ＨＯ-１持续高表达对ＤＡ到Ｌｅｗｉｓ大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的:探讨血红素氧化酶-1(hemeoxygenage-1,HO-1)在DA到Lewis大鼠肝移植中对急性排斥反应的影响及其机制.方法:建立DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,实验分3组,各12对.A组供体术前24 h阴茎背静脉注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24 h阴茎背经脉注射HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体给予HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),移植后持续予相同处理直至受体死亡.术后7天,各组处死6只,取外周血及肝脏标本,测定血清ALT,DBIL水平,组织病理观察排斥反应程度,RT-PCR及Western blot法测定移植物内HO-1 mRNA,Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况,余观察生存期.结果:术后7天,B组血ALT,TBIL水平与A组,c组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);病理示B组移植肝排斥反应程度轻于A,C组;B组HO-1和Foxp3 mRNA及其蛋白的表达均强于A,C组;B组受体存活时间(29.83±1.40)天较A组(13.00±0.52)天与C组(11.67±0.42)天显著延长(P＜0.01),而A,C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:诱导移植肝HO-1持续高表达,可通过促进移植物内Foxp3表达增强,发挥免疫抑制作用,减轻移植肝急性排斥反应.     

二氯甲烷对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨二氯甲烷对减轻肝脏缺血再灌注损伤的机制.方法 将80只雄性SD大鼠随机分为4组(20只/组):对照组,无任何处理;CoPP(钴-原卟啉)组,供肝收获前24 h供体腹腔注射CoPP 5 mg/kg;ZnPP(锌-原卟啉)组,供肝收获前24 h供体腹腔注射ZnPP 20mg/kg;MC(二氯甲烷)组,供肝收获前7 d,供体口服MC 500 ms/(kg·d).受体不作处理,采用双袖套法施行大鼠同基因原位肝移植(每组供体和受体各10只),移植后3 d每组各处死5只受体鼠,取出供肝并检测:移植后受体肝功能;Western印迹法和免疫组化法检测供肝血红素氧合酶-1(HO-1)的表达;TUNEL法检测供肝细胞的凋亡;Suzuki标准评分评估供肝的缺血再灌注损伤程度.每组留下5只受体鼠观察移植后的生存时间.结果 MC组、CoPP组血清的丙氨酸转氨酶(ALT)[(75±16)、(65±28)U/L]、天冬氨酸转氨酶(AST)[(185±42)、(187±43)U/L]明显较对照组[ALT(346±45)U/L、AST(474±90)U/L]和ZnPP组[ALT(578±75)U/L、AST(1084±128)U/L]低(P<0.01).CoPP组肝脏移植物的HO-1表达量中位数为3.05,明显较对照组高(P<0.05),MC组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).MC组和CoPP组的移植物细胞凋亡指数分别为4.1%±0.6%、3.2%±0.8%,明显较对照组(12.5%±2.4%)和ZnPP组(25.8%±3.1%)低(P<0.05).MC组、CoPP组比对照组、ZnPP组的肝细胞损伤轻、炎症细胞浸润少,MC组、CoPP组的Suzuki评分分别为0.76±0.52、0.76±0.59,明显较对照组(1.32±0.74)和ZnPP组(1.80±0.70)低(P<0.05).MC组、CoPP组的中位生存时间分别为100、93 d,较对照组(85 d)、ZnPP组(12 d)延长(P<0.05).结论 HO-1上调和二氯甲烷对肝脏移植物缺血再灌注损伤均有保护作用.     

HO-1的表达对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 本研究采用Sprague-Dawlev(SD)大鼠为供体和受体,建立原位肝移植模型.将48只雄性SD大鼠随机分为:对照组,供肝收获前无任何处理;CoPP组,供肝收获前24h供体腹腔注射CoPP5mg/kg;ZnPP组,供肝收获前24h供体腹腔注射ZnPP 20mg/kg.每组16只.供受体各8只,受体不做任何处理.肝移植后3 d每组各处死3个受体进行检测:(1)肝功能;(2)肝脏移植物HO-1的表达;(3)肝脏移植物细胞凋亡;(4)肝脏移植物缺血再灌注损伤的程度.每组留下5个受体观察其肝移植后的生存时间.结果 (1)CoPP组的ALT(65±27.8),AST(187.2±43.2)明显低于对照组ALT(346.4±45.1),AST(474.4±89.7)和ZnPP组ALT(577.8±75.3),AST(1084.4±127.9)(P<0.01).(2)CoPP组的HO-1表达明显高于其他组(P<0.05).(3)CoPP组的凋亡阳性细胞百分率(3.2±0.8)%明显低于对照组(12.5±2.4)%和ZnPP组(25.8±3.1)%(P<0.05).(4)CoPP组与对照组、znPP组比较,肝细胞损伤轻,炎症细胞浸润少.CoPP组的Suzuki评分(0.76±0.59)明显低于对照组(1.32±0.741和ZnPP组(1.80±0.70)(P<0.05).(5)CoPP组的中佗生存时间(100d)明显长于对照组(12 d)和ZaPP组(93 d)(P<0.01或<0.05).结论 HO-1表达上调对肝脏移植物缺血再灌注损伤有保护作用.     

血红素氧合酶-1对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:SD大鼠30只,建立二套袖法原位肝移植模型。随机分为3组:对照组,无任何处理;CoPP处理组,供肝收获前24h供体腹腔注射HO-1诱导剂CoPP5mg/kg。;ZnPP处理组,腹腔注射抑制剂ZnPP20mg/kg。移植后第三天检测肝脏移植物肝功能,免疫组织化学方法检测肝脏移植物HO-1的表达情况。TUNEL法检测凋亡变化。以Suzuki标准评分来反映肝脏移植物的缺血再灌注损伤程度。结果:①CoPP组ALT,AST较对照组和ZnPP组明显降低(P<0.01)。②HO-1表达:CoPP组明显高于其他组(P<0.05)。③移植物凋亡阳性细胞百分率:CoPP组明显低于对照组和ZnPP组(P<0.05)。④肝脏移植物病理变化:CoPP组和与对照组,ZnPP组比较,炎症细胞浸润少,肝细胞损伤轻。肝脏移植物Suzuki评分,CoPP组(0.76±0.59)明显低于对照组(1.32±0.74)与ZnPP组(1.80±0.70),有显著统计学差异(P<0.05)。结论:HO-1对肝脏移植物缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抗炎症与抗凋亡有关。     

HO-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的:探讨血红素氧合酶-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立NIH Wistar颈部异位心脏移植模型,分别于移植前、移植后1h、6h、12h、24h、48h和72h切取移植心脏,应用RT-PCR、Western Blot检测HO-1mRNA、HO-1蛋白表达并检测HO 1酶活性;同时比较钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响.结果:移植心脏均有HO-1表达,HO-1mRNA(t=2.5170,P＜0.05)、HO-1蛋白表达(t=2.3702,P＜0.05)及酶活性(t=2.246,P＜0.05)移植术后24～48h表达到达高峰;CoPP诱导的HO-1明显延长了移植心脏的存活时间(t=4.74442,P＜0.001).结论:HO-1表达在延迟性异种心脏移植后24～48h到达高峰;CoPP诱导的HO-1能延长延迟性异种心脏移植的存活时间.     

大鼠原位肝移植中血红素加氧酶-1表达对细胞因子的影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠原位肝移植后细胞因子的影响。方法建立大鼠原位肝移植排斥模型,将大鼠分为3组:对照组,锌原卟啉(ZnPP)组和钴泵卟啉(CoPP)组。三组分别于建模后3d和7d处死,取肝脏标本。荧光实时RT-PCR检测HO-1及细胞因子(TNF-α,IL-2,IL-4,TGF-β1)的表达。结果HO-1在CoPP组表达明显升高,ZnPP组不明显,对照组介于两组之间。在对照组和ZnPP组中以促炎症因子(TNF-α,IL-2)升高明显,而在CoPP组中以抑制炎症的因子(IL-4,TGF-β1)升高为主。结论HO-1过表达能上调抗炎症因子的表达,抑制促炎症因子的表达。     

mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的 探讨mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制.方法 选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠20只为异基因肝移植受体,随机分为mdr-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组(A组)和单纯肝移植组(B组).雌性Wistar大鼠10只为同基因肝移植受体(C组).比较A、B两组大鼠肝移植术后1周生存率、生存状况、生存时间,以及移植肝脏的病理变化.结果 C组大鼠生存时间均达60 d以上,A组为(31.2±4.9)d,明显高于B组[(12.1±4.7)d],差异有统计学意义(P<0.05).B组病理组织切片可见中、重度急性排斥反应,肝内单核细胞浸润较为明显,主要集中在汇管区;A组移植肝内组织损伤程度明显减轻;C组基本无排斥反应,接近正常肝组织.结论 mdr-1基因骨髓造血干细胞可明显减轻大鼠肝移植后免疫排斥反应.     

门静脉注射pSilencer质粒观察DA大鼠移植肝脏EOLA1的表达变化研究

目的观察EOLA1在大鼠移植肝脏中的表达和功能。方法采用近交系雄性DA大鼠60只,Lewis大鼠120只,分为3组,改良“二袖套”法建立肝脏移植模型90例。A组Lewis为供体(n=30),Lewis为受体;B组DA为供体(n=30),Lewis为受体;C组以DA大鼠为供体(n=30),Lewis为受体,受体肝在移植后于门静脉注射RNA抑制性干扰质粒。观察平均存活时间;术后1、3、5、7、10时相点血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平以及移植肝脏的病理学变化;半定量检测EOLA1蛋白的表达变化。结果平均存活时间A组超过100d,B组(16.2±1.4)d,C组平均存活时间(11.8±1.6)d;术后第5天B、C组血清ALT和TBIL升高较A组非常显著(P<0.01),B组高于C组差异显著;B、C组病理检查为明显的炎性反应,A组不明显;A组移植肝组织EOLA1表达最高,B组次之,C组最低,B、C组与A组比较差异非常显著(P<0.01),B、C两组间比较差异显著(P<0.05)。结论EOLA1蛋白表达水平的高低与肝组织内炎症反应的严重程度存在负相关;门静脉注射pSilencer质粒可以明显的抑制EOLA1在移植肝脏的表达。     

血红素加氧酶-1高表达对大鼠同种异体肺移植物缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察原卟啉钴(CoPP)诱导内源性血红素加氧酶-1(HO-1)高表达对大鼠同种异体左肺移植物缺血再灌注损伤(IRI)的影响及其作用机制。方法以SD大鼠为供受体,采用改良三袖套法技术建立同种异体左肺移植模型。设立空白对照组(A组)、CoPP+原卟啉锌(ZnPP)组(B组)和CoPP组(C组),离体供肺静脉4℃的LPDG液逆行灌注,供肺保存3h后移入受鼠,移植肺再灌注4h后阻断右肺门,测量动脉血PaO2及PaCO2。取移植肺测肺湿/干质量比率(W/D)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及髓过氧化物酶(MPO)活性;观察病理组织学变化;PCR和免疫组织化学测HO-1表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测TNF-a量的变化;TUNEL法检测移植肺细胞凋亡水平。结果与A、B组比较,C组HO-1升高,PaO2上升、肺W/D下降,SOD活性增高,MDA、TNF-a含量和MPO活性下降(P<0.01);肺泡间质水肿明显减轻,炎症细胞浸润减少,肺泡腔内水肿液和红细胞少见,细胞凋亡减少(P<0.01)。结论 CoPP诱导移植肺高表达内源性HO-1,后者通过抗氧化、抗炎和抗凋亡等多种途径减轻供肺IRI,提高肺移植术后早期肺功能。     

EOLA1基因在DA大鼠移植肝脏急性排斥反应中表达的初步研究

目的：观察新基因EOLA1在DA大鼠移植肝脏中的表达情况。方法：采用近交系雄性DA大鼠30只,Lew is大鼠90只,分为AB两组,改良＂二袖套＂法建立肝脏移植模型60例。A组：移植耐受组（n=30）,Lew is大鼠60只,30只为供体,30只为受体,建立30例肝脏移植耐受模型;B组：急性排斥组（n=30）,DA大鼠30只为供体,Lew is大鼠30只为受体,建立30例肝脏移植急性排斥模型。观察平均存活时间;术后1、3、5、7、10天各时相点血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TB IL）水平以及移植肝脏的病理学变化;半定量检测EOLA1的表达情况。结果：平均存活时间A组超过100天,B组（16.2±1.4）天;术后第五天B组血清ALT和TB IL升高较A组非常显著（p〈0.01）;B组病理检查为明显的炎性反应,A组不明显;A组移植肝组织EOLA1表达较高,B组较低,两组比较相差非常显著（p〈0.01）。结论：EOLA1基因表达水平的高低与移植肝组织急性排斥反应的的严重程度呈负相关,对大鼠移植肝脏急性排斥反应可能具有保护性调控意义。     

血红素氧合酶－1对肝硬化大鼠肺脏结构和功能的影响

目的：探讨血红素氧合酶－1/一氧化碳系统在实验大鼠肝肺综合征中的作用。 方法：35只SD大鼠随机分为肝硬化组、锌原卟啉组、钴原卟啉组和假手术组。胆总管结扎制备大鼠肝硬化模型。锌原卟啉组、钴原卟啉组模型制备同肝硬化组,仅在标本采集前24小时分别腹腔给予锌原卟啉组、钴原卟啉组30mg/Kg。测量平均动脉压、门静脉压,血气分析;病理观察肝硬化和肺血管扩张形成;应用免疫组化方法观察HO-1蛋白在肺内的表达,RT-PCR法检测肺组织中HO-1 mRNA的表达。 结果：病理显示手术组4周肝硬化形成;肺内血管扩张,肺泡间隔增加伴有肺不张。与假手术组相比,肝硬化组平均动脉压显著下降,门静脉压显著升高（P）;肺泡动脉血氧梯度增加（P）;动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著增加（P< 0.05）。与肝硬化组相比,锌原卟啉组肺泡动脉血氧梯度下降、动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著减少（P< 0.05）,肺内血管扩张缩小;钴原卟啉组肺泡动脉血氧梯度增高、动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著增加（P< 0.05）,肺内血管扩张加重。 结论：肺内血红素氧合酶－1表达增加在肝肺综合征的发病中起着重要的作用。     

体内外诱导血红素加氧酶-1延长异种移植胰岛功能和生存

Background  The induced expression of heme oxygenase-1 (HO-1) in donor islets improves allograft survival. Cobalt protoporphyrin (CoPP) could significantly enhance the expression of HO-1 mRNA and protein in rat islet safely. Our work was to study how to protect pancreatic islet xenograft by CoPP-induction.

Methods  Islet xenografts treated with CoPP-induction and CoPP+ Zinc protoporphyrin (ZnPP) in vitro and in vivo were randomly transplanted into murine subrenal capsule; then the graft survival time was compared by blood glucose level and pathological examination and meanwhile the interferon γ (IFN-γ), tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin 10 (IL-10) and IL-1β level in serum and their mRNA and HO-1 mRNA and protein expression were examined.

Results  Islets with CoPP-induction under low- and high-glucose stimulation exhibited much higher insulin secretion compared with other three groups. CoPP-induction could increase higher expression of HO-1 (mRNA: 3.33- and 76.09- fold in vitro and in vivo; protein: 2.85- and 58.72-fold). The normoglycemia time in induction groups ((14.63±1.19) and (16.88±1.64) days) was significantly longer. The pathological examination showed less lymphocyte infiltration in induction groups. The IL-10 level and its mRNA in induction groups were significantly higher.

Conclusions  The HO-1 induced by CoPP would significantly improve function, prolong normoglycemia time and reduce lymphocyte infiltration. Meanwhile CoPP-induction in vivo had more beneficial effects than in vitro. Its mechanism could be related to immune-modulation of IL-10.

     

上调血红素氧合酶1对糖尿病大鼠心功能的影响及可能机制

目的 探讨上调血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）对糖尿病大鼠心脏功能的影响及可能机制.方法 将48只Wistar大鼠随机分为对照组（A组,16只）,糖尿病大鼠组（B组,16只）,应用钴原卟啉CoPP（HO-1诱导剂）上调HO-1的糖尿病大鼠组（C组,16只）.测量各组大鼠尾静脉葡萄糖、胰岛素及脂联素水平,采用Langendorff装置测量各组大鼠心肌和冠脉功能,采用色谱技术测量心肌组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）、丙二酰辅酶A及乙酰辅酶A的含量,液体闪烁计数器测量心肌中超氧化物水平,采用免疫印迹法测定心脏裂解液中信号分子、一氧化氮合酶（诱导型一氧化氮合酶iNOS和内皮型一氧化氮合酶eNOS）活性及HO活性水平.结果 糖尿病大鼠组葡萄糖水平显著高于对照组（P＜0.01）,而胰岛素水平、脂联素水平显著低于对照组（P＜ 0.01,P＜0.05）,应用CoPP后C组的葡萄糖水平及脂联素水平均升高（P＜ 0.05,P＜0.01）.糖尿病大鼠离体心脏Langendorff灌注模型的左心室功能较对照组有所下降,而冠脉阻力（coronary resistance,CR）明显升高.而上调HO-1后,糖尿病大鼠的心脏功能显著升高（P＜0.01）且CR明显降低（P＜0.01）.上调HO-1后,糖尿病动物体内的HO-1蛋白水平升高并伴有心脏超氧化物O2-和丙二醛水平的显著降低（P＜0.05）.另外,糖尿病大鼠体内信号分子明显降低（P＜0.05）,上调HO-1后显著升高（P＜0.05）.结论 上调血红素氧合酶1可抑制氧化应激反应,恢复eNOS/iNOS平衡,升高HO-1水平,提高内皮功能和胰岛素敏感性,达到了改善心肌功能和冠脉灌注效果的目的.     

丹参对大鼠离体肝脏血红素氧合酶-1表达的作用

目的：研究丹参在大鼠离体肝保存时对HO-1mRNA及蛋白的表达的作用。方法：模拟临床供肝保存,大鼠肝脏切取后置4℃保存液中。实验根据灌注保存液不同分为平衡液组(A 组)、丹参组（B组）、丹参＋抑制剂预处理组（C 组）,每组分别为24只动物,根据保存时间各组分为4个亚组（0、1、3、6h）,每亚组6只动物。术前24小时,A、B组用生理盐水腹腔注射预处理,C组用锌原朴啉腹腔注射预处理。以RT-PCR和免疫组化半定量检测HO-1mRNA及蛋白表达的情况,对各组大鼠肝组织行病理切片,观察形态学改变并评分,并作HO-1的与肝脏损伤评分相关分析。结果：(1) B组各亚组肝组织HO-1的mRNA及蛋白的表达水平明显较A、C两组高（p﹤0.05）;(2) 除0h亚组外,各组同时间点亚组比较,以B组肝组织损害最轻,保存时间最长, C组的肝组织损伤明显重于A、B两组;（3）HO-1的mRNA及蛋白的表达与肝脏损伤评分呈相关性。结论：大鼠离体肝脏保存时,丹参可以诱导HO-1过表达;丹参诱导HO-1的表达可能是丹参对肝脏保护作用机制。 关键词：丹参; 血红素氧合酶-1;器官保存     

姜黄素对肾脏缺血再灌注损伤大鼠模型保护作用的研究

目的:探讨姜黄素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、姜黄素+缺血再灌注组(C组)和姜黄素+缺血再灌注组+锌-原卟啉组(D组),各15只。C组和D组术前5 d腹腔注射姜黄素100 mg/kg,A、B组注射等量的0.9%氯化钠注射液。D组大鼠术前60 min腹腔注射锌-原卟啉20μmol/kg。手术游离并阻断双肾肾蒂血管,60 min后恢复灌注,分别于4 h、12 h、24 h取血检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血红素氧合酶-1(HO-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,24 h切除肾组织检测肾组织髓过氧化物酶(MPO)活性的表达水平。结果:C组和D组血清SCr、BUN、TNF-α、ICAM-1及肾组织MPO水平均高于A组,但低于B组(P<0.05~P<0.01);HO-1的表达低于A组,高于B组(P<0.05~P<0.01)。D组TNF-α和ICAM-1表达水平在各时间点均高于C组(P<0.05~P<0.01),SCr、BUN及肾组织MPO的表达在12 h和24 h高于C组(P<0.05~P<0.01),在4 h时差异无统计学意义(P>0.05);HO-1在各时间点表达均低于后者(P<0.05~P<0.01)。结论:姜黄素对肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用,能够有效减轻肾组织的炎性及氧化应激损害。HO-1可能参与姜黄素对肾脏的保护。     

血红素加氧酶-1在肺早期缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的研究血红素加氧酶-1（HO-1）与供肺缺血再灌注损伤之间的关系。方法采用改进的套管吻合技术，建立同系大鼠左肺原位再灌注损伤的动物模型。采用HO-1的诱导剂钴原卟啉（CoPP）和抑制剂锌原卟啉（ZnPP）分别进行干预处理后，运用免疫组织化学技术和RT-PCR技术分别检测HO-1蛋白在供肺组织中的表达以及供肺中HO-1mRNA的表达；运用TUNEL技术检测供肺组织中细胞凋亡。结果肺组织发生缺血再灌注时可诱导HO-1蛋白的表达，且随着再灌注时间的延长，表达逐步增多，再灌注8 h后达到高峰；再灌注前使用CoPP进行预处理，可以诱导HO-1蛋白的表达上调。HO-1蛋白表达上调可以降低肺缺血再灌注后细胞凋亡的发生率。结论肺缺血再灌注损伤可诱导HO-1表达上调，CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制肺缺血再灌注损伤诱导的肺细胞凋亡，从而减轻供肺的再灌注损伤。