.53)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=15.234, P<0.001);凋亡检测结果显示,两组的细胞凋亡率分别为(2.75±0.58)%、(4.81±0.31)%, 过表达组低于对照组,差异有统计学意义(t=5.443, P=0.006)。 结论 miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中呈高表达。过表达miR-25-3p可能促进子宫内膜腺癌细胞KLE的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。     

miR-324-5p和miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及预后分析

目的 检测多发性骨髓瘤（MM)患者血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平,研究其表达水平和预后的关系。方法收集60例MM患者血清标本,为初治组（20例）、巩固治疗组（20例）、复发难治组（20例）;20例健康人血清标本（健康对照组）,实时荧光定量PCR检测血清中miR-324-5p和miR-215-5p的表达水平。结果与健康对照组比较,MM患者血清中miR-215-5p表达水平下降（P<0.008 3）,初治组和难治复发组患者血清miR-324-5p表达水平下降（P<0.008 3）,巩固治疗组与健康对照组血清miR-324-5p表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）;巩固治疗组血清miR-324-5p表达水平高于初治组及难治复发组（P<0.008 3）;巩固治疗组血清miR-215-5p表达水平高于初治组（P<0.008 3）,巩固治疗和难治复发患者间差异无统计学意义（P>0.008 3）;初治组与复发难治组之间两种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.008 3）。miR-324-5p和miR-215-5p表达水平与β2微球蛋白和红细胞体积分布宽度呈负相关,与血红蛋白呈正相关。初治MM患者血清miR-324-5p和miR-215-5p高表达组无进展生存期高于低表达组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论miR-324-5p和miR-215-5p在MM血清中表达水平降低,miR-324-5p和miR-215-5p可能与疾病密切相关,其低表达可能提示预后不良。     

Angiopoietin-1在糖尿病鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨促血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)在糖尿病鼠肾脏中的表达变化及其意义.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(n=42)和模型组(n=42),建立链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病模型,采用RT-PCR和免疫组化方法,连续多时点观察2组大鼠肾脏Ang-1 mRNA和蛋白表达变化,分析与肾重/体重、尿蛋白、肾小球体积和面积的相关性.结果 糖尿病组4和8周时肾脏Ang-1 mRNA表达上调(P＜0.05),24周时低于对照组(P＜0.05);免疫组化显示Ang-1主要表达于肾小球,糖尿病组4～24周肾小球Ang-1表达均高于对照组(P＜0.05),峰值在4～8周,12周后逐渐下调;Ang-1表达变化与肾重/体重、尿蛋白、肾小球体积和面积呈正相关(r=0.477;r=0.164;r=0.175).结论 糖尿病肾脏存在Ang-1异常改变,表现为早期表达上调,后期表达下调,Ang-1的改变参与了糖尿病肾脏血管结构变化.     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。     

不同分期肺癌组织中Beclin1、p53、p16表达情况分析

目的本文旨在通过对肺癌组织中Beclin1、p53和p16表达的分析，为肺癌早期诊断及其恶性度评估提供可靠数据。方法选择2009年1～12月在山西省汾阳医院就诊的肺癌患者，取肺组织50例，检测样本中不同分期肺癌组织Beclin1、p53、p16的表达情况，对该表达情况与对应的分期进行方差分析与ISD—f检验。结果不同肺癌分期的Beclinl、p53、p16的表达情况之间的差别有统计学意义（P〈0．05）。结论肺癌各临床分期的Beclin1、p53、p16表达情况不一样。随肺癌分期的增高p53表达量增高，p16表达量下调，Beclin1表达量降低。     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。