大鼠肝卵圆细胞的增殖模型建立和体外分离培养、诱导分化研究

目的 建立大鼠肝卵圆细胞(HOC)的增殖模型,探讨分离培养及鉴定HOC的方法.方法 采用2-乙酰氨基芴/部分肝切除术刺激建立成体大鼠肝卵圆细胞增殖模型,于肝切除术后第12天切取剩余肝脏,使用胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞,免疫荧光技术和KT-PCK分析法检测肝卵圆细胞标志物mRNA表达.行体外培养并添加干细胞生长因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)诱导其分化.结果 分离得到的肝卵圆细胞存活率达到90%,经c-kit免疫荧光显色,PCR 分析显示有CK19和白蛋白mRNA表达.生长因子诱导下有向胆管细胞和肝细胞分化的特性.结论 肝卵圆细胞分离纯化及鉴定方法和肝卵圆细胞成功培养,为进一步研究肝干细胞生物学特性和与肝癌的关系提供了物质基础.     

肝干细胞－卵圆细胞的研究进展

卵圆细胞是肝脏干细胞的代表细胞,主要存在于幼肝及成人受损的肝脏中,是一种双潜能的肝脏干细胞,多种因素调节其分化,在此过程中动态表达一系列表面标志物。卵圆细胞的分化异常与肝癌的发生关系密切。在体外大量扩增卵圆细胞并使之分化为成熟的 有功能的肝细胞,为终末期肝病、肝脏的组织工程研究及基因治疗开辟了新的途径。      

肝卵圆细胞增殖研究新进展

肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)是肝脏应对各种因素所致肝损伤修复过程中最重要的细胞,同时是研究肝纤维化、肝硬化以及肝癌的发展机制的关键细胞,也是组织工程种子细胞研究的重要对象。作为肝卵圆细胞活化后的重要步骤,增殖是其后续分化、凋亡以及体外培养获得大量种子的关键环节。本文就影响肝卵圆细胞增殖的因子及信号转导通路两方面作一综述。     

三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖肝脏CX/GJIC的影响

目的研究三七总皂甙（Panax notoginoside，PNS）对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白（connexin，CX）表达及其介导的缝隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication，GJIC）的影响。方法选择体重150g左右的雄性Wistar大鼠，随机分为对照组、模型组和PNS组。采用2-AAF／PH方法（2-acetylamin-ofluorene＋two thirds partial hepatectomy）建立肝卵圆细胞增殖模型，切开标记／染料示踪技术（incision loading／dye transfer，IL／DT）检测肝脏GJIC，免疫组织化学法检测CX32、43的表达和计数肝卵圆细胞，并观察PNS腹内注射后的表达变化。结果（1）对照组未见肝卵圆细胞，PNS组、模型组肝卵圆细胞增殖明显；PNS组与模型组相比，卵圆细胞增殖高峰低、持续时间长。（2）各组CX32和GJIC的表达：模型组与PNS组均低于对照组，表达峰呈先下调后逐渐恢复趋势，PNS组高于模型组。（3）各组CX43的表达：模型组与PNS组均高于对照组，表达峰呈先升高后逐渐恢复与肝卵圆细胞的增殖趋势一致，PNS组与模型组相比表达高峰滞后。结论2-AAF／PH是理想的肝卵圆细胞增殖模型；CX32和GJIC的下调可动员肝卵圆细胞，CX43可促进其增殖，CX／GJIC对肝卵圆细胞增殖有重要的调控作用；PNS可通过影响CX／GJIC的表达，调节肝卵圆细胞的增殖过程。     

化学致癌剂3''''-甲基-4-DAB影响巢蛋白Nestin在SD大鼠肝卵圆细胞中的表达

目的：采用免疫组化方法标记大鼠肝卵圆细胞中巢蛋白Nesin的表达，探讨肝卵圆细胞新的表面标记蛋白。方法：用化学致癌剂3’-甲基4-二甲基氨偶氮苯(3’-Methy-4-dimethylaminoazobenzen，3’-me-DAB)喂养SD大鼠4周，取大鼠肝脏，用免疫组化法标记神经前体细胞的特异性表面标记物巢蛋白Nestin在大鼠肝卵圆细胞中的表达。结果：汇管区靠近界板处卵圆细胞表达Nestin阳性，Nestin阳性细胞成簇状分布或呈双层排列成管状，主要集中在赫令氏管周围并见Nestin阳性细胞向肝小叶内迁移，散在分布于肝细胞索。结论：大鼠肝内存在Nestin表达阳性的卵圆细胞，Nestin可能是肝卵圆细胞新的标记蛋白。     

胰腺HGF对大鼠肝卵圆细胞调控的探讨

目的 探讨胰腺组织HGF表达对大鼠肝卵圆细胞增殖、分化的影响.方法 选择体重150～200 g的雄性Wistar大鼠,建立肝卵圆细胞增殖模型（2-AAF/PH）.采用免疫组织化学和RT-PCR方法,观察不同时间点胰腺、肝脏组织中HGF蛋白和mRNA的表达及其变化.结果 实验组大鼠胰腺HGF表达上调,与对照组比较有显著意义,其高峰时间与肝脏HGF表达及肝卵圆细胞增殖高峰时间同步.结论 胰腺可能通过HGF的内分泌调控对大鼠肝卵圆细胞介导的肝再生起一定作用.     

大鼠肝卵圆细胞向肝癌细胞分化过程中microRNA的变化

目的利用生物芯片技术分析大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达变化,筛选调控分化的microRNAs,探讨肝癌发生的起源机制。方法用化学致癌剂3’-Me-DAB诱发SD大鼠肝卵圆细胞增生,采用密度梯度离心法分离、纯化肝卵圆细胞,行体外培养使其恶性分化并进行鉴定。提取分化过程中的microRNA进行microRNA基因芯片杂交,获得卵原细胞恶性分化过程中microRNA表达谱。同时利用种植模型及大鼠Y染色体特异性PCR技术,验证卵圆细胞可恶性分化为肝癌细胞。结果①激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit;②通过基因微阵列分析,卵原细胞恶性分化过程中有22个miRNA的改变显著,其中19个表达上调,3个表达下调;③卵原细胞种植模型的大鼠肝癌组织具有SRY基因的电泳条带。结论特定microRNA可能对大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程起到关键作用。     

肝卵圆细胞诱导分化调控机制的研究进展

肝卵圆细胞是在肝损伤大鼠模型肝内发现的一类细胞,被认为是多能肝干细胞的子代细胞,也被认为是一种肝干细胞。大量研究认为肝卵圆细胞能够在肝脏严重受损、肝细胞增殖受抑制的情况下被活化,通过增殖、分化而形成成熟的肝细胞和胆管上皮细胞,重建受损的肝组织。随着生物技术的发展,肝卵圆细胞诱导分化被广泛发掘,因此,其必将在治疗肝脏疾病方面具有前景,而且在治疗胆道疾病,尤其是在修复胆道损伤及胆道黏膜上皮的完整性上成为可能。     

大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究

目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法,用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF、LIF等生长因子联合应用诱导肝卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞.观察肝卵圆细胞到肝细胞形态变化过程,用免疫荧光技术,Western blotting分析检测了干细胞标志c-kit和RT-PCR分析法检测肝干细胞白蛋白和CK19 mRNA表达鉴定卵圆细胞.结果 分离得到的肝卵圆细胞活度达到90%,细胞形态包括大小和颜色呈不均质,卵圆细胞直径是肝细胞直径的1/4～1/6.诱导后出现大而圆的肝细胞,可见卵圆细胞到肝细胞的中间变化过程,新分离的肝卵圆细胞在生长因子诱导下有向肝细胞分化的特性.经c-kit免疫荧光染色显黄绿色荧光,Western blotting检测肝卵圆细胞有c-kit蛋白条带,而大鼠肝细胞及胆管细胞则未出现条带.PCR分析显示卵圆细胞有CK19和白蛋白mRNA表达.结论 新分离的肝卵圆细胞同时表达c-kit,CK19和白蛋白3种抗原,诱导分化出现一系列从卵圆细胞到肝细胞的形态学变化,这种现象证明分离的肝卵圆细胞就是肝干细胞,经诱导分化可以产生成熟的肝细胞,成为进一步研究肝干细胞生物学特性的基础.     

不同品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型的比较研究

目的 对不同品系大鼠肝卵圆细胞增殖模型进行比较,筛选建模效率较高的大鼠品系.方法 选择F344、Wistar和SD大鼠各10只,经2-乙酰氨基芴灌胃和四氯化碳腹腔注射建立肝脏卵圆细胞增殖模型,组织学和免疫组织化学检测鉴定.荧光激活细胞筛选法分选并纯化各品系大鼠肝脏卵圆细胞,分析Thy-1.1~＋细胞百分率,观察Thy-1.1~＋细胞培养结果.结果 成功建立三种品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型.流式细胞仪分选结果显示,F344、wistar和SD大鼠Thy-1.1~＋细胞百分率分别为（9.46±0.99）%、（2.46±0.37）%和（1.46±0.12）%;各品系大鼠间Thy-1.1~＋细胞百分率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.细胞培养观察发现,与Wistar和SD大鼠比较,F344大鼠分选得到的肝脏卵圆细胞生长状态好且纯度较高.结论 在用于建立肝脏卵圆细胞增殖模型最为常见的三种品系大鼠中,F344大鼠所建模型的肝脏卵圆细胞活化效率最高.     

肾性高血压的中医药治疗进展

肾性高血压的主要发病机制为肝肾亏虚,其根本在于阴阳的失调、脏腑功能的虚衰,治疗上多从滋补肝肾、平肝潜阳、活血、化痰等角度入手。现代研究表明,中医药治疗肾性高血压的机制主要有以下几个方面:(1)改善血管生理功能;(2)改善水钠潴留,保护肾脏;(3)抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统;(4)干预神经系统活动;(5)影响其他调节肾脏分泌的活性物质。     

基于知识考古学的《临证指南医案》“肝阳”概念形成分析

《临证指南医案》“肝阳”概念的对象是肝及肝病本身的特征。肝阳与肝的关系是肝生肝阳,肝阳与肝阴之间是体用关系。肝阳概念的对象及肝阳与其他概念间的关系源于理学中的“理一分殊”“理学世界图示”和“体用一源”。理一分殊决定了肝阳的对象是肝及肝病本身的特征;理学世界图式决定了肝阳与肝的关系是肝生肝阳;体用一源确定了肝阳与肝阴之间是体用关系。《临证指南医案》的肝阳概念主要来源于理学。厘清《临证指南医案》肝阳的发生学基础,解决其理论来源问题,无论是对古代文献的研究、肝脏象理论、中医脏象理论的研究,还是对现代肝脏象理论、中医脏象理论和中医理论的构建都有积极的意义。     

用于肝脏疾病研究的人源化小鼠模型概述

肝脏疾病是危害人类健康的重要疾病之一，合适的小动物模型的缺乏在很大程度上制约了肝脏疾病的相关研究。人源化小鼠作为重要动物模型之一，在肝脏疾病的研究中有巨大的应用价值。本文对早期的uPA小鼠，FAH小鼠，TK-NOG小鼠和近年来的AFC8小鼠等几种应用较为广泛且有代表性的人源化小鼠模型及其在肝脏疾病研究中的应用进行了对比分析，阐述了它们各自的模型原理和优缺点，以期对人源化小鼠应用于人类肝脏疾病的研究具有较为直观的认识。     

自然杀伤细胞与肝纤维化

 肝淋巴细胞中含有丰富的自然杀伤细胞（natural killer cells,NK）,后者通过影响天然免疫抵御肝内病毒感染及肿瘤转移。而活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）在肝纤维化发生发展中起着关键作用。近来一些研究表明NK细胞可通过产生具有抗纤维化作用的IFN-γ以及直接杀死活化HSCs,起到明显的抗肝纤维化作用。因此,刺激NK细胞活化极可能成为治疗肝纤维化的新途径,但其有效性及安全性需进一步通过临床研究来证明。     

健脾理气法防治肝癌的研究进展

综述了近年健脾理气法在防治肝癌中临床应用情况．如相关药物出现频率、运用规律、疗效情况等,认为脾虚气滞是肝癌的常见基本证,健脾理气法是临床防治肝癌的常用治法;从相关实验研究来论述该法对免疫系统、预防肝癌发生及转移、复发等方面的作用。建议肝癌临床研究及疗效评价体系应不断客观化与标准化,对健脾理气中药机理研究应多方位、多靶点深入开展。     

肿瘤干细胞生物学特性相关研究进展

肿瘤干细胞学说是目前肿瘤研究中最主要的学说之一,认为其与肿瘤的发生发展密切相关.肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)与干细胞的特点极为相似.虽然数量稀少但对于肿瘤的起源、复发和转移有决定性作用.本文将对肿瘤干细胞的起源、增殖、转移及其产生免疫耐受等生物学特性的研究进行相关概述,旨在为肿瘤干细胞在临床治疗中的应用提供理论依据.     

中医治疗非酒精性脂肪肝研究现状

从病因病机、辨证论治、临床治疗等方面探讨近年来非酒精性脂肪肝的中医药研究现状,以期为今后治疗本病提供思路及方向。中医药治疗本病显示出明显的优势和确切的疗效,前景广阔,但仍存在很多问题值得重视及研究。     

健康管理在慢性非传染性疾病管理中的应用

对慢性非传染性疾病(慢病)进行健康管理,不仅可以提高病人的生活质量而且可以降低医疗费用。目前,国内外已经大规模地开展了对慢病的健康管理的相关研究。现将相关研究从以下几个方面进行综述:健康管理的起源、定义及其在慢病中的实践研究与效果的评价。     

试从阴阳、气血、经络论《黄帝内经》中心肝关系

《黄帝内经》是我国现存最早的中医学理论专著,是中医学发展的理论基础和源泉。其中对心肝及其关系的论述,对以后各医家对心肝关系的研究以及指导临床治疗奠定了基础,文章试从阴阳、五行、气血、情志、经络等方面浅谈《黄帝内经》中关于心肝及其关系的论述,指出心与肝在生理上相互联系、病理上密切相关。     

药用植物分子生物学研究中的分子标记

目的了解分子标记在药用植物研究中的应用及进展。方法查阅本领域国内外文献并进行综述。结果分子标记在药用植物的鉴定、亲缘关系、起源进化、遗传多样性、基因定位及克隆、代谢途径的基因工程研究等方面有广泛的应用空间。结论合理运用分子标记技术将加快药用植物研究的步伐。