miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用

目的　探讨miR-181a对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人小梁网细胞（HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法　HTMCs随机分为空白组（0 μmol·L^-1 H₂O₂）、200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组,分别使用相应浓度H₂O₂处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）蛋白表达。根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针检测各组细胞内活性氧（ROS）含量,使用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果　与空白组比较,200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组细胞存活率均降低（均为P<0.05）。细胞miR-181a mRNA的表达随着H₂O₂浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H₂O₂浓度的增加而降低（均为P<0.05）。与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高（均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达。与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低（均为P<0.05）。结论　miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H₂O₂诱导的HTMCs氧化应激作用。     

miR-21对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及作用机制

目的　探讨MicroRNA-21（miR-21）对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖的影响及作用机制。方法　采用Real-time PCR技术检测miR-21在正常视网膜组织和确诊RB组织中的表达情况；然后在转染的基础上运用MTT检查RB细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白PDCD4、Bax、Bcl-2的表达。结果　与正常视网膜组织miR-21表达 （0.703±0.071）相比，RB组织miR-21为高表达（2.214±0.162），差异有统计学意义（P<0.01）。在Weri-Rb-1细胞中，与NC组(2.245±0.213)相比，miR-21抑制剂转染后明显降低了miR-21的表达水平，miR-21 inhibitor组为0.683±0.075,差异有统计学意义 （P<0.01）。两组细胞转染后24 h、48 h、72 h、96 h，MTT测定法检测细胞活力结果显示:两组24 h的A值比较，差异无统计学意义 （P>0.05），miR-21 inhibitor 组在 48 h、72 h、 96 h的A值均低于 NC 组，差异均有统计学意义 （均为P<0.01）。流式细胞术检测结果显示:NC组凋亡细胞在总细胞中百分比为（3.045±0.301）%和（4.832±0.493）%，miR-21 inhibitor组凋亡细胞在总细胞中百分比为（2.593±0.257）%和（40.167±4.014）%，miR-21 inhibitor组Weri-Rb-1细胞的凋亡率明显高于miR-21 NC组(P<0.01)。Western blot检测结果显示:NC组PDCD4表达（0.192±0.045）相比miR-21 inhibitor组（0.683±0.091）表达明显减少，NC组Bax的蛋白表达水平（0.143±0.036）相比miR-21 inhibitor组（1.192±0.054）也明显减少，差异均有统计学意义（P<0.01)，NC组Bcl-2蛋白表达（0.864±0.038）相比miR-21 inhibitor组（0.257±0.026）明显增多，差异有统计学意义（P<0.05)。结论　miR-21是RB的促癌基因，miR-21抑制剂可以通过降低miR-21表达抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡，这一过程与PDCD4、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白有关。     

miR-146a对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖和新生血管生成的影响及其机制

目的　探讨miR-146a对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）增殖和新生血管生成的影响及其机制。方法　选取对数生长期的HRMEC,将细胞分为正常组、高渗组、高糖组、阴性对照组、miR-146a mimics组、miR-146a mimics+IL-17A组。正常组细胞用含5.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖的培养基培养24 h,高渗组细胞用含5.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖和50 mmol·L^-1甘露醇的培养基培养24 h;其余各组细胞先用含30 mmol·L^-1 D-葡萄糖的培养基培养24 h后,阴性对照组、miR-146a mimics组、miR-146a mimics+IL-17A组分别转染阴性对照序列+pcDNA3.1空质粒、miR-146a mimics质粒、miR-146a mimics+pcDNA3.1-IL-17A质粒。采用MTT法检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移活性,Matrigel法检测细胞管腔形成情况,Western blot法检测相关蛋白表达。结果　与正常组相比,高糖组细胞活力、细胞迁移率和细胞环状结构数量均升高,VEGF、VEGF受体2、白细胞介素-17A、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT)蛋白表达亦均升高（均为P<0.05）;而miR-146a mimics组上述指标则较高糖组均降低（均为P<0.05）;miR-146a mimics+IL-17A组上述指标均高于miR-146a mimics组（均为P<0.05）。结论　上调miR-146a表达可有效地降低高糖诱导的HRMEC增殖和新生血管生成,其作用机制可能与降低IL-17A表达进而抑制PI3K/AKT通路激活有关。     

人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对PI3K-Akt信号通路的调控作用

目的　探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路的调控作用。方法　利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼（实验眼）近视模型，右眼为对照眼，采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184以及PI3K-Akt信号通路相关mRNA的表达水平，采用Pearson相关分析豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR) mRNA表达水平的相关性。体外培养人巩膜成纤维细胞，并分为对照组（mimics对照组）、高表达组（转染miR-184 mimic）、低表达组（转染anti-miR-184）和PI-103组（加入PI3K通路抑制剂PI-103）。采用Western blot检测各组人巩膜成纤维细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达水平，流式细胞检测技术检测细胞增殖，Annexin V-FITC染色观察细胞凋亡。结果　豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均明显低于对照眼(均为P<0.05)，且实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈正相关性(均为P<0.05)。体外实验中，培养24 h、48 h、72 h、96 h时，高表达组人巩膜成纤维细胞增殖倍数>对照组>低表达组>PI-103组；培养24 h 时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数比较差异无统计学意义（P>0.05）；培养48 h、72 h、96 h时，4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数整体比较以及组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。培养24 h时，4组人巩膜成纤维细胞凋亡率差异有统计学意义（P<0.05），PI-103组>低表达组>对照组>高表达组，组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。培养72 h时，4组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平差异均有统计学意义（均为P<0.05），高表达组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平>对照组>低表达组>PI-103组，组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　近视眼的发生、发展与巩膜组织中miR-184表达下调有关，其作用机制可能为miR-184表达下调导致PI3K-Akt信号通路调控受阻，进而抑制巩膜成纤维细胞增殖以及促进细胞凋亡。     

上调microRNA-27b对血小板衍生因子诱导下的人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

目的　观察过表达的microRNA-27b(miR-27b)对血小板衍生因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导下的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）增殖的抑制作用，探讨miR-27b在ARPE细胞生物学行为中的作用及其调控机制。方法　将miR-27b过表达质粒或空载体转入ARPE-19细胞36 h后，用终浓度为20 μg·L^-1的PDGF预处理ARPE-19细胞5 h。根据转染物不同，将实验分为空白对照组（control组）、miR-27b阴性对照组（miR-27b NC组）、miR-27b模拟物转染组（PDGF+mimics组）和空载体转染组（PDGF+NC组）。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染后各组ARPE-19细胞中miR-27b的表达水平；MTT法测定各组细胞活性；通过流式细胞术评估各组细胞周期的分布变化；Western blot检测各组细胞周期的正向调控因子cyclinD1、CDK4和负向调控因子p21^CIP1和p27^KIP1的表达水平。结果　qRT-PCR检测结果显示:经PDGF处理5 h，与miR-27b NC组相比，PDGF+NC组miR-27b的表达显著降低（P<0.01）；与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的表达增加（P<0.01）。MTT检测结果显示:与miR-27b NC组相比，PDGF+NC组ARPE-19细胞的光密度（D）值增加(P<0.01)；而与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组可明显抑制ARPE-19细胞的D值(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示:与空白对照组和miR-27b NC组相比，PDGF+NC组G0/G1期细胞的百分比显著降低，S期细胞的百分比增加（P<0.05）；而与PDGF+NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的过表达显著增加了G0/G1期细胞的百分比，并抑制了细胞增殖（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示:与PDGF-NC组相比，PDGF+mimics组miR-27b的过表达可显著降低cyclinD1蛋白和CDK4蛋白的表达，同时增强了p21^CIP1蛋白和p27^KIP1蛋白的表达（均为P<0.05）。结论　上调miR-27b表达可抑制PDGF诱导的ARPE细胞增殖。     

miR-101表达上调对视网膜母细胞瘤细胞的增殖及侵袭能力的抑制作用

目的　探究miR-101对视网膜母细胞瘤增殖及侵袭能力的影响。方法　收集31例视网膜母细胞瘤组织及7例正常视网膜组织。培养人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181及视网膜母细胞瘤系HXO-Rb44。Lipofectamine 2000转染HXO-Rb44细胞并分组:阴性对照（normal control,NC）1组［转染microRNA（miR）-101阴性对照物］、miR-101表达组（转染miRNA-101类似物）;NC 2组［转染组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶（EZH2）阴性对照序列］、siRNA-EZH2组（转染EZH2siRNA）、siRNA-EZH2+mimics组（转染EZH2siRNA和miRNA-101类似物）和EZH2+mimics组（转染EZH2表达载体和miRNA-101类似物）。正常HOX-Rb44细胞作为空白组。采用qRT-PCR检测miR-101、EZH2 mRNA表达,Western blot检测EZH2蛋白表达。MTT及Transwell实验分别测定细胞增殖及侵袭能力。荧光素酶报告基因实验确定miR-101和EZH2的靶向关系。裸鼠体内移植实验测定细胞体内增殖能力。结果　与正常视网膜组织和ACBRI-181细胞相比,视网膜母细胞瘤组织及HXO-Rb44细胞中miR-101的相对表达量均明显下调（均为P<0.05）。EZH2 mRNA及蛋白在miR-101表达组中的相对表达量均显著低于空白组和NC1组（均为P<0.05）。72~96 h,miR-101表达组的吸光度（A）值均显著低于空白组及NC1组（均为P<0.01）。miR-101表达组侵袭细胞数量（51±6）均显著低于空白组（97±11）及NC1组（92±8）（均为P<0.01）。EZH2是miR-101的靶基因。48~96 h,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的A值均显著低于空白组和NC2组（均为P<0.01）;72~96 h,siRNA-EZH2+mimics组的A值明显低于siRNA-EZH2组（P<0.05）;24～96 h,EZH2+mimics组的A值与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义（均为P>0.05）。siRNA-EZH2组侵袭细胞数量（48±4）和siRNA-EZH2+mimics组（38±3）均显著低于空白组（95±10）和NC2组（90±6）（均为P<0.01）,siRNA-EZH2+mimics组侵袭细胞数量明显低于siRNA-EZH2组（P<0.05）,EZH2+mimics组侵袭细胞数量与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义（均为P>0.05）。裸鼠体内移植5～7周,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积均显著低于空白组和NC2组（均为P<0.01）,siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积明显低于siRNA-EZH2组（P<0.05）,EZH2+mimics组的肿瘤体积与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　miR-101上调后可抑制HXO-Rb44细胞的增殖及侵袭能力,这可能是通过抑制EZH2表达实现的。     

OTUD6B-AS1通过miR-21-5p对高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移的影响

目的　探讨高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19)中含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)的功能及其作用机制。方法　取ARPE-19细胞,加入含30 mmol·L^-1葡萄糖的培养基培养,设为高糖组,另取ARPE-19细胞不做任何处理设为对照组。用Lipofectamine^TM 2000转染试剂分别将过表达空质粒（pcDNA-NC组）、OTUD6B-AS1过表达质粒（pcDNA-OTUD6B-AS1组）和OTUD6B-AS1过表达质粒＋miR-21-5p 模拟物（pcDNA-OTUD6B-AS1+miR-21-5p mimics组）转染进高糖诱导的ARPE-19细胞。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中OTUD6B-AS1和miR-21-5p的表达;用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;荧光素酶报告基因实验验证OTUD6B-AS1与miR-21-5p的靶向关系。结果　与对照组比较,高糖组ARPE-19细胞中OTUD6B-AS1表达量显著降低、miR-21-5p表达量显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组比较,高糖组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率和迁移率均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-OTUD6B-AS1组中细胞增殖率和迁移率显著升高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示,OTUD6B-AS1可靶向miR-21-5p。与pcDNA-OTUD6B-AS1组比较,pcDNA-OTUD6B-AS1＋miR-21-5p mimics组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率和迁移率显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05）。结论　OTUD6B-AS1可抑制高糖诱导的ARPE-19细胞凋亡,并促进细胞增殖和迁移,其作用机制与miR-21-5p有关。     

mTOR-siRNA转染人晶状体上皮细胞对PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p70S6K及4EBP1表达的影响

目的　研究mTOR-siRNA转染人晶状体上皮细胞系B3(human lens epithelial line B3,HLEB3)后,对PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p70S6K及4EBP1表达的影响,并与雷帕霉素的作用作对比。方法　HLEB3分为mTOR-siRNA组（培养基加入Lipo2000和mTOR-siRNA）、control-siRNA组（培养基加入Lipo2000和control-siRNA）、Lipo2000组（培养基加入Lipo2000）、雷帕霉素组（培养基加入雷帕霉素）和空白对照组,于转染24 h、48 h、72 h后观察各组细胞的形态和密度;Western blot法检测各时间点各组细胞p70S6K及4EBP1蛋白的表达情况。结果　mTOR-siRNA组随着转染时间延长,HLEB3细胞分布稀疏、形态不规则,部分细胞贴壁不良。转染24 h、48 h、72 h时,mTOR-siRNA组细胞密度均较其他四组低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。转染24 h后,各组细胞4EBP1蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）,但与空白对照组相比,mTOR-siRNA组及雷帕霉素组p70S6K蛋白表达均下降（均为P<0.05）;转染48 h、72 h后,与空白对照组相比,mTOR-siRNA组及雷帕霉素组4EBP1及P70S6K蛋白表达均下降（均为P<0.05）,而control-siRNA组、Lipo2000组4EBP1、P70S6K蛋白表达与空白对照组相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　mTOR-siRNA及雷帕霉素均可影响HLEB3的增殖及生长活性,并抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p70S6K和4EBP1的表达,且mTOR-siRNA的早期作用较雷帕霉素强。     

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的　探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法　收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）含量。结果　ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关（r=-0.935,-0.951,均为P<0.05）。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。应用H₂O₂刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H₂O₂ HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低（均为P<0.05）;而circZNF292 siRNA组+H₂O₂细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H₂O₂均进一步升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低（均为P<0.05）。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转（均为P<0.05）。结论　circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。     

MicroRNA-4516、MicroRNA-198在视网膜母细胞瘤Y79细胞中的表达及其意义

目的 探究MicroRNA-4516(miR-4516)、MicroRNA-198(miR-198)在视网膜母细胞瘤(RB)Y79细胞中的表达及其临床意义.方法 收集2018年3月至2021年3月行眼球摘除术治疗的35例RB患儿的肿瘤组织及30例正常视网膜组织标本,比较肿瘤组织、正常视网膜组织和Y79细胞中miR-45...     

miR-130b在人视网膜母细胞瘤中的表达及促癌机制研究

目的：检测miR-130b在人视网膜母细胞瘤(RB)中的表达并初步探究其促癌机制。

方法：采用qRT-PCR检测miR-130b在人RB癌组织及癌旁组织、人RB细胞系(HXO-Rb44与Y79)中的表达; 采用qRT-PCR、Western Blot及免疫荧光实验检测miR-130b过表达及干扰前后HXO-Rb44与Y79细胞中PTEN的表达水平; 采用双荧光素酶报告基因试验验证miR-130b与PTEN的靶向关系; 采用共转染实验考察PTEN与miR-130b影响RB细胞系PI3K/Akt信号通路表达的关系。

结果：miR-130b在RB癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。与ACBRI-181细胞比较,miR-130b在HXO-Rb44与Y79细胞中的表达水平显著增高(P<0.05)。与RB癌组织比较,PTEN在其癌旁组织中的表达水平显著增高(P<0.05); miR-130b表达水平与PTEN表达水平呈负相关性(P<0.001)。过表达miR-130b后的HXO-Rb44细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著降低,而干扰miR-130b后的Y79细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与miR-130b mimics+PTEN-NC组比较,miR-130b mimics+wt-PTEN组荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。共转染miR-130b mimics+PTEN-NC HXO-Rb44细胞p-Akt 308与p-Akt 473蛋白表达水平显著增高(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 共转染miR-130b mimics+PTEN HXO-Rb44细胞中,以上三种蛋白表达水平均未发生明显改变。

结论：miR-130b在RB组织及细胞系中呈高水平表达,PTEN为miR-130b的靶基因,miR-130b可能是经负向调控PTEN对PI3K/Akt信号通路的表达产生影响,最终发挥促癌作用。     

miR-373在视网膜母细胞瘤Y79细胞中的表达及其抑制侵袭及迁移能力的实验研究

目的　观察miR-373在视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）细胞中的表达及其对RB Y79细胞侵袭及迁移能力的影响和相关机制。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-373在RB细胞系RB Y79、SO-RB50和人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中的表达水平,并应用脂质体转染法将miR-373 抑制物（miR-373抑制物组）和阴性对照（NC组）分别转染至Y79细胞,Transwell实验检测Y79细胞侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测Y79细胞中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标志物E-Cadherin、Vimentin和N-Cadherin蛋白的表达变化。结果　qRT-PCR 结果显示,RB细胞系Y79、SO-RB50中miR-373的相对表达量分别为6.21±0.34、5.40±0.38,明显高于人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中miR-373的相对表达量（1.02±0.04）（均为P＜0.05）。Transwell实验显示,miR-373抑制物组迁移细胞数（74±13）个,明显低于NC组（180±17）个（P＜0.05）,miR-373抑制物组侵袭细胞数（51±9）个明显低于NC组（113±14）个（P＜0.05）。Western blot结果显示,miR-373抑制物组E-Cadherin蛋白的表达（0.40±0.08）明显高于NC组（0.20±0.06）（P＜0.05）,Vimentin蛋白的表达（0.17±0.06）也明显低于NC组（0.51±0.10）（P＜0.05）,N-Cadherin蛋白的表达（0.12±0.06）也明显低于NC组（0.33±0.08）（P＜0.05）。结论　miR-373在RB细胞中表达异常增高,降低miR-373的表达能够通过调控EMT抑制RB Y79细胞的侵袭和迁移能力,为RB的靶向治疗提供了新的潜在靶点。     

MiR-145对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨MicroRNA145（miR．145）对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响。方法实验研究。将人视网膜母细胞瘤细胞株Y79分为四组：miR-145干预组、阴性miRNA对照组、空脂质体组、空白对照组。脂质体转染法将miR．145转入Y79细胞;荧光定量PCR检测转染后48h成熟miR．145的表达：CCK．8法检测转染48h后的细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期;AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术检测细胞凋亡。各组数据的比较采用单因素方差分析。结果采用脂质体转染方法．成功将miR．145转染至Y79细胞;荧光定量PCR显示：miR．145干预组成熟miR．145表达（79．06±3．45）明显增加,与阴性miRNA对照组（1．06±0．03）、空脂质体组（O．93±O．02）和空白组（1．00±0．02）比较,差异有统计学意义（F=229．853,P〈0．05）;miR-145干预组的增殖抑制率（21．64％）明显高于阴性miRNA对照组（2．57％）、空脂质体组（3．97％）（F=34．130,P〈0．05）;miR．145抑制Y79细胞周期于G1期：AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术显示miR．145干预组AnnexinV阳性和AnnexinV／PI双阳性细胞明显增多,阳性率明显高于其他三组,差异有统计学意义（F=35．434,P〈0．05）。结论miR-145可以抑制视网膜母细胞瘤细胞Y79的增殖,诱导细胞凋亡。     

miRNA-19对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨miR-19在葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞中的表达及其对UM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 qRT-PCR检测正常视网膜上皮细胞系ARPE-19和UM细胞系 SP6.5、M23中 miR-19的表达.将 M23细胞分为 miR-19 inhibitor 组(转染 miR-19-inhibit...     

基于miR-224-5P调控的IL6ST/JAK/STAT信号通路在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用

目的 探讨miR-224-5P在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达变化及其在高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中的作用和机制。方法 抽取DR患者及健康人群各6名的外周血,RT-qPCR检测miR-224-5P相对表达量。将正常培养的ARPE-19细胞随机分成高糖组(给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+miR-224-5P mimics组(转染100 nmol·L^-1miR-224-5P mimics后给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+miR-224-5P inhibitor组(转染100 nmol·L^-1miR-224-5P inhibitor后给予30 mmol·L^-1高糖)、高糖+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L^-1OE-IL6ST后给予30 mmol·L^-1高糖)和高糖+miR-224-5P mimics+OE-IL6ST组(转染100 nmol·L^-1miR-224-...