乙烯苷体外肝微粒体中潜在毒性作用

目的：以胆红素代谢过程中UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1酶）介导的胆红素葡萄糖醛酸结合环节为切入点,考察何首乌中含量高的二苯乙烯苷类（顺式、反式二苯乙烯苷）潜在肝毒性,探索何首乌致肝毒性物质基础。方法：以胆红素为UGT1A1酶底物,以表观抑制常数Ki为评价指标,采用体外肝微粒体孵育法,启动Ⅱ相代谢反应,考察顺式、反式二苯乙烯苷原型成分的抑制作用;启动Ⅰ相代谢反应,考察代谢产物及原型成分的抑制作用,推测待测物的潜在毒性作用。结果：当仅启动Ⅱ相反应时,顺式、反式二苯乙烯苷均以原型形式直接作用于UGT1A1酶,两个单体分别表现出中等抑制和弱抑制作用,抑制类型均为竞争型抑制;当同时启动Ⅰ、Ⅱ两相反应时,两个待测单体对UGT1A1酶的抑制作用均消失,提示两个单体存在Ⅰ相代谢过程,并且其Ⅰ相代谢产物对UGT1A1酶无抑制作用。结论：本实验初步证明何首乌中顺式、反式二苯乙烯苷原型成分对UGT1A1存在抑制作用,经由Ⅰ相代谢后,对Ⅱ相代谢酶UGT1A1抑制作用消失,肝毒性风险降低。     

基于UGT1A1酶介导的胆红素代谢考察大黄素在肝微粒体体系中的肝毒性

以胆红素代谢过程中UGT1A1酶介导的胆红素葡萄糖醛酸结合环节为切入点,通过考察待测物大黄素对该酶的抑制作用预测其肝毒性。以胆红素为UGT1A1酶底物,于人肝微粒体、大鼠肝微粒体及人重组UGT1A1酶中加入不同浓度胆红素及大黄素,分别以胆红素的总代谢产物生成量对胆红素底物浓度作图,以米氏方程双倒数法绘图,并以不同曲线的斜率对应胆红素底物浓度绘制slop图计算表观抑制常数Ki,考察其对胆红素葡萄糖醛酸结合的抑制作用,预测其肝毒性有无及大小。结果显示大黄素在3个体系中对UGT1A1酶均有中强抑制作用,且抑制类型均为竞争型抑制。HLM,RLM,r UGT1A1体系的Ki分别为(5.400±0.956),(10.020±0.611),(4.850±0.528),P均0.05。同时发现,大黄素对于UGT1A1酶的抑制在大鼠及人之间无明显种属差异。大黄素可通过抑制UGT1A1酶活性导致胆红素代谢异常,从而存在引发肝毒性的潜在危险。该试验所建立的体外研究方法为中药肝毒性药物的筛选提供了新思路和新方法,对中药安全性评价具有借鉴意义。     

何首乌中1个新的二苯乙烯苷类化合物

目的：对何首乌Polygonum multiflorum Thunb.干燥块根的70%乙醇提取物进行化学成分研究。方法：采用DM-8型大孔吸附树脂、十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）、Sephadex LH-20和制备高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,利用质谱和现代波谱学技术对化合物进行结构鉴定。结果：从何首乌70%乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯（1）、顺式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮（2）、反式-大黄素-大黄素甲醚二蒽酮（3）、儿茶素（4）、表儿茶素（5）和(E)-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-α-L-鼠李糖苷（6）。结论：化合物1为新的二苯乙烯苷类化合物,命名为何首乌辛素。化合物2和3均为首次从何首乌中分离得到。     

何首乌中1个新的黄酮二苯乙烯苷

广东德庆为何首乌药材的道地产区之一,该研究综合运用大孔树脂(HP-20)、硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)、制备型HPLC等色谱技术,从广东德庆产何首乌的块根中分离得到了1个化合物,并通过理化常数、波谱技术、计算圆二色谱及化学方法鉴定了其结构,为1个新的黄酮二苯乙烯苷,命名为何首乌黄酮茋B(polygonflavanol B,1)。     

何首乌中提取物二苯乙烯苷神经保护作用的研究进展

目的:综述二苯乙烯苷对神经保护作用的研究进展,为进一步研究奠定基础探索方向。方法采用文献检索、综合分析的方法总结其主要研究成果。结果:经研究TSG不论在体外实验还是体内实验都具有显著的神经保护作用。结论:TSG对临床神经退行性疾病的神经细胞具有显著保护作用,其机制与其抗氧化、抗炎、改善神经递质表达、促进突触可塑性、调节神经营养因子表达等机制密切相关。     

汉黄芩素和汉黄芩苷对UGT1A1体外抑制活性的比较研究

目的:考察人体尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)的活性受汉黄芩素和汉黄芩苷抑制作用的强弱,并通过体内-体外外推(IV-IVE)方法对汉黄芩素在人体内引发草物-药物相互作用(HDI)的风险进行预测。方法:以混合人肝微粒体(HLMs)及重组表达UGT1A1作为酶源,UGT1A1酶的特异性荧光探针N-3-羧丙基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺(NCHN)为底物,对人体UGT1A1酶受汉黄芩素和汉黄芩苷的抑制作用进行评估。通过非线性拟合优度R2判断出抑制类型,求出半数最大抑制浓度IC50和抑制动力学常数Ki,并对汉黄芩素在人体内引发HDI的风险进行预测。结果:汉黄芩素对UGT1A1催化NCHN-O-葡萄糖醛酸化的抑制作用较为强烈,抑制类型为非竞争性抑制,求得的IC50和Ki值分别为2. 53μmol·L-1和1. 60μmol·L-1,而汉黄芩苷对UGT1A1活性的抑制能力较弱。此外,体外-体内外推(IV-IVE)方法的预测结果表明口服汉黄芩素可引起UGT1A1底物血浆药时曲线下面积增加6. 6%～59. 6%。结论:汉黄芩素有可能通过抑制UGT1A1的活性引发临床不良HDI的发生,为合理使用含汉黄芩素和汉黄芩苷的中草药与临床药物提供了理论指导。     

基于Ⅱ相代谢酶探讨大黄中大黄酸潜在肝毒性

以肝脏内Ⅱ相代谢酶UGT1A1介导的胆红素代谢为评价体系,通过考察大黄中主要单体成分大黄酸原型及其代谢产物对UGT1A1酶的抑制作用,初步推测其潜在肝毒性风险。实验采用体外肝微粒体孵育法,首先启动Ⅱ相代谢反应,考察大黄酸原型成分对UGT1A1酶的抑制作用;其次,启动Ⅰ,Ⅱ相代谢反应,考察大黄酸代谢产物的潜在肝毒性。实验发现大黄酸原型及其Ⅱ相代谢产物对UGT1A1酶无明显抑制作用,但其Ⅰ相代谢产物可使UGT1A1酶活性显著降低。结合代谢产物分析,大黄酸Ⅰ相代谢物大黄酸羟基化物及其互变单体具有一定肝毒性风险,其原型及Ⅱ相代谢物大黄酸葡萄糖苷、大黄酸葡萄糖醛酸及大黄酸硫酸化物毒性风险较小。     

何首乌有效成分二苯乙烯苷对Aβ_(25-31)诱导神经干细胞定向分化的影响

目的探讨何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样肽(Aβ25-31)诱导神经干细胞(NSCs)定向分化的影响。方法从孕14d昆明小鼠体外提取并培养NSCs,分别建立起两组分化系统可溶性Aβ25-31体外诱导NSCs损伤的阿尔茨海默病(AD)细胞模型:神经元细胞分化模型M1(Aβ25-312 5μmol/L)、星形胶质细胞分化模型M2(Aβ25-315μmol/L)。TSG低、中、高剂量组(TSG浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L)分别干预模型M1和模型M2,采用WST-1细胞增殖及细胞毒性试剂盒检测各组NSCs细胞活性,采用免疫荧光法及蛋白印迹法观察各组GFAP、Tubulin阳性细胞率及其蛋白表达情况。结果模型M1组和模型M2组细胞活性A值较相应的对照组明显降低(P0.05);TSG中、高剂量组A值明显高于相应的模型组(P0.05)。与相应的对照组比较,模型M1组Tubulin阳性细胞率及其蛋白相对丰度值明显降低,模型M2组GFAP阳性细胞率及其蛋白相对丰度值明显升高(P0.05);与相应的模型组比较,TSG高剂量组Tubulin阳性细胞率及其蛋白相对丰度值均显著升高,GFAP阳性细胞率显著降低(P0.05)。结论高剂量的TSG具有促进Aβ25-31诱导的NSCs向神经元方向分化的趋势,抑制向星形胶质细胞的分化。     

基于对Klotho表达的调控作用探讨何首乌提取物二苯乙烯苷对慢性肾衰竭大鼠高脂血症的影响

目的:探讨何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对慢性肾衰竭大鼠肾脏Klotho蛋白表达及血脂变化的影响。方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG组[20 mg/(kg·d)]、缬沙坦组[55 mg/(kg·d)],每组10只。采用5/6肾脏切除法建立慢性肾衰竭模型,分别灌胃给药4周,假手术组与模型组给予等剂量饮用水灌胃。全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),及24 h尿蛋白定量(24 hUP),计算三酰甘油与高密度脂蛋白胆固醇比值(TG/HDL-C)。肾组织HE染色,光镜观察肾脏病理改变;免疫组化及Western blot检测肾组织Klotho蛋白及TGF-β1(转化生长因子-β1)表达。结果:与假手术组相比,模型组SCr、BUN及24 hUP水平均升高(均P<0.01);与模型组比较,TSG和缬沙坦组以上指标均下降(P<0.05或P<0.01),两给药组之间无明显差异(P>0.05)。模型组TC、TG、LDL-C、TG/HDL-C均...     

基于PXR/CAR 调控通路探讨士的宁对UGT1A4 的作用

目的研究士的宁对人肝细胞HL-7702 中葡萄糖醛酸转移酶1A4（UGT1A4）表达的影响及其与孕烷X 受 体（PXR）/组成型雄烷受体（CAR）调控通路的关系,明确UGT1A4 与士的宁的关系及作用机制,为进一步研究 士的宁代谢及合成或改造相似结构药物提供一定的实验依据。方法以人肝细胞株HL-7702 为研究对象,不 同浓度的士的宁（10、20、40 pmol·L-1）干预24 h 后,RT-qPCR 和Western Blot 法检测士的宁对HL-7702 细胞 中UGT1A4、PXR 和CAR mRNA 和蛋白表达水平的影响。通过双荧光素酶报告基因法以及脂质体瞬时转染方 法,分析UGT1A4 报告基因（来自于瞬时共转染hCAR 或者是hPXR 之后的HL-7702 细胞）的活性在各浓度士 的宁（10、20、40 pmol·L-1）干预下的影响。利用siRNA 干扰技术,探究士的宁对hPXR 基因沉默后HL-7702 细胞中UGT1A4 蛋白表达水平的影响。结果与对照组比,20、40 pmol·L-1 士的宁干预后明显上调UGT1A4、 PXR 的mRNA 和蛋白的表达水平,呈浓度依赖性（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）;但对CAR mRNA 和蛋白的 表达无明显的影响,差异无统计学意义（P＞0.05）。在瞬时共转染hPXR 的HL-7702 细胞中,20、40 pmol·L-1 士的宁干预24 h 后能明显上调PXR 介导UGT1A4 的转录活性,呈浓度依赖性（P＜0.01,P＜0.001）;在瞬时共 转染hCAR 的HL-7702 细胞中,各浓度士的宁干预24 h 后对CAR 介导的UGT1A4 转录活性无明显影响,与 对照组比,差异无统计学意义（P＞0.05）。士的宁对沉默hPXR 的HL-7702 细胞中UGT1A4 蛋白的诱导作用明 显减弱,与对照组比,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论士的宁对HL-7702 中UGT1A4 和PXR 在转录和 蛋白水平有明显的上调作用,对CAR 在转录和蛋白水平没有明显影响。士的宁对HL-7702 细胞中UGT1A4 的 诱导作用主要通过PXR 调控通路实现。     

Cocktail法评价注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A的诱导作用

目的:研究注射用益气复脉(冻干)Yi Qi Fu Mai Injection(YQFM)(Lyophilized)对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A的诱导作用。方法:将wistar大鼠分为生理盐水对照组,苯巴比妥钠诱导组,YQFM组,连续给药7天后处死,制备肝微粒体。采用Cocktail法,将特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、睾酮(CYP3A)与肝微粒体共孵育,采用高效液相色谱测定孵育所得代谢产物对乙酰氨基酚和6β-羟基睾酮的生成速率,来评价YQFM对CYP1A2、CYP3A的诱导作用。结果:空白对照组、诱导组和YQFM组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(18.04±1.00)、(43.07±2.90)、(27.6±4.5)ng.(mg pro-tein)-1.min-1,6β-羟基睾酮的生成速率分别为(15.79±1.43)、(40.86±3.32)、(32.8±3.67)ng.(mg protein)-1.min-1。结论:YQFM对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A有诱导作用。     

辣椒辣素对仓鼠肝微粒体中杂环胺代谢及细胞色素P_(450)1A2活性的影响

文献报道辣椒辣素(8-甲基-N-香草醛-6-壬烯胺)可改变一些致癌物的代谢,调整它们与细胞DNA之间的反应。杂环胺(HCAs)是一类由蛋白质热解生成的化合物,大多可致肝癌发生。为观察辣椒辣素对五种杂环胺类诱变剂即2-氨基-3-甲基咪唑[4,5-f]喹啉(IQ)、2-氨基-3,8-二甲基咪唑[4,5-f]喹(口恶)啉(MeIQx)、3-氨基-1-甲基-5H-吡啶[4,3-b]吲哚(Trp-P-2)、1-氨基-6-甲基二吡啶[1,2-     

二苯乙烯苷、远志皂苷元2∶1配伍抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用的最适浓度研究

目的:研究不同浓度下二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞的作用,以筛选最适配伍浓度。方法:采用MTT比色法筛选Aβ25-35最适造模浓度,在所得最适Aβ25-35浓度基础上采用MTT比色法筛选TSG-TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的最适浓度。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P0.01);与模型组比较,合用4组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN)的细胞存活率最高(P0.01)。结论:在本实验所选取的浓度范围内,TSG与TEN 2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞以"100μmol/L TSG+50μmol/L TEN"合用浓度为最佳。     

人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用

目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用。方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用。结果:由顺铂诱导的细胞活力降低,再使用FBG提取物和人参皂苷20(S)-Rg3依赖剂量后明显恢复。用FBG提取物或人参皂苷20(S)-Rg3处理后会降低顺铂诱导升高与磷酸化c-Jun N-末端激酶(JNK),p53和裂解的半胱天冬酶-3升高的蛋白。通过用FBG和人参皂苷20(S)-Rg3的共同处理,由于顺铂的诱导导致凋亡LLC-PK1细胞升高的百分比显著降低。结论:人参皂苷20(s)-Rg3可改善LLC-PK1的细胞毒性,人参皂苷20(S)-RG3可能是通过阻断JNK-P53-caspase-3信号级联反应来介导这种作用的重要组成部分。     

注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体CYP1A2,CYP3A4活性的影响研究

目的:研究注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP1A2,CYP3A4)酶活性的影响效应.方法:实验设空白对照组(生理盐水)、诱导组(苯巴比妥)和益气复脉低、中、高剂量组,连续给药7 d.采用高效液相色谱法检测,以探针药非那西丁和咪达唑仑经大鼠肝微粒体孵育后转化的代谢产物对乙酰氨基酚和1'-羟基咪达唑仑的生成速率来判定CYP1A2,CYP3A4酶的活性.结果:空白对照组、诱导组和益气复脉低、中、高剂量组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(1.304 ±0.205),(8.555±1.193),(2.927±0.576),(3.675±0.444),(3.024±0.552)ng·mg-1·min-1,1-羟基咪达唑仑的生成速率分别为(9.100±2.235),(47.413±4.320),(38.649 ±5.043),(36.282±3.254),(33.764±5.128)ng·mg-1·min-1.结论:注射用益气复脉对大鼠CYP1A2,CYP3A4酶的活性具有诱导作用.     

薏苡仁注射液(康莱特)联合顺铂对人肺腺癌细胞A549抑制作用及机制

目的:探讨薏苡仁注射液(康莱特)联合化疗药物顺铂(CDDP)对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制.方法:体外培养人肺腺癌细胞系A549并以康莱特、顺铂进行处理,SRB法检测药物对各组细胞的抑制率;逆转录-聚合酶链反应法检测多药耐药因子MDR1、Bcl-2和Bax mRNA在各组中表达情况;Western blot法检测P-gp、Bcl-2、Bax蛋白水平表达;同时检测康莱特对正常细胞的作用.将各组结果进行比较.结果:康莱特组A549细胞存活率较对照组明显降低,康莱特联合顺铂导致细胞存活率进一步下降(均P<0.05),而康莱特对正常细胞无明显抑制作用(P>0.05);康莱特导致A549细胞MDR1和Bcl-2 mRNA水平、蛋白水平均较空白对照组降低(均P<0.05),而Bax mRNA和蛋白水平则升高(均P<0.05);康莱特与顺铂联合作用于A549细胞时这一变化更为显著(均P<0.01);康莱特对正常细胞系的耐药因子则无明显作用(均P>0.05).结论:康莱特可抑制肺腺癌细胞生长,该药具有明显的逆转肺腺癌多药耐药性的作用,与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.     

哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P0.01),细胞内ROS水平显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P0.01),Bax蛋白表达显著上调(P0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。     

芍药苷对纤维状Aβ_(1-42)介导的血脑屏障体外模型损伤的影响

目的:探究芍药苷对纤维状Aβ1-42介导的血脑屏障体外模型损伤的影响。方法:(1)利用MTT法检测芍药苷对Aβ1-42介导的b End.3细胞活力的影响;(2)利用免疫组化法鉴定原代提取的星形胶质细胞;(3)利用b End.3细胞与原代星形胶质细胞体外非接触式体外共培养模型,通过测定各组透过共培养模型的荧光素钠强度,评价芍药苷对纤维状Aβ1-42介导的血脑屏障体外模型通透性的影响。结果:与模型组相比,芍药苷低、中、高剂量组能显著提高b End.3细胞活性,差异均具有统计学意义(P0.05),其中低、中剂量组的保护作用与芍药苷浓度成正相关,而高剂量组有所下降;芍药苷低、中、高剂量组均能降低血脑屏障的通透性,而低、中剂量组与模型组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷对Aβ1-42诱导的血脑屏障通透性增加具有明显的抑制作用。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨黄芪甲苷对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对核转录因子NF-E2相关因子2 (Nrf2)/血红素氧合酶-1 (HO-1)通路的调控作用及对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)的保护作用。方法:将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组5组,每组10只。除对照组外,其余各组用顺铂按7 mg/kg的剂量单次腹腔注射建立AKI模型。黄芪甲苷低、中、高剂量组分别按5、10、20 mg/kg的剂量给予黄芪甲苷注射液,模型组和对照组给予生理盐水。用HE染色观察肾脏组织病理学改变;测定血清中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;测定肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量;分别用蛋白质印迹法(Western blot)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肾脏组织病理病变明显,可见肾小管坏死和退行性改变;与模型组比较,黄芪甲苷低、中、高组大鼠肾脏组织病理病变程度减轻,其中黄芪甲苷高剂量组最为明显。与对照组比较,模型组血清中SCr和BUN含量显著升高(P<0.05),肾组织...