外周血ctDNA在结直肠癌中的临床筛查研究

目的 探究外周血循环肿瘤DNA(ctDNA)在结直肠癌中的临床筛查研究价值。方法 对行根治性手术的97例结直肠癌患者的临床及随访资料进行分析。收集所有患者的一般资料及术前1 d、术后1个月的外周血癌胚抗原(CEA)水平及外周血ctDNA基因检测结果，收集患者手术中肿瘤组织标本免疫组化结果及基因的检测结果并进行比较；分析外周血ctNDA与CEA对于检查结直肠癌的诊断效能。结果 肿瘤组织S-P免疫组化检测MLH1/MSH2/MSH6/PMS2蛋白结果与肿瘤组织基因测序同样的基因位点结果一致，两者检测的灵敏度、特异度及准确率均为100%;外周血ctDNA基因检测的结果与肿瘤组织基因检测结果相同，灵敏度为88.5%,特异度为100%,准确率为89.7%;术前，结肠癌患者每2 mL外周血ctDNA含量为(17.95±8.40)ng,直肠癌患者每2 mL外周血ctDNA含量为(11.73±5.39)ng, Wilcoxon秩和检验结果显示，差异有统计学意义(P<0.05);术前外周血ctDNA诊断结直肠癌患者的灵敏度为76.3%、准确率为76.3%;前CEA检测灵敏度与准确率均显著低于术前外...     

循环肿瘤DNA在结直肠癌中的应用

结直肠癌是我国常见的癌症类型之一,也是世界第二大死因。随着诊断技术的发展和包括手术和化疗在内的治疗方法的进步,其预后得到了极大的改善,但是仍有一定比例的患者在接受根治性治疗后出现复发。循环肿瘤DNA(ctDNA)是来自肿瘤细胞的循环游离DNA(cfDNA)片段,是一种新型的生物标志物,可以用于监测结直肠癌患者的放化疗效果和术后复发情况。与传统的生物标志物相比,ctDNA具有更高的特异度和灵敏度,并且可以在患者的血清中稳定存在。通过检测ctDNA的水平可以对患者的病情进行更加准确的评估,并根据检测结果制定更加个性化的治疗方案。在结直肠癌的诊疗过程中,ctDNA具有较高的特异度和灵敏度,通过检测患者的血清ctDNA水平,可以较早期判断患者是否可能患有结直肠癌。同时,通过比较患者治疗前后的血清ctDNA水平变化,可以评估患者的治疗效果。在结直肠癌的随访中,ctDNA同样具有很高的特异度和灵敏度,通过检测患者的血清ctDNA水平,可以有效地判断患者的复发情况。若患者血清ctDNA水平持续升高,则表明患者可能出现了复发,需要及时进行进一步的检查和干预。总之,ctDNA是一种新型的生物标志物,具有...     

结直肠癌患者血浆循环游离DNA的RAS突变与临床特征的关系

目的 探讨结直肠癌患者血浆循环游离DNA(cfDNA)与肿瘤组织DNA的RAS基因突变检测的一致性,以及与临床特征的关系.方法 收集71例结直肠癌患者的血浆及肿瘤组织标本.采用多重荧光PCR法检测血浆标本cfDNA的RAS的基因突变状态,并与肿瘤组织标本的相应基因突变状态对比分析.分析血浆RAS基因突变状态与患者临床特征的关系.结果 血浆cfDNA的RAS突变率为32.39%,组织DNA的RAS突变率为50.70%,两种标本的RAS突变检测的一致率为76.06%,血浆cfDNA与组织DNA的RAS突变检测结果一致(Kappa=0.523,P=0.000).血浆cfDNA检测的敏感性为58.33%、特异性为94.29%、阳性预测值为91.30%、阴性预测值为68.75%.血浆cfDNA的RAS突变状态与结直肠癌患者年龄、性别、分期(Ⅳa与Ⅳb)、原发肿瘤部位、肺转移、CEA水平、CA199水平等无明显相关性,而血浆cfDNA的RAS突变与结直肠癌患者肝脏转移有相关性(P=0.045),肝转移患者较未发生肝转移的患者突变率升高.结论 血浆cfDNA可以作为无法获得组织标本的结直肠癌患者的RAS基因检测的替代标本,具有临床应用价值,且结直肠癌患者肝脏转移cfDNA RAS突变率升高.     

循环肿瘤DNA在结直肠癌中的临床应用及研究进展

作为液体活检的一部分,ct DNA检测因其实时动态、无创、可重复性等优势,已经被广泛研究。随着生活方式的改变,结直肠癌越来越高发,而ctDNA在协助结直肠癌早期诊断,疗效监测,复发预防等方面发挥重要作用,这在实现结直肠癌的精准化治疗方面有巨大发展潜力。     

NSCLC患者ctDNA与病理组织中EGFR、PIK3CA基因突变检测结果一致性及影响因素

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中循环肿瘤DNA(ctDNA)与病理组织中上皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因突变检测结果的一致性,并分析其影响因素。方法 纳入2019年12月—2020年12月我院收治的118例NSCLC患者作为研究对象。检测患者外周血ctDNA及病理组织中EGFR、PIK3CA及c-Met、TP53、FGFR1、BRAF、STK11、FANCA、KRAS、ERBB2基因状态,比较ctDNA与组织中EGFR、PIK3CA检测结果的一致性,并将患者分为一致组和非一致组;比较两组患者的临床资料,多因素Logistic回归分析影响检测结果一致性的因素;Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析ctDNA检测EGFR、PIK3CA突变患者1年生存情况。结果 ctDNA检测结果显示,84例(71.19%)患者检出至少1个EGFR突变位点,19del、L858R、T790M突变检出率分别为37.29%、23.73%、33.05%,33例(27.97%)检出至少1个PIK3CA突变位点,p.E545K、p.H1047R、p.E...     

数字PCR技术检测肺腺癌循环肿瘤DNA中EGFR突变的临床意义

目的 探讨数字聚合酶链反应(droplet digital polymerase chain reaction, ddPCR)技术检测肺腺癌循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)突变的临床意义。方法 采用ddPCR技术检测肺腺癌患者102例的ctDNA中EGFR突变即EGFR-L858R突变和EGFR-19del突变。分析ctDNA与患者临床参数的关系。绘制ROS曲线,评估ctDNA对患者预后和是否发生转移的预测作用。结果 ddPCR技术检测ctDNA中EGFR突变评价EGFR突变状态的曲线下面积(area under the curve, AUC)为0.694,敏感度为40.2%,特异度为88.6%。与早期肺腺癌相比,晚期肺腺癌患者ctDNA中EGFR突变检测的AUC(0.837 vs. 0.498)和敏感度(75.2%vs. 10.2%)更高。肿瘤发生转移与ctDNA中EGFR突变丰度呈强的正相关性(r=0.510,P<0.001)。ctDNA阳...     

循环游离DNA在胰腺癌中的临床应用进展

 循环游离DNA (circulating free DNA,cfDNA)是指游离于细胞外的核酸片段。肿瘤患者中相当一部分比例的cfDNA来源于肿瘤细胞,称之为循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA),其中包含了来源于肿瘤的突变和基因变异信息。而新的、更加高效的检测技术的开发使得ctDNA发展成为新的标志物。本文就ctDNA在肿瘤早期诊断、预后、疗效评估及跟踪新的突变中的应用作一综述,重点概述其在胰腺癌中的临床应用。     

循环肿瘤DNA在消化系统肿瘤中的应用

循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)属于血浆游离DNA(circulating free DNA,cfDNA)的一种,是通过凋亡或坏死的肿瘤细胞释放到血液中,或由肿瘤直接分泌。ctDNA携带肿瘤特异性基因特征和表观遗传学特征,包括基因突变、染色体重排、拷贝数变异和甲基化改变。ctDNA属于液体活检技术,具有操作方便、重复性高、创伤性小等优势。ctDNA可应用于消化系统肿瘤早期癌症的筛查和诊断、指导治疗、监测治疗效果、分析术后残余病灶及预防疾病复发。本文对ctDNA的生物学特性、检测方法、在消化系统肿瘤中的应用进行了探讨。     

微血管密度在评价Avastin治疗晚期结直肠癌患者疗效中的意义

目的:评价微血管密度在Avastin治疗晚期结直肠癌患者中的疗效预测价值.方法:选择30例接受Avastin+irinotecan方案治疗的晚期结直肠癌患者的组织标本,采用免疫组织化学法(IHC)检测CD34和CD105在结直肠癌肿瘤组织中的表达情况,根据微血管计数方法计算微血管密度(MVD)值.结果:根据CD34和CD100计算的MVD值分别为47.2±8.5和21.6±3.2,两组间差异有统计学意义(P<0.05).CD105标记的MVD与Avastin治疗疗效之间存在正相关关系,高MVD的患者Avmtin治疗的疗效较好.结论:CD105是反映肿瘤新生血管的较好指标,优于CD34.CD105标记的MVD值可以用于预测晚期结直肠癌患者Avastin治疗的反应性.     

循环肿瘤DNA对晚期乳腺癌疗效判断的价值

目的：分析循环肿瘤DNA（ctDNA）对晚期乳腺癌疗效判断的价值。方法：晚期乳腺癌患者60例,在每次化疗前、化疗后第1天及化疗结束后检测ctDNA、血清CEA和CA153水平,化疗2个疗程后行影像学检查评价疗效。结果：所有患者化疗后第1天ctDNA明显上升,21例PD患者在化疗2个疗程后血ctDNA较治疗前升高,差异有统计学意义（P<0.05）,其中19例在化疗1个疗程后血ctDNA持续性升高,较影像学提前4周提示病情进展,而血清CEA、CA152水平与治疗前比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。22例SD患者治疗后血清CEA、CA153及ctDNA水平与治疗前相似,差异均无统计学差异（P>0.05）。17例PR患者治疗后血ctDNA较治疗前明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,而血清CEA、CA153治疗后轻微下降,与治疗前比较,差异无统计学意义（P>0.05）。ctDNA总变异数>５患者平均PFS为19.8周,中位PFS为16.8周,总变异数≤5患者平均PFS为72.4周,中位PFS为76.5周,两者差异性比较有统计学意义（P<0.05）。结论：动态检测循环肿瘤DNA可能有助于更早地判断疗效和预后,提前指导治疗方案的调整。     

外周血ctDNA基因突变对早中期非小细胞肺癌患者的诊断效能分析

目的 分析外周血循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA, ctDNA)基因突变对非小细胞肺癌患者的诊断效能。方法 纳入2016年12月至2017年12月在河北大学附属医院初诊初治且行单孔胸腔镜手术治疗的50例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者为研究对象。收集所有研究对象外周血后分离血浆,并提取ctDNA。 Illumina HiSeq 3000平台进行目标区域的高通量测序,并以基因突变频率作为ctDNA的检测分析指标。结果 50例患者ctDNA检测非小细胞肺癌的敏感性明显高于血清中癌胚抗原检测的敏感性(P<0.05);ctDNA基因突变频率在不同年龄、性别、病理类型、吸烟史等患者间差异无统计学意义(P>0.05),而在不同肿瘤大小及临床分期患者中差异有统计学意义(P<0.05)。结论 外周血ctDNA基因突变可敏感诊断早中期NSCLC,且与早中期NSCLC肿瘤大小及临床分期有相关性。     

循环肿瘤DNA检测对胃癌患者疾病进展和肿瘤复发的预测价值

目的 探讨循环肿瘤DNA(ctDNA)检测对胃癌患者疾病进展和肿瘤复发的预测价值。方法 收集154例胃癌患者术前、术后7 d及术后每3个月至2年的血液样本。采用二代测序(NGS)(Panel检测)或微滴数字聚合酶链式反应(ddPCR)分析血浆样本中ctDNA突变情况。结果 Panel检测结果显示,ctDNA突变总检出率为73.4%(113/154),共发现207个基因突变,以TP53(68.1%,77/113)基因突变最为常见,其次为KRAS(27.4%,31/113)、APC(17.7%,20/113)、PIK3CA(14.16%,16/113)、GNAS(9.73%,11/113)。随后对63例患者术后样本进行ddPCR分析,在4例术后肿瘤复发患者中,ctDNA突变检测术前均为阳性,术后7 d阳性3例,ctDNA突变阳性患者复发率为75.0%。根据术后7 d时ctDNA突变水平,ctDNA突变阳性患者无复发生存期显著短于ctDNA突变阴性患者(HR:14.91;95%CI:0.72～313.45;P<0.001)。结论 通过液体活检检测ctDNA突变有助于识别术后复发高风险患...     

Id-1和MMP-9在结直肠癌中的表达及与临床病理因素的关系

目的:通过研究DNA结合分化抑制蛋白1(inhibitors of DNA binding-1,Id-1)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在结直肠腺癌中,分析Id-1和MMP-9与结直肠腺癌进展的关系?方法:采用免疫组织化学法?RT-PCR和Western blot检测Id-1和MMP-9在50例结直肠癌患者癌组织及50例正常组织中的表达情况,分析二者与各临床病理因素的相关性?结果:Id-1和MMP-9在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为72.00%(36/50)和78.00%(39/50),而在正常结直肠组织中的阳性率为24.00%(12/50)和22.00%(11/50),差异均有统计学意义(P < 0.01)?Id-1和MMP-9在癌组织中的表达呈正相关(r=0.422,P=0.002)?Id-1和MMP-9的表达与结直肠腺癌的浸润深度?TNM分期?肝转移?淋巴结转移和脉管浸润具有相关性(P 均 < 0.05),而与患者的性别?年龄?肿瘤大小和分化程度无关(P均 > 0.05)?RT-PCR和Western blot检测结果与免疫组织化学检测结果基本一致?生存分析显示Id-1和MMP-9表达与结直肠癌患者预后关系密切,Id-1和MMP-9高表达提示预后不良?结论:Id-1和MMP-9在结直肠癌中高表达,其表达水平与结直肠腺癌的浸润?转移具有高度相关性,二者联合检测对判断结直肠癌的侵袭?转移及预后具有重要指导意义?     

血浆循环肿瘤DNA与宫颈癌临床病理、疗效及预后的关系

目的:探讨血浆循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)与宫颈癌临床病理、疗效及预后之间的关系。方法:188例宫颈癌患者设为宫颈癌组,200例健康女性为健康对照组。收集宫颈癌组治疗前后和健康对照组空腹静脉血5mL,检测血浆ctDNA含量;对比分析两组血浆ctDNA含量差异,并分析其与患者临床病理、疗效及预后之间的关系。结果:宫颈癌组和健康对照组ctDNA含量分别为(15.76±3.18)ng/mL和(7.82±1.63)ng/mL,两组ctDNA含量比较差异显著,有统计学意义(t=31.218,P=0.001)。ctDNA含量在组织学分级、浸润间质深度、淋巴转移及FIGO分期上差异显著,有统计学意义(P<0.05),以高分化、浸润间质深度≥1/2、存在淋巴转移及FIGO III期者为ctDNA高表达者居多,反之则为低表达者;但在年龄、肿瘤大小和是否累积子宫下段上差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后宫颈癌ctDNA含量分别为(15.76±3.18)ng/mL和(10.37±2.69)ng/mL,两者ctDNA含量比较差异显著,有统计学意义(t=17.743,P=0.001)。随访3年,与高表达者比较,低表达者DFS生存率和OS生存率明显增高(44.12%vs.62.79%;47.06%vs.67.44%),差异有统计学意义(χ~2=6.526,P=0.011;χ~2=7.883,P=0.005)。经多因素COX回归分析得知,有淋巴转移、FIGO III期和ctDNA高表达是影响宫颈癌预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌患者中血浆ctDNA含量较高,在不同组织学分级、浸润间质深度、淋巴转移及FIGO分期等临床病理特征上差异明显,与治疗及预后相关,有望成为宫颈癌临床诊疗及预后检测的有效指标。     

结直肠癌患者血清游离DNA的表达及意义

目的:建立基于ALU序列的实时荧光定量PCR(ALU-q PCR)检测游离DNA浓度的方法,并探讨结直肠癌患者血清游离DNA定量检测的临床意义。方法:随机采集结直肠癌104例、结直肠息肉63例和正常人110例血清标本,采用ALU-q PCR方法定量检测血清ALU115表达水平;用化学发光方法检测肿瘤标志物CEA的水平。结果:(1)结直肠癌患者血清ALU115浓度中位数为1046.0 ng/m L,显著高于结直肠息肉组423.3 ng/m L和对照组385.4 ng/m L,差异有统计学意义(P均<0.001),结直肠息肉组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)结直肠癌血清ALU115和CEA联合检测灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别是82.69%、99.09%、91.12%、98.85%和85.82%,两者联合检测提高结直肠癌诊断率。结论:基于ALU序列的实时荧光定量PCR是一种快速简便、灵敏度高及特异性好的检测方法。血清cf-DNA浓度对结直肠癌辅助诊断有一定的价值。     

结直肠癌DNA依赖蛋白激酶催化亚单位、P16表达的临床病理意义

目的 研究结直肠癌DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)及P16表达的临床病理学特征并探讨与患者预后的关系.方法 采用免疫组化PV6000二步法检测359例结直肠癌及35例癌旁正常组织DNA-PKcs及P16表达的状况并分析其与临床病理指标及预后的关系;提取16例新鲜结直肠癌手术标本的总蛋白并进行定量,通过Western印迹杂交法检测结直肠癌组织与癌旁正常组织中DNA-PKcs蛋白表达.结果 免疫组化及Western印迹杂交法结果均显示,DNA-PKcs在结直肠癌组织中的表达显著高于在癌旁正常组织中的表达(均P<0.05);结直肠癌DNA-PKcs的阳性率为63.5%(228/359).P16在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);P16的阳性率为53.2%(191/359).P16及DNA-PKcs的阳性表达均与患者的TNM分期、淋巴结转移情况以及腹腔和远处转移情况相关(均P<0.05).DNA-PKcs还与肿瘤的肠壁浸润深度及组织学分级呈正相关(均P<0.05).DNA-PKcs及P16阳性组患者的5年生存率均显著低于阴性组患者(均P<0.05).DNA-PKcs与P16在结直肠癌的表达呈正相关(r=0.149,P=0.036).结论 DNA-PKcs及P16在结直肠癌的发生和演化中可能发挥重要作用,并成为结直肠癌临床评价肿瘤生物学行为及判断预后的有用指标.     

外周血ctDNA中PCDH8和PCDH17基因甲基化在高级别浆液性卵巢癌筛查和预后中的临床价值

目的:探讨外周血循环肿瘤DNA(ctDNA)中原钙黏蛋白(PCDH)8和PCDH17基因甲基化在高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)筛查和预后中的临床价值。方法:选取2016年7月至2018年7月在自贡市第一人民医院诊治并接受手术治疗的85例HGSOC患者(HGSOC组)和35例非恶性诊断患者(对照组)作为研究对象,收集手术组织标本和诊断时的血液样本。采用甲基化荧光(MethyLight)定量分析组织和ctDNA中PCDH8、PCDH17基因甲基化水平,以甲基化百分比参数(PMR)表示。随访截至2021年7月,记录复发时间。结果:HGSOC组肿瘤组织和ctDNA中PCDH8、PCDH17基因PMR值高于对照组(P<0.05),且HGSOC组肿瘤组织与ctDNA中PCDH8基因PMR值、PCDH17基因PMR值均呈正相关(r_s分别为0.465、0.432,均P<0.001)。ctDNA中PCDH8和PCDH17基因PMR值联合用于筛查HGSOC的曲线下面积(AUC)为0.857(95%CI 0.785～0.929),灵敏度和特异度分别为83.5%、80.0%...     

结肠直肠癌细胞DNA及CD44含量与肿瘤形成和转移的关系

目的 :探讨结肠直肠癌细胞DNA含量及CD4 4的定量检测与癌形成和转移的关系。方法 :采用流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)对手术切除的结肠直肠癌组织及癌旁周围正常组织细胞进行DNA含量及倍体测定、CD4 4定量检测。结果 :DNA含量在结直肠癌组明显增高 ,二倍体细胞明显减少 ,而异倍体明显增多 ,在结直肠癌组异倍体率为 6 6 6 % ;同时CD4 4在结直肠癌组明显高于癌旁周围正常组织组 (P <0 0 1) ,CD4 4在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中有极显著差异 (P <0 0 1)。结论 :癌细胞DNA含量及异倍体率增加 ,CD4 4的表达与结肠直肠癌形成、转移有关。     

NDRG4基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用研究

目的探讨NDRG4甲基化检测在结直肠癌诊断中的价值。方法从84例结直肠癌手术切除癌组织、癌旁组织及其术前粪便、尿、血中提取DNA,应用巢式甲基化特异性PCR（nested methylation specific PCR,nMSP）检测结直肠癌粪便、尿、血中NDRG4基因甲基化水平。比较结直肠癌组织和粪便、尿、血中NDRG4甲基化检测在结直肠癌诊断中的敏感性和特异性。结果在84例结直肠癌中,癌组织NDRG4检出率为81.0%,癌旁组织检出率为8.3%,敏感性为81.0%,特异性为91.7%;结直肠癌中粪便NDRG4基因甲基化的敏感性和特异性在3个微量DNA中最高,尿次之。结论结直肠癌组织NDRG4基因甲基化异常发生率高;粪便和尿中NDRG4甲基化异常可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物。     

结直肠癌ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化检测的临床价值初探

目的:观测ZIC1和KLOTHO基因在结直肠癌组织中的表达情况,探讨检测ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化在结直肠癌临床诊断中的价值.方法:选取25对(包括癌和癌旁组织)结直肠癌患者手术标本组织,通过实时荧光定量RT-PCR检测ZIC1和KLOTHO mRNA在结直肠癌和癌旁相对正常组织中的表达;通过甲基化特异性PCR(MSP)检测结直肠癌和癌旁相对正常组织中ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化阳性率,并分析其与结直肠癌患者临床病理资料(年龄,性别,分化程度和TNM分期)的关系.结杲:ZIC1和KLOTHO mRNA在结直肠癌组织中表达较正常组织明显下调(P均<0.0001);在25例结直肠癌患者癌组织中,ZIC1甲基化阳性率为80%,KLOTHO甲基化阳性率为76%,联合检测ZIC1和KLOTHO甲基化阳性率为64%.结论:ZIC1和KLOTHO基因在结直肠癌中表达下调,肿瘤组织基因启动子甲基化高频率发生,联合检测ZIC1和KLOTHO基因甲基化有助于结直肠癌的诊断.