TLR4激动对内皮细胞粘附功能的影响及阿托伐他汀的干预研究

目的：观察Toll样受体4（TLR4）激动对脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体LOX-1的调节和对单核细胞与HUVECs粘附率的影响，以及LOX-1在内皮细胞粘附功能中的作用，并观察阿托伐他汀的干预作用方法：RT-PCR方法检测TLR4、LOX-1 mRNA表达水平，流式细胞术检测TLR4、LOX-1蛋白表达水平，细胞计数法计算单核细胞与HUVECs粘附率。结果：脂多糖(1 mg/L) 孵育24 h上调HUVECs TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白的表达，增加单核细胞与HUVECs粘附率,抗LOX-1抗体部分抑制LPS介导的单核细胞与HUVECs粘附率的增加，阿托伐他汀（10 μmol/L）抑制脂多糖介导的上述效应。结论：TLR4激动上调LOX-1表达及增加内皮细胞粘附功能，LOX-1在LPS介导的单核内皮细胞粘附功能中起部分作用，阿托伐他汀可能通过抑制TLR4表达及TLR4 介导的LOX-1表达而发挥其内皮细胞保护作用。     

Ox-LDL通过LOX-1双重调节血管内皮细胞炎性分子的表达

目的： 探讨LOX-1/PPARγ信号途径对Ox-LDL诱导血管内皮细胞炎性分子表达的影响。方法： 用聚肌苷酸［poly(I)］、卡拉胶（carrageenan）、15脱氧前列腺素J₂（15d-PGJ₂）以及Ox-LDL与脐静脉内皮细胞（HUVECs）作用，用realtime RT-PCR测定LOX-1和PPARγ、RT-PCR测定ICAM-1和E-selectin的mRNA的表达；用Western blotting测定PPARγ、ICAM-1和E-selectin蛋白的表达。结果： Ox-LDL可以显著上调PPARγ mRNA和蛋白的表达（P<0.01），并呈明显的剂量效应关系，poly(I) 和 carrageenan可以显著抑制Ox-LDL对PPARγ的上调作用。在HUVECs中预先单独加入15 d-PGJ₂或与polyinosonic acid一起预先作用，然后再加入Ox-LDL。15d-PGJ₂可以降低Ox-LDL诱导的ICAM-1、E-selectin和LOX-1的表达；PPARγ的受体激动剂与LOX-1的受体阻断剂联合作用，其降低ICAM-1和E-selectin表达的作用比单独使用15d-PGJ₂或polyinosonic acid要显著。结论： Ox-LDL一方面引起血管内皮细胞的炎性损伤，另一方面启动细胞抗炎作用，在炎性反应过程中呈现双重的调节作用。     

沉默lncRNA ANRIL对Ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡相关蛋白的影响

目的：探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA(ANRIL对氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡相关蛋白的影响。方法：培养HUVECs，设置空白对照（control）组和不同浓度（25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L）Ox-LDL诱导组，用RT-qPCR检测ANRIL的表达量。采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默ANRIL基因表达，将siANRIL(ANRIL基因沉默组)和siNC（沉默对照组）转入细胞内，培养24 h，再选择最佳Ox-LDL浓度（100 mg/L）干预24 h进行实验。用RT-qPCR检测转染ANRIL干扰片段后人脐静脉内皮细胞中ANRIL表达情况，Western blot检测BAX和BCL-2的相对表达量。结果：Ox-LDL干预组ANRIL表达量较control组显著增高（P<0.05），且随着Ox-LDL浓度增加，ANRIL的表达越高（P<0.05）。转染ANRIL干扰片段后，与control组相比较，Ox-LDL组、Ox-LDL+siNC组和Ox-LDL+s...     

氧化修饰低密度脂蛋白对内皮细胞功能的影响

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对内皮细胞NO／ET-1、t-PA／PAI-1合成、细胞表面细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs），在分另0加入不同浓度ox-LDL（50、100、150、200mg／L）孵育24h后，观察培养液中NO、ET-1、t-PA、PAI-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。结果 ox-LDL可显著抑制NO、t-PA的合成。ox-LDL还可明显增加ET-1、PAI-1的分泌及诱导细胞表面ICAM-1的表达。结论 ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用，它对NO／ET-1、t-PA／PAI-．1及ICAM-1表达的影响可能是其致动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

绿原酸调控miR-124/STAT3轴减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞炎症损伤

目的：探讨绿原酸（CGA）通过调节miR-124/信号转导和转录活化因子3(STAT3)轴对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症损伤的影响。方法：体外培养HUVECs细胞，分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+CGA 25、50、100μmol/L组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+NC inhibitor组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+miR-124 inhibitor组，ox-LDL浓度均为150μg/ml。RT-qPCR检测细胞中miR-124、STAT3 mRNA水平；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；ELISA检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平；Western blot检测细胞中STAT3、CyclinD1、Bax、Caspase-3蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与STAT3的靶向关系。结果：与对照组相比，ox-LDL组HUVECs凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著升...     

内脏脂肪素通过氧化低密度脂蛋白受体1介导血管内皮细胞炎症反应及坏死性凋亡的研究

本研究旨在探索脂肪细胞因子内脏脂肪素(Visfatin)能否诱导血管内皮细胞(VEC)发生炎症及坏死性凋亡(Necroptosis),并初步探讨其机制。体外分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),单独使用Visfatin刺激或在阻断氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)后给予Visfatin刺激,采用Western blot、RT-PCR、免疫细胞化学法、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT、流式细胞化学法等观察细胞炎症及Necroptosis的发生情况。结果显示,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可诱导HUVECs中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和LOX-1的mRNA及蛋白水平表达显著上调;而LOX-1抑制剂聚肌苷酸预处理可明显降低Visfatin诱导的MCP-1表达。另外,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可明显诱导HUVECs中出现坏死样特征,且Necroptosis特异性基因BMF的mRNA表达显著增加,细胞增殖率降低;而聚肌苷酸预处理后,细胞增殖率升高,BMF的基因表达下调。实验结果提示,Visfatin通过LOX-1介导,引起了血管内皮细胞炎症反应及Necroptosis,在动脉粥样硬化的发生与发展中起着重要的作用。     

组织蛋白酶S对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞损伤和内皮间质转化的影响和机制研究

目的：探究组织蛋白酶S(CTSS)对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡、炎症和内皮间质转化（EndMT）的影响和机制。方法：将HUVECs细胞分成4组：对照组、ox-LDL组、ox-LDL+si-CTSS组、oxLDL+si-NC组。ox-LDL组加入100μg/ml ox-LDL孵育24 h,ox-LDL+si-CTSS组和ox-LDL+si-NC组先用转染试剂将CTSS siRNA或对照siRNA转染至细胞中48 h再加入100μg/ml ox-LDL孵育24 h，对照组不进行处理。CCK-8试剂盒检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，ELISA测定实验检测细胞因子IL-1β和TNF-α表达，Western blot检测CTSS、EndMT相关蛋白（内皮细胞标志物CD31、VE-cadherin和间质细胞标志物α-SMA、Vimentin）、磷酸化p38 MAPK(p-p38)、总的p38 MAPK(t-p38)、p-Akt、Akt、pERK1/2和ERK1/2蛋白含量，显微镜观察细胞形态。此外，使用p38 MAPK激活剂茴香霉素（AM）进...     

LOX-1在2型糖尿病大鼠肾小管间质中的表达及其意义

 目的：探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在糖尿病肾病（DN）中的作用及其机制。方法：SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组。以高脂高糖饮食加低剂量注射链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型。动态观察：生化指标和24 h尿白蛋白排泄率（UAER）；苏木素伊红（HE）和过碘酸-雪夫反应（PAS）染色观察肾脏病理，免疫组化检测LOX-1和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达，荧光定量聚合酶链反应检测LOX-1和TGF-β1 mRNA表达，ELISA检测血清单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、细胞间黏附分子（ICAM）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度。结果：随着造模时间的延长，血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量和UAER逐渐升高，高密度脂蛋白（HDL）在成模时升高，但随着病变进展含量减少；LOX-1和TGF-β1在肾小管中蛋白表达增加；与正常组比较，模型各组LOX-1和TGF-β1蛋白和mRNA表达逐渐增加；与正常组比较，模型各组血清MCP-1、ICAM和TNF-α水平均增高；LOX-1 mRNA表达与UAER、TNF-α和TGF-β1 mRNA表达量之间呈正相关（r值分别为0.509、0.649和0.800）（P<0.05）。结论：LOX-1在2型糖尿病肾小管中表达增加，使肾小管损伤，其作用可能通过炎症因子释放和炎症细胞浸润而实现，提示其在DN发生和发展过程中起重要作用。     

糖化白蛋白对人脐静脉内皮细胞MCP-1表达的影响及其机制研究

目的:探讨糖化白蛋白对内皮细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及其机制。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与不同浓度的糖化白蛋白共同培养,并用糖基化产物抑制剂氨基胍(AG)和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预。分别用免疫细胞化学和夹心ELISA方法测定细胞MCP-1的表达,硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定细胞内丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果:糖化白蛋白促进HUVECs合成和分泌MCP-1。免疫细胞化学显示,HUVECs暴露于50mg/L糖化白蛋白后,随作用时间的延长(4 h、8 h、12h),MCP-1的表达增高(P0.01),分别为对照组的1.3、1.9和2.8倍(P0.01);糖化白蛋白能引起细胞内超氧化物歧化酶活性下降(P0.05)和丙二醛含量升高(P0.01)。氨基胍和N-乙酰半胱氨酸能抑制糖化白蛋白刺激内皮细胞表达MCP-1(P0.01),N-乙酰半胱氨酸能抑制糖化白蛋白对内皮细胞内超氧化物歧化酶和丙二醛的影响(P0.05)。结论:糖化白蛋白可刺激人类内皮细胞表达MCP-1,糖化白蛋白刺激MCP-1表达与其诱导细胞内氧化应激有关。     

心脉神口服液对低密度脂蛋白介导的内皮细胞分泌一氧化氮和内皮素-1的影响

目的 探讨中成药心脉神口服液（XMSol)对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL)致血管内皮细胞（VEC）损伤的细胞保护作用。方法 进行人脐静脉内皮细胞（HUVEC）体外培养；用中药血清药理学的方法制备心脉神口服液（XMSol)含药血清；用放射免疫法等技术观察ox-LDL对VEC分泌一氧化氮（NO）及内皮素-1（ET——1）的影响并研究心脉神口服液（XMSol)的保护作用，结果 培养液中加有ox-LDL的VEC分泌的NO显著降低，分泌的ET-1明显升高，于加入ox-LDL之前预先加入XMSol或同时加入XM-Sol时，VEC分泌NO较单用ox-LDL明显升高，ET-1明显较低，结论 心脉神经服液能拮抗ox-LDL致内皮细胞分泌NO下降和ET-1升高。     

氧化低密度脂蛋白内皮受体在氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤中的作用

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致内皮细胞损伤中的作用。方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变;发色底物法检测内皮细胞培养液中的组织纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的活性;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LOX1mRNA表达水平。结果:单纯加入ox-LDL,内皮细胞出现胞体收缩,细胞膜破坏等明显的损伤性改变,培养液中PAI-1活性较对照组高3倍(P<0.05),LOX1mRNA水平表达增高;而当培养液中同时加有LOX1抑制剂polyinosinicacid时,内皮细胞形态损伤不明显,培养液中PAI-1活性低约2.6倍(P<0.05),同时LOX1mRNA水平降低。结论:LOX1介导了ox-LDL对内皮细胞的损伤,可能在血管损伤性疾病的发生中起重要作用。     

不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将其种植于载玻片上,放入流室系统分别施加以不同的剪切力.按施加剪切力的不同分为实验组和对照组:实验组分为低剪切力组(4.2 dyne/cm2,n=5)、中等剪切力组(8.4 dyne/cm2,n=5)和高剪切力组(15.0 dyne/cm2,n=5);对照组(n=5)静态条件下培养,不施加剪切力.剪切力加载1、2、4、8 h后RT-PCR测定各组内皮细胞LOX-1 mRNA的表达.结果 低剪切力(4.2 dyne/cm2)作用下,内皮细胞LOX-1表达随时间延长而增加.与对照组比较,中等剪切力(8.4dyne/cm2)作用2、4、8 h内皮细胞LOX-1的表达水平均降低[2 h:0.2346±0.0397比0.2948±0.0128,4 h:0.1747±0.0585比0.2985±0.0204,8 h:0.0256±0.0067比0.2968±0.0175,均P＜0.05].高剪切力(15.0dyne/cm2)作用下,血管内皮细胞LOX-1表达一直维持在极低水平.结论 不同剪切力可以影响内皮细胞的LOX-1表达水平.     

白细胞介素1,肿瘤坏死因子α和脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达 …

目的 观察细胞因子白细胞介素１（ＩＬ－１）β、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α和脂多糖（ＬＰＳ）是否诱导人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ及蛋白。方法 选取生长汇合的人脐胸脉内皮细胞,在其培养基中分别加入终浓度为２ｎｇ／ｍｌ的ＩＬ－１β、２０ｎｇ／ｍｌ的ＴＮＦβ和１００ｎｇ／ｍｌ的ＬＰＳ,３７℃共育４ｈ后,按照一步法提取其总ＲＮＡ,用γ－＾２２Ｐ标记的寡核苷酸ｄｏｔ ｂｌｏｔ分析     

姜黄素抑制ox-LDL诱导HUVECs凋亡

目的研究姜黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,实验分为:对照组、ox-LDL组、ox-LDL加内质网应激(ERS)抑制剂PBA组、姜黄素组、ox-LDL加姜黄素组和ox-LDL加姜黄素加PI3K抑制剂LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察活化转录因子6(ATF6)转位;Western bolt检测ERS相关蛋白:糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和肌醇激酶-1(IRE-1)以及相关通路蛋白:LOX-1、AKT和p-AKT的表达。结果与对照组相比,ox-LDL可增加细胞凋亡,提高ERS相关蛋白的表达(P0.01),促使ATF6向核内转位,以及提高LOX-1(P0.01)和降低p-AKT的表达(P0.01);与ox-LDL组相比,PBA可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡(P0.01),姜黄素可抑制ox-LDL诱导的ERS相关蛋白和LOX-1的表达(P0.01),ATF6的核转位,内皮细胞的凋亡(P0.01),同时它还可提高ox-LDL引起的p-AKT表达下调(P0.01);LY294002可部分削弱姜黄素抑制ox-LDL诱导ERS相关蛋白表达的作用(P0.05)。结论姜黄素可降低ox-LDL诱导HUVECs的凋亡,其可能机制是通过抑制LOX-1的表达和激活AKT通路减轻细胞ERS来实现的。     

脱氢表雄酮抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨脱氢表雄酮对高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,以及全反式维甲酸(ATRA)在这一过程中的作用。方法:细胞实验:将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+DHEA组、ox-LDL+DHEA+ATRA组和DHEA组。各组细胞均加入相应药物作用24 h,采用RT-PCR和细胞酶联免疫吸附法检测各组细胞ICAM-1 m RNA及蛋白的表达情况。动物实验:将大耳白兔分为正常对照组、高脂组、高脂+DHEA组、高脂+DHEA+ATRA组和DHEA组。各组白兔均用相应饲料喂饲10周后处死动物,采用RT-PCR和免疫组织化学等方法检测各组白兔主动脉ICAM-1的m RNA及蛋白的表达情况。结果:细胞实验:ox-LDL组ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P0.05);与ox-LDL组相比,ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05);ox-LDL+DHEA+ATRA组与ox-LDL+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05)。动物实验:高脂组主动脉ICAM-1的表达明显高于正常对照组(P0.05);与高脂组相比,高脂+DHEA组ICAM-1的表达明显降低(P0.05);DHEA组与正常对照组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05);高脂+DHEA+ATRA组与高脂+DHEA组ICAM-1的表达无显著差异(P0.05)。结论:DHEA能够抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一,而全反式维甲酸对DHEA的这一作用并无明显增强作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体δ对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响及机制

目的: 观察过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激活后对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响及机制。方法: 胶原酶消化法获取和体外培养HUVECs;实验分组:空白对照组、Hcy组、GW0742(PPARδ特异激动剂)组和二亚苯基碘鎓(DPI,NADPH氧化酶特异抑制剂)组,RT-PCR检测MCP-1和PPARδ mRNA表达,Western blotting测PPARδ蛋白水平,2',7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色测定细胞内活性氧(ROS)。结果: 与空白对照组相比,Hcy呈浓度依赖性 促进人血管内皮细胞MCP-1 mRNA的表达,抑制细胞PPARδ mRNA表达,当Hcy浓度为10^-5 mol/L时,MCP-1 mRNA表达显著增加,PPARδ mRNA明显降低(P<0.01);与Hcy组相比,GW0742组细胞MCP-1 mRNA的表达下降(P<0.01);与空白对照组相比,Hcy组细胞内ROS明显增强;GW0742显著抑制Hcy诱导的细胞内ROS水平。结论: PPARδ激活可抑制Hcy诱导人血管内皮细胞MCP-1 mRNA的表达,其机制可能与抑制ROS信号通路有关。     

血管紧张素II对巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:研究AngII对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)蛋白表达和基因转录的影响,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX-1相互之间的关系,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方法:将不同浓度AngII(1×10^-9-1×10^-5mol/L)与经0.1μmol/L佛波酯(PMA)诱导分化后的THP-1细胞共孵育24h,以及将1×10^-6mol/L浓度的AngII与诱导分化后的THP-1细胞作用不同时间0、3、6、12、24、48h后,用细胞酶联免疫法和半定量RT-PCR分别检测LOX-1蛋白和mRNA表达的情况。结果:未经诱导的THP-1细胞不表达LOX-1mRNA;而经PMA诱导后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞,并表达LOX-1mRNA。不同浓度的AngII作用诱导分化后的THP-1细胞24h,细胞LOX-1蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性显著增加。同一浓度的AngII作用THP-1细胞,可呈时间依赖性诱导LOX-1蛋白和mRNA表达,其趋势是3h左右开始增加,24h左右至最高峰,之后逐渐减低。结论:经PMA诱导分化后的THP-1细胞表达LOX-1;AngII能明显增强分化后的THP-1细胞表达LOX-1蛋白和mRNA,并呈浓度和时间依赖性。AngII这种作用可能是促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一。     

氧化HDL对内皮细胞MCP-1、ICAM-1含量和细胞内游离钙浓度的影响

目的:了解氧化高密度脂蛋白(oxHDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达和细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]i)的影响以及损伤作用。方法:采用ELISA检测HUVEC培养上清中MCP-1的蛋白质含量;用间接免疫荧光法检测HUVEC表面的ICAM-1;Fluo-3/AM检测[Ca²⁺]i;扫描电镜观察细胞损伤。结果:内皮细胞中MCP-1和ICAM-1的含量以及[Ca²⁺]i在oxHDL组(100mgprotein/LoxHDL作用24h)均显著高于对照组(无脂蛋白),分别为对照组的2.6、1.6和1.7倍(P＜0.01),而HDL组与对照组无显著差异,较高浓度的oxHDL(300mgprotein/L)还可引起明显的细胞损伤。结论:oxHDL可能与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)一样具有致动脉粥样硬化作用。