增生性瘢痕中磷酸化丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达的变化

目的　探讨磷酸化细胞外信号调节激酶 1/ 2 (p ERK1/ 2 )、磷酸化应激活化蛋白激酶 (p SAPK)和磷酸化P38MAPK(p P38MAPK)在增生性瘢痕发生和成熟过程中蛋白表达的特征。方法　用免疫组化方法和常规病理技术检测 p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK在 16例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织中的表达和分布规律。结果　在正常皮肤中 ,p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞内 ,三种蛋白的阳性细胞率均较低。随着增生性瘢痕不断成熟 ,p ERK1/ 2和 p SAPK表达逐渐增强。在成熟的增生性瘢痕中 ,这两种蛋白主要存在于表皮基底层细胞和部分成纤维细胞中 ,阳性细胞率分别为正常皮肤的 1 8和 1 7倍 ,蛋白表达明显升高 (P <0 0 5 )。p P38MAPK的阳性细胞率在生长活跃的增生性瘢痕中升至最高 ,在成熟的瘢痕中虽有所下降 ,但仍明显高于正常皮肤(P <0 0 5 ) ,含有 p P38MAPK蛋白的细胞主要为表皮细胞和部分成纤维细胞。结论　在增生性瘢痕中 ,p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK蛋白表达均高于正常皮肤 ,提示这三种蛋白介导的信号传导通路可能参与了调控增生性瘢痕的发生和成熟。     

丝裂素活化蛋白激酶基因在不同胎龄的胎儿皮肤中表达特征及意义

目的 探讨细胞外信号调节激酶1(erk1)、erk2,丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)和3种c-Jun氨基末端激酶(jnk1、jnk2和jnk3)基因在不同胎龄的胎儿和少儿皮肤中表达的变化特征。方法 用病理学技术检测不同发育时期皮肤的结构特征后,提取不同胎龄的胎儿和少儿皮肤的总RNA,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这6种基因在不同组织中的表达特征。结果 与早期妊娠胎儿相比,晚期妊娠胎儿皮肤中,p38MAPK和jnk1基因表达水平显著降低,jnk2和jnk3基因的mRNA含量明显升高。在少儿皮肤中erk2、p38MAPK和jnk1基因表达水平进一步降低,而jnk2和jnk3基因表达明显增加。结论早期妊娠胎儿皮肤中erk2和p38MAPK基因高表达、jnk2和jnk3基因低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合相关。     

大鼠脑缺血后神经元中PYK2及 p38MAPK的活化及其意义

目的观察大鼠局部脑缺血后缺血区神经元中PYK2及p38MAPK的表达并探讨其意义。方法建立大鼠局部脑缺血模型,在缺血后15、30和60min时处死大鼠,采用免疫组化方法观察大鼠缺血区神经元中PYK2及p38MAPK的表达变化。结果正常大鼠皮层仅有微量活化型PYK2和活化型p38MAPK表达。缺血15min后,皮层神经元可见活化型PYK2强免疫阳性标记,这些有活化型PYK2表达的神经元亦呈p38MAPK免疫阳性。缺血区神经元中活化型PYK2和活化型p38MAPK免疫标记在缺血30min时达到最强,60min时开始减退。结论缺血可以诱发神经元中PYK2活化,既而通过p38MAPK信号转导通路介导神经元对缺血的应急反应。     

p38 MAPK对PDGF诱导的细胞迁移的调控作用

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的细胞迁移中的作用.方法 PDGF刺激小鼠NIH 3T3细胞后,利用免疫印迹法检测p38磷酸化程度的改变情况.利用Transwell细胞迁移系统来观察PDGF对NIH 3T3细胞迁移的诱导作用,以及p38基因敲除对PDGF诱导的细胞迁移的影响.结果 PDGF能显著诱导NIH 3T3细胞迁移(P＜0.001),且在此过程中p38能被磷酸化激活,p38基因敲除能阻断PDGF诱导的细胞迁移(P＜0.001).结论 p38 MAPK参与了PDGF诱导的细胞迁移的调控.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在急性胰腺炎中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路能够接受多种细胞外刺激,是真核生物细胞传递细胞外信息到细胞内,调节细胞生命活动的重要信号转导系统。p38MAPK信号通路是迄今发现的重要MAPK通路之一,在炎症、细胞分化、细胞周期、细胞凋亡和发育等多方面发挥重要调节作用。     

特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对哮喘气道黏液高分泌的抑制作用

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对哮喘模型小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法取BABL/C小鼠40只,按随机数字表法分为哮喘组、SB203580治疗组、地塞米松治疗组和正常对照组,每组10只。高碘酸希夫(AB-PAS)特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中黏蛋白MUC5AC含量,RT-PCR法检测小鼠肺组织MUC5AC mRNA表达水平,并采用图像分析法进行灰度分析。结果与正常对照组相比,哮喘组的上皮杯状细胞数量、支气管肺泡灌洗液中MUC5AC含量、肺组织MUC5AC mRNA表达水平均显著增加(P<0.01)。经过SB203580和地塞米松分别干预后,上述指标均明显低于哮喘组(P<0.01),而且SB203580对杯状细胞、肺组织MUC5AC mRNA的抑制能力比地塞米松更强(P<0.01)。结论p38 MAPK特异性抑制剂SB203580在一定程度上能够抑制杯状细胞增生与MUC5AC合成,在哮喘气道黏液高分泌的防治中具有潜在的临床应用前景。     

金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α活性抑制作用的研究

目的 探讨金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α(p38αMAPK)的抑制作用。方法 应用分子对接软件Autodock Vina将金合欢素与靶酶三维晶体结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证金合欢素对p38αMAPK的抑制作用。结果 金合欢素可结合于1KV2的活性位点处而阻碍底物三磷腺苷的进入,对p38αMAPK的生物学功能产生抑制作用。与模型组相比,阳性对照药地塞米松和金合欢素不同浓度干预后可明显下调小鼠RAW 264.7细胞炎症模型细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论 金合欢素可能是通过作用于p38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。     

Fas, Fas-L和Caspase-3在增生性瘢痕中表达特征及其对瘢痕形成的影响

探讨Fas,Fas-L和Caspase-3在增生性瘢痕中表达特征及其对瘢痕形成的影响。用免疫组化方法和常规病理技术检测这三种蛋白在8例增生性瘢痕和8例正常皮肤中的表达变化规律。结果发现，在正常皮肤中，Fas和Fas-L主要分布于表皮细胞、部分成纤维细胞的胞浆和胞膜内，Caspase-3则定位于这些细胞的胞浆中，Fas和Fas-L在增生性瘢痕的表皮基底层细胞内有少量分布，阳性细胞率显著降低（P＜0.05);Caspase-3的阳性细胞率也明显降低（P＜0．05），在表皮角质形成细胞的胞浆内有轻微表达，提示增生性瘢痕的发生可能与Fas,Fas-L和Caspase-3蛋白表达降低，由这三种蛋白介导的细胞凋亡受阻相关。     

IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应

目的：探讨IκB激酶（IκB kinase,IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation, UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。     

代谢综合征大鼠肥胖特征及ERK1/2和p38MAPK的作用研究

目的探讨ERK1／2和p38MAPK在脂肪组织生长中的作用。方法Wistar雄性大鼠20只,随机均分为代谢综合征组和正常对照组,观察代谢综合征大鼠的代谢指标及体重、内脏脂肪含量、脂肪细胞大小和组织病理学改变,Western blot法检测ERK1／2及p38MAPK蛋白在脂肪组织中的表达情况。结果代谢综合征大鼠血压、血浆游离脂肪酸、甘油三酯、空腹血糖及胰岛素均显著高于对照组（P〈0．01）,其体重、腹围、内脏脂肪含量、脂肪系数和各部位脂肪细胞大小亦比对照组显著增高（P〈0．01）,肝细胞存在脂肪变性。在棕色脂肪组织中ERK1／2蛋白的表达与对照组比较无显著性差异,皮下脂肪和内脏脂肪中ERK1／2蛋白的表达均显著高于对照组（P〈0．01）,而p38MAPK蛋白的表达在所有脂肪组织中均显著高于对照组（P〈0．01）。结论代谢综合征大鼠肥胖特征为腹型肥胖,脂肪组织生长以肥大性增生为主,并存在脂质异位沉着（脂肪肝）。代谢综合征大鼠脂肪组织增生可能与ERK1／2和p38MAPK信号通路激活有关。     

丝裂原活化蛋白激酶通路对成纤维细胞内游离钙的影响

为观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对离体热烫伤后成纤维细胞内钙离子的作用以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通过对胞内游离钙的影响，将培养的人成纤维细胞进行热损伤刺激后分成4组：（1）bFGF处理组（10ng/ml);(2)预先加ＰＤ９８０５９（10μmol/L)阻断剂３０min，再行bFGF(10ng/ml)刺激；（３）预先加入ＳＢ２０３５８０（１０μmol/L)阻断剂30min，再行bFGF刺激（10ng/ml)；（4）同时加入PD98059（10μmol/l)和SB203580（10μmol/L)2种阻断剂30min，再加入bFGF(10ng/ml)，应用特异性Ca^2 荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞，激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的浓度，结果：显示，受热刺激的成纤维细胞荧光强度较弱，加入bFGF后可促使成纤维细胞中游离Ca^2 浓度升高，分别预先加入PD98059和SB203580损坏抗剂的成纤维细胞，再加入bFGF，胞内钙离子浓度出现不同的钙振荡现象，同时加入2种阻断剂后胞内钙离子浓度则迅速降低，表明bFGF引起热损伤后的成纤维细胞中游离Ca^2 浓度的增加，MAPK信号通路对胞内钙离子有反馈调节的作用。     

肺癌p16、Rb基因mRNA和蛋白水平表达的定位观察

为研究p16和Rb基因在蛋白水平和mRNA水平的表达及其肺癌发生发展的关系,采用免疫组化和原位杂交的方法,对89例肺癌手术标本进行了p16和Rb基因表达的定位观察。发现p16基因蛋白的丢失主要发生于非小 细胞肺癌,Rb基因蛋白的丢失主要发生小于细胞肺癌。两种基因各自在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。提示p16和Rb基因的表达与肺癌的组织学类型密切相关,有可能作为非小细胞肺癌与小细胞肺癌基因分型诊断的分子生物学指标之一;在翻译水平上也存在着引起基因失活的可能机制。     

上皮性卵巢肿瘤中p53、nm23和增殖细胞核抗原的免疫组化检测及意义

采用免疫组化ＬＳＡＢ法检测３５例卵巢上皮性肿瘤组织中ｐ５３、ｎｍ２３和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果显示：ｐ５３、ｎｍ２３和ＰＣＮＡ表达的阳性率均以卵巢囊腺癌为最高，交界性次之，良性囊腺瘤最低。各项检测结果与细胞增殖状态有关。ｐ５３和ＰＣＮＡ过量表达与肿瘤恶性程度、临床分期和生存期无关，但与肿瘤分化有关。ｎｍ２３不能单独作为判断卵巢肿瘤预后的因素。     

结直肠癌组织中MTS1／p16基因表达检测的意义

为探讨人结直肠癌组织中MTS1/p16基因的缺失情况,利用逆转录聚合酶链反应来检测取自结直肠癌患者的60例手术切除组织标本中MTS1/p16基因的等位缺失情况,其中结直肠癌组织35例,癌旁组织15例及结直肠正常粘膜组织10例。结果显示,17.14%(6/35)的结直肠癌组织标本出现MTS1/p16基因的等位缺失,而癌旁组织及结直肠正常粘膜均未出现MTS1/p16基因的缺失。提示MTS1/p16基因的缺失在结直肠癌进展过程中可能起着一定的促进作用。     

乳腺增生病p53基因第6外显子突变检测

目的：探讨p53基因在乳腺癌发生早期的作用及早期诊断乳腺癌的分子病理指标。方法：用PCR－SSCP检测36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、30例乳腺癌中p53基因第6外显子突变，用DNA直接测序技术确定突变的碱基及其所在的密码子。结果：乳腺单纯性增生、不典型增生、乳腺癌中p53基因第6外显子的突变率分别为0、6．5％（2／31）、13．3％（4／30）。6个点突变均为碱基替换，其中4个发生于第192密码子（CAG→TAG），2个发生于第213密码子（CGA→TGA），两者均导致多肽链合成提前终止。结论：乳腺癌不典型增生中存在p53基因第6外显子突变，该突变可能在乳腺不典型增生发展到乳腺癌过程中起重要作用，可作为早期诊断乳腺癌的辅助指标。     

TGF-β1成熟肽基因克隆及在大肠杆菌中表达

为在原核中表达TGF－β1单体蛋白，用基因重组技术构建pBV220-TGF-β和pQE-TGF－β两种原核表达载体，分别在M15和DH5α大肠杆菌中进行表达，然后利用Sephacryl S-100凝胶层析及Ni^ -NTA琼脂柱纯化TGF－β1单体，经酶切鉴定及测序结果证明pBV220和pQE30载体上成功地插入了TGF－β1成熟肽基因片段，pBV220-TGF－β和pQE-TGF－β两种原核载体在大肠杆菌中均得到了高效表达，表达量约占全菌蛋白的15％和20％，表达的TGF－β1单体蛋白经纯化后进行SDS－PAGE电泳，均显示了一条蛋白带，分子量分别为13kD和15kD左右。     

细菌内毒素对枯否细胞丝裂原活化蛋白激酶家族的影响

为阐明LPS诱导全身炎症反应失控的信号转导机制，采用Western blot检测LPS刺激对枯否细胞ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平的影响。结果显示，LPS刺激后，枯否细胞内ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达无明显变化，但其磷酸化水平均发生了显著变化，刺激后5min即明显升高，并分别于30、45、20min达到高峰，然后逐渐下降，2h后基本恢复至正常水平，其中以p38MAPK变化最快且变化幅度最大。LPS浓度在10pg/ml-100ng/ml范围内时，ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平与LPS刺激浓度呈明显的剂量依赖性。提示ERK、JNK、p38MAPK均是LPS信号转导途径中的重要信号分子，其中p38MAPK在LPS所介导的枯否细胞早期反应中可能较ERK和JNK有着更为重要的作用。