辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤作用研究进展

对辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤的作用的研究已取得一定的进展,主要涉及人肺腺癌、人乳腺癌、小鼠腹水瘤相关细胞的体外移植瘤模型研究及人肝癌、人结肠癌、人胃癌、人卵巢癌、人红白血病细胞水平的研究。为了进一步了解辽东楤木叶总皂苷在抗肿瘤方面的研究现状并了解其抗肿瘤作用的效果,通过对比前人及课题组在肿瘤体外移植瘤模型制备时细胞密度、辽东楤木叶总皂苷使用剂量、使用时间及在细胞水平中辽东楤木叶总皂苷剂量使用情况,最终发现,辽楤木叶总皂苷达50 mg·kg-1时,即达到一定肿瘤抑制率;100 mg·kg-1时,可以有效抑制肿瘤组织中相关蛋白的表达;并通过抑制肿瘤大小及影响其形态学变化而有效抑制肿瘤的生长。其给药间隔时间及持续时间不同,对不同类型肿瘤模型的作用也有一定的差别。细胞研究时发现,不同浓度对不同细胞的增殖、凋亡有一定的作用,并对其蛋白表达有一定的影响。这些都为辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤的药理作用及临床应用提供更可靠的实验依据。     

辽东楤木叶总皂苷体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)的体外抗肿瘤作用,为进一步将其开发成新靶点的抗肿瘤药物提供可靠的科学依据,为研发具有自主知识产权的抗肿瘤新药奠定坚实的基础。方法利用磺酰罗丹明B(SRB)染色法,观察辽东楤木叶总皂苷不同浓度对A549、BGC、BEL-7402和HCT-8肿瘤细胞的抑制作用。结果 ETS浓度达到31.25μg.ml-1时即可对人肺腺癌A549细胞、人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%生长抑制作用,达到62.5μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%生长抑制作用。其浓度达到125μg.ml-1时即可对人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%杀死的作用。浓度达到500μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%杀死的作用,而对人肺腺癌A549细胞未测出其50%杀死作用。各组均未测出完全抑制细胞生长所需的ETS浓度。对于体外加药48 h后对A549、BGC、BEL和HCT-8细胞OD值的影响,ETS组500,250,125μg.ml-1均有极显著性统计学差异(P<0.01),62.5μg.ml-1对A549、BEL和HCT-8均有显著性意义;31.25μg.ml-1均无统计学意义。结论 ETS体外对人肺癌A549、人胃癌BGC、人肝癌BEL-2、人结肠癌HCT-8肿瘤细胞有一定的抑制作用。     

辽东楤木叶中3个皂苷的鉴定

目的 对辽东楤木叶中分离得到的3个皂苷类化合物的结构进行鉴定。方法 利用多级串联电喷雾质谱结合其它色谱方法对其结构进行分析。结果 分别鉴定为辽东楤木皂苷V、辽东楤木皂苷Ⅶ、辽东楤木皂苷χ。结论 3个皂苷类化合物均为首次从该植物叶中得到。     

辽东楤木叶总皂苷高效薄层色谱指纹图谱分析

目的:建立辽东楤木叶总皂苷高效薄层色谱指纹图谱,并分析不同产地不同采收期的辽东楤木叶成分的差别。方法:采用高效硅胶G薄层板(20 cm×20 cm)载样,以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水(9. 5∶10∶20∶0. 5∶5)为展开剂,以10%浓硫酸乙醇溶液为显色剂,于恒温鼓风干燥箱里100℃条件下加热至斑点清晰,置于365 nm紫外光下照射获得其显色后的荧光高效薄层色谱图,经软件组合处理生成斑点灰度峰曲线,建立共有模式,并进行相似度分析及聚类分析。结果:获得分离度良好、斑点清晰的高效薄层色谱指纹图谱,建立了辽东楤木叶总皂苷薄层色谱指纹图谱共有模式,由10个共有斑点峰组成,并指认了其中的4个斑点峰代表的具体成分。分析表明不同地区8月初至9月中旬的辽东楤木叶相似度较高;聚类分析将11个不同批次的样品聚为一大类。结论:建立的薄层色谱指纹图谱方法简单、快速、可靠,可用于辽东楤木叶药材的鉴定和质量控制评价。确定东北地区8月采收的辽东楤木叶药材均符合质量要求,可作为以总皂苷为主要药效部位的药材使用。     

不同产地和不同采收期辽东楤木叶中两种皂苷的含量测定

目的:测定并比较不同产地和不同采收期辽东楤木叶中3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→3)-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→3)-β-D-葡萄吡喃糖基-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(楤木皂苷TTP)和3-O-[β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)]-[β-D-葡萄吡喃糖基(1→3)]-β-D-葡萄吡喃糖基-齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯(楤木皂苷V)的含量。方法:采用高效液相色谱蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法,使用Diamonsil C_(18)(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(31∶69),流速1.0 m L·min~(-1),柱温30℃,蒸发光散射检测器漂移管温度110℃,载气(N2),流速3.2 m L·min~(-1)。结果:楤木皂苷TTP和楤木皂苷V分别在进样量0.51~2.55μg和0.50~4.00μg线性关系良好,相关系数分别为0.999 8和0.999 2。结果表明,不同产地和不同采收期辽东楤木叶中楤木皂苷TTP和楤木皂苷V的含量有所差异,可能与辽东楤木分布区域、生长季节及叶片生理状态有关,由实验结果可以看出,两种皂苷类成分大多在7,8月的含量相对较高,部分地区9月含量较高。结论:该方法简单、快捷、准确,可以同时测定辽东楤木叶中楤木皂苷TTP和楤木皂苷V的含量,为辽东楤木叶质量控制提供实验依据。     

辽东楤木叶总皂苷的HPLC及抗肿瘤作用谱效关系分析

目的:对辽东楤木叶总皂苷进行HPLC分析并确定不同的极性部位,利用C18反相硅胶(ODS)柱分离获得不同极性部位,比较不同部位的体外抗肿瘤作用效果。方法:辽东楤木叶经70%乙醇提取后通过AB-8型大孔树脂柱,获得总皂苷,用不同体积分数甲醇经ODS柱洗脱分离获得经HPLC确定的不同部位。利用噻唑蓝(MTT)比色法测试不同部位对人肺腺癌细胞株(A549),人宫颈癌细胞株(He La)和人结肠癌细胞株(HT-29)的体外生长抑制作用。结果:由总皂苷HPLC的保留时间确定了5个极性部位,分别为A(保留时间20 min以前的部位,ODS柱上0~25%甲醇洗脱组分),B(保留时间20~45 min,ODS柱上30%~45%甲醇洗脱组分),C(保留时间50~75 min,ODS柱上50%~65%甲醇洗脱组分),D(保留时间80~110 min,ODS柱上70%~75%甲醇洗脱组分)和E(保留时间110 min,ODS柱上80%~100%甲醇洗脱组分)。5个部位给药48 h后对3种细胞的抑制作用明显不同,A部位对3种癌细胞均无抑制作用;B部位对3种癌细胞抑制作用微弱;C,D,E部位对3种癌细胞表现出较强的抑制作用,且明显强于总皂苷,最佳的D部位对A549,Hella和HT-29抑制作用的半抑制浓度分别为4.06,4.29,3.60 mg·L~(-1)。结论:辽东楤木叶总皂苷经HPLC分析后,利用ODS柱进行分离,可获得其抗肿瘤作用的有效部位及最佳部位。     

辽东楤木叶红外光谱指纹图谱分析

目的:对辽东楤木叶药材50%乙醇提取物进行红外光谱分析,建立红外光谱指纹图谱,并分析不同地区不同采收期辽东楤木叶的差别。方法:采用傅里叶红外光谱法对辽东楤木叶提取物干燥品进行红外光谱测试,生成红外指纹图谱共有模式,进行二阶导数分析,并采用SPSS19.0软件对不同批次红外光谱进行相似度分析和聚类分析。结果:建立了东北地区辽东楤木叶指纹图谱,得到18个共有特征峰。确定5、6月份辽东楤木叶成分少、且某些成分含量低,7～9月份的辽东楤木叶相似度大。结论:简单、快捷的辽东楤木叶红外指纹图谱可辅助用于辽东楤木叶质量评价。从红外光谱指纹图谱来看,7、8、9月采收的辽东楤木叶符合药用标准。     

辽东楤木叶总皂苷抗急性肝损伤的实验研究

目的：探讨辽东楤木叶总皂苷（ETS）对急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法：ETS按50～300mg·kg^-1口服给药,连续5天,观察对四氯化碳、D-半乳糖胺、硫代乙酰胺所致急性肝损伤而引起的血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（GOT）升高的作用。结果：ETS对四氯化碳、D-半乳糖胺所致急性肝损伤而引起的ALT和GOT升高具有明显的降低作用,而对硫代乙酰胺所致的ALT：GOT升高作用不明显。结论：ETS保护肝损伤作用机理是通过肝细胞内酶系统的诱导作用,从而使肝细胞的核酸、蛋白质、糖原的合成及能量的合成增加,保护肝细胞膜的正常结构而起到保护肝损伤的作用。     

辽东楤木叶总皂苷对人胃癌BGC细胞凋亡的影响

目的:探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)对人胃癌BGC细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定辽东楤木叶总皂苷在体外对人胃癌BGC细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V/PI双染法检测辽东楤木叶总皂苷作用于人胃癌BGC细胞后引起细胞凋亡的形态特征。结果:MTT比色法结果表明,辽东楤木叶总皂苷各剂量组能不同程度抑制人胃癌BGC细胞的增殖,激光共聚焦FITC-Annexin V/PI双染法检测辽东楤木叶总皂苷可诱导人胃癌BGC细胞出现凋亡早、中、晚期的细胞形态。凋亡早期仅细胞膜呈绿色,细胞核不染色;凋亡中、晚期则细胞膜呈绿色,细胞核呈红色。结论:辽东楤木叶总皂苷能够有效抑制癌细胞增殖、诱导凋亡,具有明显的抗肿瘤作用。     

辽东楤木叶总皂苷对卵巢癌细胞的抑制作用及其对线粒体凋亡途径的影响

目的：探讨辽东楤木叶总皂苷（TALAS）对上皮性卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及其可能的作用机制。方法：MTT法检测TALAS对SKOV3细胞的抑制作用,绘制抑制曲线;Hoechst33258染色观察不同浓度作用后,SKOV3细胞核形态上的变化;蛋白印迹实验检测药物作用后线粒体凋亡通路中关键蛋白质的表达变化。结果：TALAS对SKOV3细胞具有明显的抑制作用,且呈现时-量依赖性;不同浓度TALAS作用后,SKOV3细胞核出现：核固缩、核碎裂等变化;用药前后,bcl-2蛋白表达随药物浓度增加而下降,bax、Apaf-1、cyt-c蛋白质表达水平升高,且具有浓度依赖性。结论：TALAS可促使SKOV3细胞发生凋亡,其作用机制可能与其激活线粒体凋亡途径有关。     

楤木单体的结构改造及抗炎活性研究

目的对楤木Aralia elata中的单体成分金盏花苷E进行结构改造,并对其结构改造后的类似物进行体外抗炎活性研究。方法以天然易得的齐墩果酸为起始原料,经苷元28位羧基保护、3位糖苷化、28位羧基脱保护、28位羧基酰胺化、胺基侧链酰胺化、糖基苯甲酰基脱保护、甲叉基脱保护共7步反应制得目标化合物,利用巨噬细胞RAW264.7模型评价化合物的抗炎活性。结果设计并合成了10个金盏花苷E的结构类似物G1~G5和H1~H5,均经谱学技术确证结构。生物活性实验结果表明,10个化合物对RAW264.7细胞呈现不同程度的抗炎活性,其中化合物G1~G4、H1~H3的抗炎活性优于先导物。结论化合物G1~G5和H1~H5均为未见文献报道的新化合物,具有潜在的抗炎活性,值得深入研究。     

辽东楤木单体化合物的结构修饰及生物活性研究

目的基于药用植物辽东楤木Aralia elata中的单体五环三萜皂苷类天然产物齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸进行结构修饰,并对其结构修饰物进行体外心肌保护活性研究。方法分别以苷元齐墩果酸和熊果酸为起始原料,通过苄基保护、糖苷化、苄基脱保护、酰胺化、苯甲酰基脱保护共5步反应制得目标化合物,利用H9c2细胞评价该类衍生物的心肌保护活性。结果设计并合成10个辽东楤木单体化合物的结构衍生物F1~F10,均经波谱技术确证结构。药理结果表明,10个化合物对H9c2细胞呈现不同程度的心肌保护活性,其中化合物F3的心肌保护活性与先导物活性相当。结论化合物F1~F10均为未见文献报道的新化合物,具有潜在的心肌保护活性,值得深入研究。     

基于谱效关系的肉桂改善肾阳虚作用的质量标志物(Q-Marker)研究

目的 建立基于谱效关系的肉桂(Cinnamomum cassia的干燥树皮)改善肾阳虚作用的质量标志物(quality marker,Q-Marker)研究方法 ,为其药效物质基础及质量控制研究提供依据.方法采用高效液相色谱法,建立不同产地肉桂水煎液及甲醇提取物的指纹图谱.采用氢化可的松建立小鼠肾阳虚症模型,以体质量增...     

辽东楤木总皂苷降血糖作用研究

目的测定辽东楤木总皂苷降血糖活性.方法:辽东楤木总皂苷以120,60,30mg·kg-1剂量连续灌胃给正常小鼠9d;以100,50,25mg·kg1剂量连续给药四氧嘧啶诱导高血糖家兔4周;以120,60,30mg·kg-1剂量单次给药链脲霉素致高血糖小鼠,并分别于给药后测定血糖值.结果:辽东楤木总皂苷连续给药120,60mg·kg-1两剂量组使受试正常小鼠血糖明显降低;总皂苷连续灌胃给药,可使四氧嘧啶高血糖家兔血糖值明显降低,且随给药时间延长其降糖作用日趋明显,停药后其降糖作用可维持2～4h;单次灌胃给药,三剂量组于给药后2、4h使链脲霉素诱导的高血糖小鼠血糖明显降低,与给药前比较有非常显著或显著差异.结论:辽东楤木总皂苷具有较好的降血糖活性.     

3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体的电喷雾质谱区分

该研究采用超高效液相色谱串联三重飞行时间质谱(UPLC-Triple-TOF-MS)对3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体(Ⅵ,Ⅶ和B)进行质谱区分。通过分析楤木皂苷Ⅵ(1)和楤木皂苷Ⅶ(2)的[M+Na]+的二级质谱(CE=90 e V),二者在m/z981.502 5[Y0α+Na]+,819.443 3[Y0α-Glc+Na]+,527.157 2[C3β+Na]+,509.150 4[B3β+Na]+和365.106 5[C3β-Glc+Na]+处产生了相同的碎片离子峰,而楤木皂苷B(3)的[M+Na]+二级质谱在m/z 671.198 2和689.208 7处产生了2个明显不同的碎裂离子峰,其分别归属于[B4β+Na]+和[C4β+Na]+。因此,[B4β+Na]+和[C4β+Na]+可作为化合物3区分其他两个异构体(1和2)的特征性的诊断离子。进一步分析楤木皂苷Ⅵ(1)和楤木皂苷Ⅶ(2)的[M+NH4]+或[M+H]+的二级谱图(CE=40 e V),二者在m/z 455.350 7和437.341 2处产生相同的苷元脱水碎片离子峰,其分别归属于[苷元-H2O+H]+和[苷元-2H2O+H]+。楤木皂苷Ⅵ(1)的苷元类型是刺囊酸,其[苷元-2H2O+H]+和[苷元-H2O+H]+的离子强度比值1,而楤木皂苷Ⅶ(2)的苷元类型是常春藤,其[苷元-2H2O+H]+和[苷元-H2O+H]+的离子强度比值1,基于此可以有效区分楤木皂苷Ⅵ(1)和楤木皂苷Ⅶ(2)。以上研究表明,利用电喷雾二级质谱法可以快速、简便、准确地区分3种楤木皂苷(Ⅵ,Ⅶ和B)异构体。     

辽东楤木不同部位中齐墩果酸的含量测定

用薄层扫描法测定了辽东楤木根皮,茎皮和叶3个部位中齐墩果酸含量,结果分别为5.59%,3.67%和1.05%。回收率99.56%。     

辽东楤木不同部位中齐墩果酸的含量测定

用薄层扫描法测定了辽东楤木根皮,茎皮和叶3个部位中齐墩果酸含量,结果分别为5.59%,3.67%和1.05%。回收率99.56%。     

龙牙楤木皂苷类成分及药理活性研究进展

龙牙楤木Aralia elata为五加科楤木属植物,广泛分布于亚洲地区,在我国东北三省的储量极为丰富,而且龙牙楤木在民间作为重要药物来源用于治疗糖尿病、关节炎、心肌梗死等多种疾病.近年来,该植物受到越来越多的关注,并得到了深入研究.在化学成分方面,从其中分离得到100余种皂苷类成分;在药理研究方面,发现龙牙楤木总皂苷具有保护心血管、抗肿瘤、抗炎等多种重要的生物活性.通过检索,围绕龙牙楤木的化学成分及其药理活性等相关研究报道进行系统的总结,并对其研究现状进行剖析,以期为其深入开发利用提供参考.