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1.
目的 检测人Twist1 基因在A549 与A549/DDP 细胞株中的表达,探讨Twist1 与肺腺癌顺铂耐药的相关性。方法 通过细胞计数,观察不同浓度梯度顺铂干预24 h 后A549 细胞和A549/DDP 细胞的生长情况;用RIPA 裂解液裂解A549、A549/DDP 细胞,充分游离细胞总蛋白,用BCA 法检测总蛋白浓度,ELISA法检测Twist1 转录因子的浓度。结果 定义m 值(m=Twist1 转录因子浓度/ 总蛋白浓度)。浓度为0、10、20、30、40、50 mg/L的顺铂干预下,分别测得A549 与A549/DDP 的m 值为3.01/3.31、2.17/2.82、1.63/2.94、1.73/1.99、-/1.31、-/-,A549/DDP 细胞的m 值显著大于A549 细胞(P<0.05)。结论 Twist 1 基因在人顺铂耐药肺腺癌细胞中表达增高,提示Twist1 可能与肺腺癌顺铂耐药相关。 相似文献
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3.
目的观察在低氧环境下自噬对人肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响。方法常规低氧培养人肺腺癌A549细胞,分为低氧对照组及低氧+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,分别采用透视电子显微镜观察不同时间点细胞自噬体的变化,Western blot检测自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达,分析LC3II/LC3I比值变化。随后每组再给予顺铂(DDP)处理后,采用MTT比色法检测细胞增殖活性。结果低氧状态下,A549细胞自噬体形成增加,LC3II/LC3I蛋白比值表达升高,加入自噬抑制剂3-MA后,自噬体数量、LCII/LCI比值较单纯低氧组均下降。予顺铂处理后,低氧+3-MA组细胞增殖活性较低氧组下降。结论在低氧环境中,A549细胞保护性自噬增强,抑制自噬可增强A549细胞对顺铂化疗的敏感性。 相似文献
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《中国药理学通报》2015,(6)
目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。 相似文献
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目的 本研究通过去甲斑蝥素(NCTD)作用于肺癌顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,探讨其对DDP耐药的逆转作用及其相关机制。方法 应用CCK-8法检测NCTD对A549和A549/DDP细胞活力的影响、DDP对A549细胞和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)、NCTD联合不同浓度DDP对A549/DDP细胞DDP耐药性的影响;细胞克隆形成实验检测NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞克隆形成率的影响;Western blotting法检测A549/DDP和A549细胞中c-met表达,以及NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果 NCTD剂量相关性地抑制A549和A549/DDP细胞的活力,选择抑制率小于10%的最大NCTD浓度即10 μmol/L作为逆转浓度;DDP作用于A549/DDP和A549细胞的IC50分别为15.11和5.04 μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);A549/DDP细胞中c-met表达明显高于A549细胞;用NCTD(10 μmol/L)处理后,DDP对A549/DDP细胞的IC50从15.11 μmol/L减少到8.06 μmol/L,差异显著(P<0.01);与DDP单给药组比较,NCTD联合DDP作用明显降低A549/DDP细胞克隆形成率(P<0.01);Westernblotting结果显示,NCTD联合DDP作用明显抑制顺铂耐药细胞A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达,单用DDP或NCTD与对照组比较差异不明显。结论 NCTD与DDP联用可逆转A549/DDP细胞对DDP耐药,其机制可能与抑制c-met蛋白表达有关。 相似文献
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目的 探讨野黄芩苷对肺癌A549/顺铂(cisplatin,DDP)细胞DDP耐药的逆转作用及机制。方法MTT法检测肺癌DDP耐药细胞A549/DDP的耐药倍数、野黄芩苷对其细胞毒性及逆转倍数;平板克隆形成试验检测野黄芩苷对A549/DDP细胞克隆形成的影响;Western blotting检测野黄芩苷对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果MTT法检测结果显示,肺癌DDP耐药细胞A549/DDP的耐药性是其亲本细胞A549的5.77倍,差异有统计学意义(P<0.01)。同时,与A549细胞相比,DDP耐药细胞A549/DDP中c-met的蛋白表达显著增高(P<0.01)。野黄芩苷浓度分别为20,40,80和160 μmol·L-1时,对A549/DDP细胞的抑制率分别为2.38%,4.01%,7.43%和26.43%,而且随着野黄芩苷药物浓度的增加,克隆形成数目显著减少。选择抑制率<10%的最大野黄芩苷浓度即80 μmol·L-1作为逆转浓度;野黄芩苷联合DDP作用可显著降低A549/DDP细胞的耐药性;Western blotting结果显示,野黄芩苷联合DDP作用能显著抑制A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达。结论 野黄芩苷与DDP联用可提高肺癌A549/DDP细胞对DDP的敏感性,抑制克隆形成,其机制可能与下调c-met蛋白表达有关。 相似文献
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目的 探讨具有"扶正解毒祛瘀"作用的中药复方消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gP)及其mRNA表达水平的影响。方法 选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,给予消岩汤含药血清,采用Western Blotting 免疫印迹法及RT-PCR技术检测MDR的表达产物P-gP的含量及其mRNA表达水平。结果 与对照组比较,随着消岩汤含药血清药物浓度的增加,P-gP蛋白表达逐渐减弱(P<0.05);与对照组比较,经不同浓度消岩汤含药血清作用后,A549/DDP细胞中的MDR1基因的mRNA水平均有所下降(P<0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制作用越明显。结论 消岩汤逆转肺癌耐药的可能机制为通过抑制细胞膜上P-gP及其基因的表达而阻止细胞对顺铂的输出,从而聚集细胞内的药物浓度达到有效逆转肺癌耐药的效果。 相似文献
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目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分别采用免疫荧光和免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达水平。将细胞分为对照组、ABT737组、3-Ma组和联合用药组,分别以细胞培养基、ABT737(5.0μmol/L)、3-Ma(1.0 mmol/L)和ABT737联合3-Ma作用于SKOV3/DDP细胞,Western blot法检测12和24 h后凋亡相关蛋白active Caspase-3和cyto C的表达水平。结果与对照组比较,12和24 h各剂量ABT737组细胞凋亡率均明显增高,差异有统计学意义(P0.01)。间接免疫荧光法检测LC3和Beclin-1蛋白表达,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,两蛋白阳性表达亮度均越来越强,提示蛋白表达增强。Western blot检测LC3和Beclin-1蛋白表达水平,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,细胞中LC3(F=10.878,F=13.256,P0.05)和Beclin-1(F=6.589,F=7.365,P0.05)蛋白表达水平均逐渐升高。3-Ma抑制自噬后,与ABT737组相比,联合用药组active Caspase-3 12和24 h表达水平明显增强,12和24 h cyto C表达水平也明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 ABT737诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡的同时伴随着自噬的发生,抑制自噬能够促进凋亡。 相似文献
9.
《中国药理学通报》2019,(12)
目的考察隐丹参酮(cryptotanshinone,CTS)对肺癌细胞及其顺铂耐药肺癌细胞存活率及铁死亡相关基因表达水平的影响,并探讨其相关机制。方法体外培养人肺癌A549细胞和顺铂耐药A549/DDP细胞,给予不同浓度CTS处理。CCK-8法检测细胞存活率;qPCR检测与铁代谢相关的TFR1、DMT1、IREB2、HSPB1、VDAC2、VDAC3、GPX4的mRNA表达水平;Western blot检测TFR1蛋白表达水平。结果不同浓度的CTS可抑制A549细胞和A549/DDP细胞的增殖,且顺铂耐药A549/DDP细胞对CTS的作用更敏感。CTS作用于A549细胞和A549/DDP细胞后,对铁死亡相关基因的mRNA表达水平呈现不同程度的影响,A549细胞HSPB1和GPX4的mRNA表达水平增高,IREB2、VDAC2和VDAC3的mRNA表达水平降低, TFR1和DMT1的mRNA表达水平变化不明显;A549/DDP细胞TFR1和IREB2的mRNA表达水平增高,VDAC3的mRNA表达水平降低,DMT1、HSPB1、VDAC2和GPX4的mRNA表达水平变化不明显。结论隐丹参酮能不同程度的抑制肺癌A549细胞和A549/DDP细胞的增殖,及影响细胞铁死亡相关基因的表达。 相似文献
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目的:探讨ERCC1、Bcl-2表达与顺铂作用的关系,进而推测ERCC1、Bcl-2在顺铂耐药中的作用.方法:选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP作为研究对象,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数;免疫细胞化学方法、RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时间干预后细胞中ERCC1、Bcl-2的表达.结果:10μg/mL DDP作用12 h,A549细胞中ER-CC1、Bcl-2 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1、Bcl-2 mRNA的表达逐渐增高,在72 h表达最强.浓度为5μg/mL的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达水平上升,随着DDP浓度的增加,其表达水平逐渐上升,ERCC1民mRNA表达水平在20μg/mL组达到高峰.与亲本细胞相比,A549/DDP中ERCC1、Bcl-2表达明显增高.结论:随着顺铂作用时间的延长和浓度的增加,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1、Bcl-2可能参与了顺铂继发耐药的形成. 相似文献
11.
《毒理学杂志》2020,(4)
目的研究阿司匹林通过调控长链非编码RNA(lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞A549(A549/DDP)的顺铂敏感性的影响。方法阿司匹林以不同浓度(1、3、6和9 mmol/L)作用于A549/DDP细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;用流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blot)检测阿司匹林处理A549/DDP细胞的凋亡率和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测多种肺癌细胞中CCAT1的表达差异,并分析阿司匹林作用A549/DDP细胞后CCAT1的表达情况;运用双酶切法构建pcDNA3.1-CCAT1表达载体;流式细胞仪和Western blot分别检测阿司匹林作用于CCAT1过表达的A549/DDP细胞后,细胞的凋亡率和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果阿司匹林可明显抑制A549/DDP细胞增殖(P0.05),具有剂量依耐性;且可通过调节Bax等相关蛋白表达增强A549/DDP细胞凋亡效应(P0.05);A459/DDP细胞中CCAT1较非耐药细胞株明显高表达(P0.05);阿司匹林作用后,CCAT1表达明显下调(P0.05);成功构建了pcDNA3.1-CCAT1表达载体并成功转染;证实CCAT1过表达逆转阿司匹林对A549/DDP细胞敏感性的影响。结论阿司匹林通过下调lncRNA CCAT1的表达,提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。 相似文献
12.
肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。 相似文献
13.
异钩藤碱逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂耐药性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究异钩藤碱(IR)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性.方法 采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度.结果 IR无细胞毒浓度组(3.0μg·mL-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg·L-1降至3.36 mg·L-1;低细胞毒浓度(8.0μg·mL-1)组的IC50降至2.34 mg·L-1;2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度.结论 研究表明IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,并可增加肿瘤细胞内DDP药物浓度. 相似文献
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目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。方法 将A549细胞(腺癌人类肺泡基底上皮细胞)一定条件培养后分成对照组、支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组。支气管肺发育不良组、雷帕霉素干预组高氧环境培养,置于37℃、85%氧气孵化箱中培养48 h,前者不加药剂、后者加10μmol/L的雷帕霉素干预;对照组常规环境培养,置于37℃、5%二氧化碳孵化箱中培养48 h,不加药剂。利用高氧构建支气管肺发育不良的细胞模型,利用蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证自噬对高氧处理后A549细胞肺泡表面标志物合成蛋白复合物(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)的影响,利用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测自噬对高氧处理后A549细胞增殖的影响,利用蛋白质印迹实验验证PI3K/Akt/mTOR自噬通路在支气管肺发育不良中的作用。结果 蛋白质印迹实验和RT-qPCR实验表明自噬激活剂雷帕霉素挽救了高氧处理后A549细胞SPC、AQP5表达的下调。EdU实验表明雷帕霉素显著促进了高氧处... 相似文献
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目的探讨瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡率及耐药基因表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物、顺铂分别及联合处理人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP,用MTT法检测肺癌细胞凋亡率、实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance protein1,MRP1)基因mRNA水平以及用Westernblot检测多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein1,MRP1)的表达水平。结果不同浓度瑞香狼毒水提取物作用相同时间或相同浓度作用不同时间对A549和A549/DDP的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒处理前后A549/DDP细胞株与A549细胞株相比,对顺铂的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);同时两细胞株与瑞香狼毒和顺铂联合孵育后MRP1mRNA水平及MRP1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒水提取物有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对肺癌耐药具有一定的逆转作用。 相似文献
16.
目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂(DDP)人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。 相似文献
17.
《中国药理学通报》2019,(12)
目的基于PI3K/AKT信号通路观察黄芪多糖(Astragaluspolysaccharide, APS)对人肺癌A549细胞自噬的影响。方法黄嘌呤氧化酶(XOD)建立自噬模型,分别以APS(100、200、400) mg·L~(-1)浓度及3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)进行干预;CCK-8法、透射电镜及Western blot分别检测APS对人肺癌A549细胞自噬模型增殖、自噬体及自噬标记分子的影响。结果与空白组比较,模型组细胞生长加快,自噬小体数量增多,模型组LC3B及PI3K蛋白表达增高,p62及AKT降低(P<0.05);与模型组比较,APS(200、400) mg·L~(-1)浓度组细胞生长减慢,自噬小体数量减少,LC3B及PI3K蛋白表达下降,p62及AKT显著性增高(P<0.05);与3-MA组比较,APS(200 mg·L~(-1))浓度组LC3B蛋白表达下降(P <0. 05),APS(400 mg·L~(-1))浓度组PI3K显著性下降(P <0. 05)。结论 APS可能通过下调PI3K/AKT信号通路的自噬而发挥抗肿瘤作用。 相似文献
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目的:研究腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活与卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法:以不同浓度的顺铂(0,3.125,6.25,12.5,25,50 μmol·L-1)分别作用人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP 24 h,MTT法检测顺铂的抑制率;透射电镜检测SKOV3和SKOV3/DDP中的自噬体;流式细胞术检测顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP的凋亡率;Western blot法测定基础状态下及顺铂单独或联合AMPK抑制剂compound C作用时,SKOV3和SKOV3/DDP中p-AMPK、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)和凋亡蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达差异;并测定compound C联合顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP时的细胞活性。结果:与SKOV3比较,SKOV3/DDP对顺铂耐药(RI=6.8);SKOV3/DDP中自噬体明显增多(P<0.01);顺铂对SKOV3/DDP早期凋亡率(7.0±0.55)%远低于SKOV3早期凋亡率(30.5±0.34)%(P<0.01);SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达量均增加,顺铂作用时Cleaved-PARP表达不明显;compound C与顺铂同时作用时,SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达减少,Cleaved-PARP表达水平显著升高,且SKOV3/DDP对顺铂敏感性增加。结论:SKOV3/DDP中p-AMPK的激活诱导卵巢癌细胞自噬可能导致其对顺铂耐药,compound C抑制p-AMPK的激活,与顺铂同时作用促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡,且增加其对顺铂的敏感性。 相似文献
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目的探讨非离子表面活性剂聚氧乙烯醚﹑聚乙二醇300﹑曲拉通X100对肺癌耐药细胞A549/DDP(耐顺铂)多药耐药性的逆转及其机制。方法用四氮唑盐(MTT)法进行体外耐药逆转实验,Westernblot检测P-gp(P-糖蛋白)蛋白的表达。结果①合用非离子型表活剂前后,A549/DDP对化疗药物阿霉素、顺铂、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊甙和长春新碱的敏感性显著增加(各组都为P<0.01);②三种非离子型表面活性剂能抑制P-gp蛋白的表达。结论三种非离子表面活性剂具有逆转A549/DDP耐药性的作用,逆转机制与其抑制P-gp蛋白的表达有关。 相似文献