吲哚胺2,3-双加氧酶1抑制剂的研究进展

吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)是介导色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶。IDO1在肿瘤细胞和抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC)中存在过度表达现象,通过色氨酸的消耗及其代谢产物的聚积抑制局部免疫应答,使肿瘤细胞逃避免疫系统的监测,这与多数肿瘤治疗的不良预后有关。因此,IDO1是肿瘤免疫疗法的重要靶点。目前有多种骨架的IDO1抑制剂正在研究当中,其中3个已经进入了临床研究阶段。本文介绍了IDO1在肿瘤免疫耐受中的作用,并按结构分类,综述了IDO1抑制剂的研究进展。     

吲哚胺2,3-双加氧酶与白血病的关系研究

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,其表达和活化可以被干扰素γ强烈诱导。通过催化色氨酸降解,使表达IDO的肿瘤细胞周围形成低色氨酸环境,由于色氨酸是体内必需氨基酸,缺乏色氨酸时蛋白质合成下降,外周T淋巴细胞的增殖受到抑制。目前大量研究表明IDO在白血病细胞中较高表达,抑制T细胞的增生和T细胞介导的免疫反应,使T细胞活化信号转导受阻,诱导白血病细胞发生免疫逃逸。     

吲哚胺2,3双加氧酶在肿瘤局部免疫耐受中的作用

吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是人体内肝外色氨酸代谢限速酶,最近研究表明,在肿瘤微环境内产生免疫耐受的机制中,多种细胞成分通过高表达IDO,导致肿瘤局部色氨酸代谢异常及调节性T细胞形成,对T细胞的增殖、分化和活性产生影响,进而介导肿瘤局部的T细胞免疫耐受,在恶性肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥了重要作用。现就吲哚胺2,3双加氧酶在肿瘤局部免疫耐受中的作用作一综述。     

吲哚胺2,3二氧化酶与肿瘤免疫耐受

肿瘤免疫耐受是一个获得性免疫应答的过程,许多机制参与调节。吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)是体内肝外色氨酸沿犬尿氨酸代谢的限速酶。其通过诱导"色氨酸删除"环境、色氨酸代谢产物的细胞毒性作用和调节Tregs等抑制T淋巴细胞增殖、活化,共同诱导肿瘤免疫耐受。抑制IDO可为今后肿瘤临床治疗提供新思路和方法。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶在非小细胞肺癌中的表达

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)在非小细胞肺癌中的表达及意义.方法 收集38例非小细胞肺癌组织和10例癌旁正常肺组织.用半定量免疫组织化学方法 检测肺组织中IDO蛋白阳性率,实时荧光定量PCR检测肺组织中IDO mRNA表达水平.结果肺癌组IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);而肺癌组按不同病理分型中,腺癌组和鳞癌组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肺癌组按不同分化程度分为高、中、低3组,经统计学分析,3组中IDO阳性表达率和IDO mRNA表达水平差异均有统计学意义(均P＜0.05).肺癌组按有和无淋巴结转移分组比较,IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平差异也均有统计学意义(均P＜0.05).结论 IDO在非小细胞肺癌中呈高表达,与分化程度及有无淋巴结转移有关,但与肺癌病理分型无关.     

吲哚胺-2,3-双加氧酶活性与非小细胞肺癌进展的关系

目的 吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)及其介导的色氨酸(tryptophan,Trp)-犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)代谢途径参与了肿瘤免疫逃逸.本研究探讨IDO活性与非小细胞肺癌(NSCLC)临床特征的关系.方法 利用高效液相色谱技术同期检测87例NSCLC患者、41例肺良性肿瘤患者及30例健康对照组血清中Kyn 与Trp浓度,IDO活性以血清中两者比值Kyn/Trp表示.结果 与30例健康对照组相比,NSCLC患者血清Trp水平明显降低 [(36.91 ±9.26)μmol/L vs(44.37±10.18)μmol/L,P＜0.01],其降低程度在NSCLC患者T4 [(35.51±9.12)μmol/L]及N3[(34.58±10.53)μmol/L] 亚组中尤为明显.但肺良性肿瘤组与健康对照组比较,Trp水平无明显差异.NSCLC组代表IDO活性的Kyn/Trp比值较健康对照组明显升高[(49.62 ±14.76)vs(30.32 ±11.43),P＜0.01],其差异有统计学意义.在NSCLC各亚组中,M1亚组的IDO活性程度最高,达到了(55.06±18.54).NSCLC组IDO活性在肿瘤切除术后1周时明显减弱.结论 NSCLC患者体内IDO活性明显增强,且与临床分期呈正相关.提示IDO可能参与了NSCLC的进展,代表其活性的Kyn/Trp 比值可作为判断NSCLC是否有远处转移的潜在指标.     

吲哚胺2,3双加氧酶与乙肝病毒不同感染状态T淋巴细胞亚群及病毒载量的相关性研究

目的探讨乙肝病毒(HBV)不同感染状态下,吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达水平及其与T淋巴细胞亚群及病毒载量的相关性。方法检测受检者外周静脉血IDO mRNA、IDO蛋白、IDO活性,T淋巴细胞亚群及病毒载量(对照组除外);进行各组间均数比较及相关性分析。结果 IDO mRNA、IDO蛋白及IDO活性从高到低依次为急性乙型肝炎组(acute hepatitis B,AHB)、肝硬化组(HBV-related liver cirrhosis,LC)、慢性乙型肝炎组(chronic hepatitis B,CHB)、肝癌组(HBV-related hepatocellularcar cinoma,HCC)、对照组。HCC组及对照组均明显低于其他3组(P0.01),其余各组间两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。CD3+、CD4+T淋巴细胞在AHB组最高,对照组次之,LC组最低;AHB组、对照组及CHB组均明显高于LC组(P0.05);AHB组、对照组明显高于HCC组(P0.05)。CD8+T淋巴细胞在对照组最高,AHB组次之,LC组最低;但仅AHB组、对照组明显高于LC组(P0.05)。AHB组CD4+/CD8+明显高于其他组(P0.01)。CHB及LC组病毒载量最高,均明显高于HCC及AHB组(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞与病毒载量、IDO蛋白及IDO活性均呈负相关,CD8+T淋巴细胞与I-DO mRNA呈负相关(r=-0.287,P=0.039);CD4+/CD8+与IDO蛋白及IDO活性均呈正相关(r=0.470,P=0.000;r=0.285,P=0.040),病毒载量与IDO mRNA、IDO蛋白及IDO活性均呈正相关(r=0.530,P=0.001;r=0.416,P=0.002;r=0.649,P=0.000)。结论 HBV感染者IDO表达明显增强,与病毒载量呈正相关,与T淋巴细胞呈负相关,其早期升高有利于病毒清除,但持续升高会导致HBV特异性T淋巴细胞功能抑制,使HBV慢性化。     

鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

 目的  建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶 (mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO) 活性检测方法。方法 利用基因工程方法表达纯化重组mIDO (recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌 (Lewis lung cancer,LLC) 细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸 (L-1-methyl tryptophan,L-1-MT) 在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO （human IDO,hIDO）的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度 (IC50) 值。 结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。 结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。     

人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

 目的  构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2 (human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白。方法  采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性。结果  重组质粒经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1%,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L。结论  成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高。     

吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶与肾细胞癌预后的预测(英文)

目的:探讨吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶(IDO,一种具有免疫调节作用的酶)在肾细胞癌(RCC)患者中的作用。方法:在中南大学湘雅二医院诊断为RCC的患者40例,全部接受肾切除术。肾组织的免疫病理检查采用半定量方法评估。实时定量PCR(RT-qPCR)检测RCC与非肾癌肾组织IDO的mRNA水平。免疫组织化学的方法检测血管内皮细胞的IDO蛋白表达。同时依据IDO的mRNA水平计算出患者的Kaplan-Meier生存曲线。结果:RCC肿瘤组织中IDO mRNA的表达明显高于正常肾组织(P<0.001)。在RCC患者中,IDO高表达的患者比那些低IDO表达的患者具有明显较长的生存时间(P=0.01)。统计学分析显示:RCC肿瘤组织中IDO的水平和肿瘤增殖标志物Ki67之间呈负相关,IDO水平高的患者Ki67水平低,反之亦然(P<0.01)。结论:IDO可能作为预测RCC患者预后的生物标志物。     

吲哚胺2,3-双加氧酶在新月体肾炎肾组织中的表达变化

目的 检测新月体肾炎患者肾组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达情况及其与肾组织浸润炎细胞的增殖和肾小管-间质病理损害程度之间的关系.方法 采用免疫组织化学染色法检测正常肾组织和新月体肾炎患者肾组织IDO的表达情况,并进一步分析其表达与肾间质浸润PCNA阳性炎细胞数及肾小管-间质病理损害程度之间的相关关系.结果 正常肾组织未检测到IDO表达,而在新月体肾炎患者肾小管上皮细胞IDO的表达显著上调,并且新月体肾炎肾小管上皮细胞IDO的表达强度与肾小管-间质PCNA阳性浸润细胞数及肾小管-间质病理损害程度显著负相关.结论 IDO在新月体肾炎肾小管上皮细胞中高表达并与肾小管-间质炎细胞增殖及小管-间质病理损害相关,提示IDO可能通过抑制炎细胞增殖活性参与新月体肾炎肾小管-间质病理损害过程.     

吲哚胺2，3-双加氧酶及IL-12/IL-10细胞因子平衡与妊娠免疫耐受

目的:观察妊娠不同时期胎盘来源的单核-巨噬细胞吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达及细胞因子白细胞介素(IL)-10?IL-12的分泌情况,探讨其在妊娠免疫耐受中的可能作用?方法:机械分离中期妊娠(21周 ± 3天,19例)及足月妊娠(39周 ± 5天,25例)胎盘中的单核-巨噬细胞,ELISA法检测其分泌IL-10?IL-12的水平;RT-PCR及Western blot法分别检测IDO mRNA及蛋白水平的表达;以CCK-8法检测其激发同种异体T细胞增殖能力的不同?结果:足月妊娠较中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞产生更多的IL-12,但IL-10及IDO的表达较之明显减低;并且,足月妊娠较中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力更强?结论:中期及足月妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞参与维持妊娠免疫耐受及分娩发动可能与其调节IL-12/IL-10细胞因子平衡及影响IDO的表达有关,但IL-12/IL-10细胞因子平衡与单核-巨噬细胞IDO表达的关系还有待进一步研究?     

小鼠IDO基因重组腺病毒载体的构建表达和鉴定

目的 构建携带小鼠IDO基因的重组腺病毒载体,以期进一步进行研究其免疫学效应.方法 酶切含有小鼠全长IDOcDNA的PCOUS-2质粒,亚克隆至穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183细菌中和AdEasy-1进行同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,脂质体法转染AD-293细胞进行包装,扩增,氯化铯密度梯度离心纯化病毒并检测其滴度.RT-PCR和荧光显微镜鉴定和检测重组腺病毒转染AD-293细胞后IDO的表达,同时进行野生型腺病毒的检测.结果 经酶切及测序证实IDO基因重组腺病毒载体构建成功,RT-PCR检测到转染后AD-293细胞内IDO的表达,且无野生型腺病毒的产生.结论 成功构建了含小鼠IDO基因的重组腺病毒载体,为探讨IDO的生物学功能奠定了基础.     

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的色胺酮类抑制剂筛选及其体外抗肿瘤作用

 目的  评价色胺酮衍生物吲哚胺2,3-双加氧酶 (indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的抑制活性,并研究其作为 IDO 抑制剂的抗肿瘤作用。方法  采用基因工程手段表达、纯化重组人 IDO (rhIDO),建立 IDO 活性检测体系;以色胺酮衍生物作为对象,进行 IDO 抑制活性初筛,对抑制类型、半数抑制浓度以及抑制常数进行测定;构建高表达人 IDO 的 pcDNA3.1(+) hIDO 转染 HEK 293 细胞,评价色胺酮衍生物在细胞水平上的 IDO 抑制活性;采用 MTT 比色法考察色胺酮衍生物3对人非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用。结果  6个被测色胺酮衍生物均具有IDO抑制活性,且细胞水平上的抑制效力高于酶活水平,抑制效力均优于目前通用的IDO抑制剂1 甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)。色胺酮衍生物 3 作为最强的 IDO 抑制剂,其Ki值为 0.161 μmol/L。MTT 实验结果显示,色胺酮衍生物3 显著抑制 A549 细胞生长,IC50 为 8.77 μmol/L。结论  色胺酮衍生物是一类新型高效的 IDO 抑制剂,在体外对 A549 细胞具有较强的抗肿瘤活性。     

Molecular cloning and characterization of porcine indoleamine 2, 3-dioxygenase and its expression in various tissues

In order to confirm the existence of indoleamine 2,3-dioxygenase(IDO) gene in swine,and to clone the novel gene followed by the molecule structure properties and expression pattern analysis,the porcine mRNA sequences homologous to human IDO were obtained from GenBank database by bioinformatics method.By using RT-PCR,the IDO gene was cloned from porcine endothelial cell line and the accuracy of the nucleic acid sequence was confirmed,and the expression pattern of the gene was detected.The three-dimensional structure model of porcine IDO was built referring to the tertiary structure of human IDO using biological sequence analysis software and database.The results showed that the porcine IDO was identified by sequencing.The nucleotide sequences were confirmed as a novel gene after submitted to Genbank.Porcine IDO was expressed in the lung,thymus,epididymis and anterior chamber with a basic level,however in peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) the IDO gene was highly expressed.The three-dimensional structure model of porcine IDO was similar to that of human IDO.It was suggested that identification of the structure information of porcine IDO is essential to further investigate the immunologic function of the gene.Study of IDO on NK cells-mediated xenograft rejection will be a novel therapeutic target for the development of xenotransplantation.     

Indoleamine 2,3-dioxygenase in tumor induced tolerance

Objective To review the recent studies about the role of indoleamine 2,3-dioxygenase （IDO） in tumor induced tolerance. Data sources Published articles （1978-2009） on IDO and tumor induced tolerance were selected from Medline. Study selection Articles selected were relevant to development of IDO in tumor induced tolerance. Of all originally identified articles, 50 specially addressed the stated purpose. Results Recent work has revealed IDO at high levels in tumors and in tumor-draining lymph nodes and a close relationship between IDO activity and the regulatory T cells. Conclusion Up-regulation of IDO is proven to be a mechanism of acquired tolerance in tumors, in which the closely coupled positive feedback system between IDO and reclulatorv T cells may be considered to play an important role.     

香菇多糖对吲哚胺2-3双加氧酶表达的调控作用及其与原发性乳腺癌细胞增殖关系的探讨

目的观察香菇多糖对肝癌患者肿瘤细胞中吲哚胺2-3双加氧酶的转录调控的影响,并探讨该影响对于原发性乳腺癌细胞增殖的影响。方法收集我院手术切除的原发性乳腺癌组织100例,随机分为两组,不同浓度（10、20、40 uM）香菇多糖组和空白对照组。采用MTT法检测香菇多糖对肿瘤细胞增殖的影响。采用RT-PCR法检测香菇多糖对于肿瘤细胞中吲哚胺2-3双加氧酶编码基因转录的影响。采用Western Blot法检测香菇多糖对于上述肿瘤组织中吲哚胺2-3双加氧酶表达的影响。结果香菇多糖的处理能够明显的抑制乳腺癌细胞的增殖,10、20、40 uM香菇多糖对细胞的抑制率分别为（6.4&#177;1.19）%,（10.3&#177;1.67）%,（23.5&#177;3.79）%。RT-PCR结果显示,香菇多糖处理细胞可以抑制肿瘤细胞中吲哚胺2-3双加氧酶编码基因的表达,40 uM香菇多糖处理组细胞中目的基因转录表达水平最低。Western blot检测结果显示,香菇多糖作用肿瘤细胞后,吲哚胺2-3双加氧酶表达呈浓度依赖性下调趋势。结论香菇多糖能够对吲哚胺2-3双加氧酶的基因转录以及蛋白表达发挥抑制作用,且该作用参与了香菇多糖抑制乳腺癌细胞增殖的过程。