呼吸道合胞病毒的蛋白特征及抗原变异

呼吸道合胞病毒是非节段性的单链负股RNA病毒，是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要原因。本文就近年来对呼吸道合胞病毒的蛋白特征和抗原变异的研究作一综述。     

呼吸道合胞病毒的蛋白特征及抗原变异

呼吸道合胞病毒是非节段性的单链负股RNA病毒,是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要原因.本文就近年来对呼吸道合胞病毒的蛋白特征和抗原变异的研究作一综述.     

Colti病毒抗原制备、保存及其在检测患者血清Colti病毒抗体中的应用

目的 获得较高滴度和稳定的Colti病毒抗原，进一步开展Colti病毒感染的血清学诊断。方法 用C6／36细胞培养Colti病毒，于不同时间收获后进行病毒滴度测定。病毒经聚乙二醇(PEG)纯化浓缩后抗原分别保存于-20℃和4℃备用。利用该抗原采用ELISA法检测患者血清标本的Colti病毒抗体。结果 在制备Colti病毒抗原时，以细胞培养3—4周的病毒滴度最高，经PEG纯化浓缩的抗原于-20℃和4℃条件下，保存6个月，其抗原滴度仍保持在较高水平。特别是加入甘油的抗原无论在-30℃，还是在4℃下，甚至可保存2年。用这些抗原，检测疑似乙型脑炎或病毒性脑炎患者标本1141份，Colti病毒IgM抗体阳性130例，阳性率为11．4％(130／1141)，特别是检测广州市儿童医院患者标本41份，9份Colti病毒抗体阳性，阳性率为22．0％，其中5例临床诊断为病毒性脑炎。结论 为建立检测Colti病毒抗体及诊断试剂盒提供了较稳定的抗原，Colti病毒可能是引起我国夏、秋季脑炎的又一重要病原。     

河北省卢龙地区2008-2009年5岁以下腹泻住院儿童中诺如病毒的检测和分型

目的 了解河北省卢龙地区2008 -2009年5岁以下住院儿童中诺如病毒的分子流行病学特征.方法 收集2008年10月至2009年8月325例5岁以下腹泻住院患儿粪便标本和流行病学资料,采用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测轮状病毒抗原,利用多重RT-PCR方法检测诺如病毒,并对部分诺如病毒阳性株进行序列测定和系统进化分析.结果 诺如病毒的检出率为11.3％ (37/325),仅次于轮状病毒的检出率(48.6％),高于腺病毒(6.5％)和星状病毒(4.3％),主要感染2岁以下儿童,季节高峰在11月,系统进化分析表明诺如病毒流行优势株为GⅡ-4/2006b变异株,并发现一株未见报道的新型GⅡ-4变异株.结论 诺如病毒是引起2008 -2009年卢龙地区的急性胃肠炎的重要病原之一,GⅡ-4/2006b变异株仍是流行优势株,要进一步监测新型GⅡ-4变异株的流行.     

广东新型甲型H1N1病毒血凝素基因分子进化与变异

目的 揭示广东地区2009-2011年新型H1N1病毒血凝素基因(HA)进化特征及抗原表位变异特征.方法 采用时空抽样方法抽样,检测2009-2011年广东分离的24株新型H1N1病毒HA基因核苷酸序列,与GenBank中44株国外相应序列比较;比对HA基因核苷酸序列,分析基因分子变异,构建分子遗传动力学MCMC进化树;同时分析2009-2011年广东毒株HA基因的抗原表位变异情况.结果 68株HA基因进化树显示,广东毒株进化树主干至少分为6大分支;其中2011年毒株聚类为2个(Ⅴ和Ⅵ)主要分支,各具基因特征.变异频率较高的位点包括391、467、202和214位,正向选择位点包括8、145和391;广东毒株抗原表位区发生S145L/P、L208I、Q240R、S160G和G187R位点变异.2009年广东毒株HA基因分支Ⅰ毒株可能于2010年传播到亚洲、欧洲和澳洲地区.结论 广东新型H1N1病毒HA基因变异具有传播特征(Ⅰ)和地区特征(Ⅵ),位于抗原表位Ca、Sa和Sb的氨基酸发生变异,其中位点145等变异频率较高,承受着正向选择压力.     

柯萨奇病毒持续感染机制的研究

本文概述了柯萨奇病毒持续感染的机制，内容包括病毒的复制，变异及感染免疫系统，宿主因素。细胞因子作用等。     

河北省卢龙地区2008—2009年5岁以下腹泻住院儿童中诺如病毒的检测和分型

目的了解河北省卢龙地区2008—2009年5岁以下住院儿童中诺如病毒的分子流行病学特征。方法收集2008年10月至2009年8月325例5岁以下腹泻住院患儿粪便标本和流行病学资料,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测轮状病毒抗原,利用多重RT．PCR方法检测诺如病毒,并对部分诺如病毒阳性株进行序列测定和系统进化分析。结果诺如病毒的检出率为11．3％（37／325）,仅次于轮状病毒的检出率（48．6％）,高于腺病毒（6．5％）和星状病毒（4．3％）,主要感染2岁以下儿童,季节高峰在11月,系统进化分析表明诺如病毒流行优势株为GII-4／2006b变异株,并发现一株未见报道的新型GII-4变异株。结论诺如病毒是引起2008—2009年卢龙地区的急性胃肠炎的重要病原之一,G114／2006b变异株仍是流行优势株,要进一步监测新型GII-4变异株的流行。     

脊髓灰质炎病毒载体研究进展

脊髓灰质炎病毒是小核糖核酸病毒科成员，是单正链RNA病毒，从上世纪八十年代以来，人们一直致力于发展脊髓灰质炎病毒载体，先后出现了抗原嵌合载体，PV复制子，多聚蛋白融合载体及双表达载体等类型。近年，脊髓灰质炎病毒载体用于在中枢神经系统中定点表达外源蛋白，引起了人们的重视。本文对脊髓灰质炎病毒载体的类型。特点，应用及最新进展作一综述。     

用点突变的方法组建巨细胞病毒抗原决定簇基因的表达克隆

研究资料表明，人巨细胞病毒（ＨＣＭｖ）单一蛋白的单一抗原决定簇只能被部分患者阳性血清识别。组建在血清学诊断中能够替代全病毒抗原的基因工程抗原，需要含有病毒多种主要抗原蛋白的抗原决定簇。为搞清在表达载体中重复插入某一抗原决定簇基因是否能表达出更高抗原效价的融会蛋白，我们用点突变的方法，在表达载体中分别插入了人ＨＣＭｖ的ｐｐＵＬ３２蛋白羧基端一个抗原决定簇基因的１个、２个和３个拷贝。在免疫转印检测中，这些克隆表达的融合蛋白与特异性阳性血清的反应性差别不明显。这表明，插入表达载体中目的基因的多寡对表达蛋白的抗原效价没有显著影响。     

Epstein-Barr病毒壳抗原gp125的纯化和应用

目的研制ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒诊断试剂。方法将重组痘苗病毒表达的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）主要多肽ｇｐ１２５纯化，作为诊断抗原建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测了４８份鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清及１０份正常人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体。结果该方法与免疫荧光（ＩＦ）检测结果一致，但ＥＬＩＳＡ的平均几何滴度（ＧＭＴ）是ＩＦ的１２倍。结论以纯化的ＥＢ病毒壳抗原主要多肽ｇｐ１２５作为诊断抗原建立的检测方法，更适合于ＥＢＶ相关疾病的血清学诊断和血清流行病学调查。     

微小病毒B19与造血危象的研究进展

微小病毒Ｂ１９（ＰＶＢ１９）是目前唯一认知的具有独立复制能力的存在于人类体液中的病毒，是引起造血危象的病原体之一，该病毒易引起原有慢性贫血患者发生造血危象，也可引起正常健康者发生造血危象。红细胞Ｐ抗原是ＰＶＢ１９的细胞受体，前红造血细胞是ＰＶＢ１９复制的主要场所，但不是唯一的靶细胞，其它造血系统也可受累，ＰＶＢ１９感染诊断依赖于病毒抗原，抗体和核酸的检测。ＰＶＢ１９引起的造血危象是可治的。     

287例病毒性肝炎患者血清快速免疫电镜结果与血清…

对２８７例病毒性肝炎患者的血清进行了快速免疫电镜和血清乙型肝炎病毒标志物、肝功能等检测，发现血清乙型肝炎表面抗原阳性者中８１．７％电镜下检出ＨＢＶ抗原颗粒，１８．３则未检出ＨＢＶ抗原是颗粒；血清ＨＢｓＡｇ阴性者中７７．９％电镜下未检出ＨＢＶ抗原颗粒 ，２２．１％却见到ＨＢＶ抗原颗粒。     

牛蒡子对Epstein－Barr病毒抗原表达的抑制作用

牛蒡子乙醇提取物对巴豆油、正丁酸钠联合激发的ＥＰＳｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒特异性ＤＮＡ酶、ＤＮＡ多聚酶、早期抗原、壳抗原表达均有明显抑制作用。在浓度相同时，和已知的强抗ＥＢ病毒药维甲酸的抑制作用相似，且有一定的持续抑制作用，用药７天，除药后第１２天ＥＢ病毒抗原表达才完全恢复到对照组水平。牛蒡子乙醇提取物对细胞几乎没有毒性作用。     

试论生物病毒与计算机病毒

社会在进步，科学技术在发展，病毒也在变异。人类有多种病毒性疾病，计算机也有类似病毒的程序，一种病毒被控制了，另一种病毒又在萌生。如人类天花病毒被控制了，但又出现了艾滋病等病毒；同样计算机的小球病毒被排除了，又出现了恶性ＣＩＨ病毒。为此，近年来人们对无...     

5株呼吸道合胞病毒地方株F蛋白基因序列分析

目的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｆ蛋白是ＲＳＶ感染免疫中最重要的病毒蛋白，为了解我国ＲＳＶ地方株Ｆ蛋白的基因状况和变异特征，随机选取北京、广州、长春和河北四个地区具有不同流行特征的ＲＳＶ地方株（Ａ亚型）５株，进行ＲＳＶＦ蛋白全基因的核苷酸序列分析。方法以提取的病毒ｍＲＮＡ为模板进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增、目的基因的克隆及序列测定，对地方株及原型株的序列进行比较分析。结果地方株Ｆ蛋白基因与原型株Ａ２株有很高的同源性，核苷酸全序列的同源性为９５．１％～９６．１％，氨基酸同源性为９６．７％～９７．４％。核苷酸有义突变率为２２．６％～２５．９％。３非编码区的核苷酸序列比蛋白编码区变异显著。河北地方株（Ｅ７３株）在３非编码区有６个核苷酸的插入。Ｆ２亚单位的氨基酸变异高于Ｆ１亚单位。在北京地方株（ＺＨＳ１３株）Ｆ１亚单位内，由具有中和能力单克隆抗体所识别的抗原表位区中存在一个氨基酸的变异。结论我国ＲＳＶ地方株与原型株之间的Ｆ蛋白基因尽管存在一定的变异，但仍有很高的同源性。地方株间Ｆ蛋白的核苷酸、氨基酸变异的位置及形式很相似，提示我国ＲＳＶ的不同流行特征可能并非由于Ｆ蛋白的基因变异所致。     

噬菌体展示技术在病毒抗原表位筛选中的应用

病毒的抗原表位分析在揭示病毒抗原分子的结构和功能，抗原一抗体反应机制方面具有重要意义，亦为研制诊断试剂，设计多肽疫苗和筛选药物等研究提供依据。近年来，许多学者将噬菌体展示技术应用于病毒抗原表位的筛选中，结果显示：这种新型分析技术弥补了传统分析技术的不足，为基于抗原表位的后继研究奠定了基础。     

基因重组Epstein—Barr病毒壳抗原gp125的免疫原性

天然的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒ｇｐ１２５蛋白有极强的免疫原性，是ＥＢＶ初次感染的主要免疫原，也是诊断ＥＢＶ既往感染和新近感染最有价值的抗原。文章在用重组痘苗病毒表达ｇｐ１２５的基础上，研究了表达产物的特异性，并用活的重组痘苗病毒免疫中国本兔，用表达产物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，研究了其免疫原性和免疫抗体的特异性。结果显示：重组痘苗病毒在感染细胞内特异性地表达ｇｐ１２５，活病毒及表达产物能诱导动物产     

西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ特异性单克隆抗体的研制

目的研制针对西尼罗Ⅲ重组融合蛋白的特异性单克隆抗体。方法用西尼罗Ⅲ重组融合蛋白免疫BALB／c小鼠，用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，并用间接ELISA方法进行筛选，所获得的单抗经间接ELISA、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定。结果共获得了3株能稳定分泌针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为4F7、6H3和8FA，其单抗亚类鉴定分别属于IgG1、IgG1和Ig2a。这3株单克隆抗体均能与重组西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ发生特异性反应，而与日本脑炎病毒无交叉反应，并且，8FA和6H3识别同一抗原位点，4F7识别西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的另一抗原位点。结论本实验成功研制出针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单克隆抗体，为我国建立西尼罗河病毒的病原学检测方法并与日本脑炎病毒进行鉴别诊断提供了技术贮备。     

SARS病毒Spike蛋白具有中和活性的抗原表位预测和初步鉴定

目的：预测并合成SARS病毒Spike蛋白中具有中和活性的抗原表位，鉴定其在免疫检测和疫苗设计中的作用。方法：使用二级结构以及基因组对比预测方法，预测Spike蛋白中具有较高抗原活性的肽段序列并人工合成。用直接ELISA法检测在SARS确诊阳性患者血清和健康人血清之间相应抗体的检出差别，确定预测肽段是否为SARS的抗原肽段。结果：预测并人工合成了具有抗原活性的GEVFNATKF-PSVYAW多肽，在ELISA检测中，可检测出SARS阳性血清中的针对性抗体，阳性符合率为71．4％，在健康人血清中不能检测出对应的抗体，阴性符合率为92％。结论：预测并合成了具有SARS病毒Spike蛋白的中和表位抗原，其特异性高于全病毒抗原，为SARS的诊断及疫苗的设计奠定了基础。     

流行性乙型脑火患者外周血及脑脊液中某些单个核细胞…

应用单克隆抗体免疫金银染色法检测了１７例经酶联免疫吸附试验确诊的流行性乙型脑宰患者外周血和脑脊液中的乙脑病毒抗原阳性细胞及表达白介素Ⅱ受体，人类白细胞二类抗原和γ－干扰素的单个核细胞。结果提示：（１）该尘对乙脑病毒抗原阳性细胞的检测可望成为乙脑早期诊的新技术；（２）乙脑病毒抗原阳性细胞及白介素Ⅱ受体阳性细胞可作为上判断病情和预后的指标；（３）γ干扰素阳性细胞在乙脑患者的脑组织病理损伤过程中可能起重