和厚朴酚抗颗粒物2.5诱导哮喘小鼠的肺损伤及其机制

目的：探究和厚朴酚对颗粒物2.5(particulate matt er 2.5,PM2.5)诱导的哮喘小鼠肺损伤的治疗作用及其可能 的作用机制。方法：32只BALB/C小鼠随机分为生理盐水组、模型组、PM2.5组和厚朴酚组,每组8只。使用卵清蛋白 诱导哮喘小鼠模型,分别采用生理盐水、卵清蛋白、PM2.5和和厚朴酚处理,收集各组小鼠肺组织和血清,检测小 鼠肺组织的病理损伤状态、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和血清中炎性因子的表达水平,以 及肺组织中Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、维甲酸相关核孤儿受体 γt(retinoid-related orphan receptor gamma-t,RORγt)和叉头状转录蛋白3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。 结果：1)模型组小鼠肺组织出现明显病理损伤和炎性状态,提示哮喘模型构建成功。PM2.5能够加重哮喘小鼠的肺组 织病理损伤和炎性状态;2)与PM2.5组比较,和厚朴酚组小鼠肺组织的病理损伤状态得到缓解,BALF中炎性细胞减 少,炎性因子水平降低(均P<0.05)。3)与PM2.5组比较,和厚朴酚组小鼠肺组织中TLR4,NF-κB(p-p65)和RORγt的表达 减少,Foxp3表达水平增加,且RORγt/Foxp3比值减少(均P<0.05)。结论：和厚朴酚能够抵抗PM2.5诱导哮喘小鼠的肺 损伤,这一方面可能是通过抑制TLR4-NF-κB信号通路介导的炎症反应,另一方面可能是通过影响T辅助细胞17/调节 性T细胞平衡的方式来实现的。     

烟草烟雾暴露对哮喘小鼠肺组织NF-κB p65表达的影响

目的 探讨烟草烟雾暴露对支气管哮喘小鼠气道炎性细胞浸润及肺组织核转录因子-κB p65（NF-κB p65）表达的影响。方法 将雌性无特定病原体级（specific pathogen free, SPF）级BALB/c纯系小白鼠40只随机分为4组,即正常对照组、哮喘组、烟草烟雾暴露组和烟草烟雾暴露+哮喘组,每组各10只。正常对照组给予雾化吸入生理盐水,哮喘组给予雾化吸入卵蛋白（OVA）致敏从而复制模型,烟草烟雾暴露组则在正常对照组基础上予以烟草烟雾暴露1 h,而烟草烟雾暴露+哮喘模型组则在哮喘模型组的基础上给予同样的烟草烟雾暴露1 h。28 d后采集支气管肺泡灌洗液（BALF）,测定BALF中白细胞(WBC)、嗜酸性粒细胞（EOS）及中性粒细胞（NEU)计数。用蛋白质免疫印迹法（Western-blot）检测肺组织NF-κB p65蛋白表达水平。结果 哮喘组、烟草烟雾暴露+哮喘组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞均高于对照组及烟草烟雾暴露组,烟草烟雾暴露+哮喘组BALF中白细胞总数和中性粒细胞计数高于哮喘组,嗜酸粒细胞计数低于哮喘组（P<0.05);哮喘组、烟草烟雾暴露+哮喘组小鼠肺组织NF-κB p65蛋白表达均上升,但烟草烟雾暴露+哮喘组小鼠升高更明显,与哮喘组相比差异有统计学意义（P<0.05)。烟草烟雾暴露+哮喘组白细胞计数与肺组织NF-κB p65表达水平呈正相关（r=0.781,P=0.008）。结论 烟草烟雾暴露可能通过上调NF-κB p65蛋白表达,促进支气管哮喘气道炎性细胞浸润。     

TLR信号通路关键因子在肺腺癌组织中的表达与临床意义

目的研究Toll样受体（Toll-likereceptors,TLR）介导的信号通路关键因子：Toll样受体4（TLR4）、核因子资B（NF-资B）、髓样分化因子88（MyD88）、白介素-1受体相关激酶-1（IRAK1）、IRAK4以及肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）在肺腺癌组织中的表达与临床意义。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR法检测92例肺腺癌组织和30例正常肺组织中TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4、TRAF6的表达情况并作比较分析。结果肺腺癌组织中TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4蛋白的表达水平均明显高于正常肺组织（均P＜0.05）。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度患者TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4蛋白比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）,而不同程度淋巴结转移、临床分期、远处转移患者上述蛋白比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期、远处转移患者TRAF6蛋白比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。肺腺癌组织TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4mRNA的表达水平均明显高于正常肺组织（均P＜0.05）,而TRAF6mRNA的表达水平与正常肺组织比较无统计学差异（P＞0.05）。结论TLR4、NF-资B、MyD88、IRAK1、IRAK4在肺腺癌中的高表达与肺腺癌的发生、发展及预后密切相关。     

RNA干扰SDF-1表达对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨RNA干扰基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)基因表达对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:清洁级雌性昆明小鼠40只,随机分为对照组、哮喘组、干扰组和空载组(n=10)。用卵白蛋白(ovalbum,OVA)致敏并激发建立支气管哮喘小鼠模型。干扰组在每次致敏前及激发前1天经鼻滴入Ad-sh SDF-1,空载组经鼻滴入Ad-GFP。用免疫组化检测小鼠肺组织中SDF-1的表达,用HE染色观察小鼠肺组织结构改变,在Wright-Giemsa染色后对肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎性细胞进行分类计数。结果:与对照组比较,哮喘组小鼠肺组织中SDF-1的表达升高,BALF中炎性细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞计数均升高;与哮喘组比较,干扰组小鼠肺组织中SDF-1的表达降低,BALF中炎性细胞总数及分类计数均降低,差异有统计学意义;与哮喘组比较,空载组小鼠肺组织中SDF-1的表达、BALF中炎性细胞总数及分类计数差异均无统计学差异。结论:Ad-sh SDF-1气道局部滴入可有效干扰哮喘小鼠肺组织中SDF-1的表达及减轻哮喘小鼠的气道炎症。     

连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效

 目的  评价连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效。方法  将50只SPF级BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、连花高剂量组、连花低剂量组,每组10只。采用卵清白蛋白＋氢氧化铝致敏,并雾化激发复制小鼠支气管哮喘模型,给药组于每次激发前30 min给药,共计7次。采用特殊气道阻力值评估气道高反应性,肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞分类计数评价各组小鼠气道炎症性改变,ELISA法和磁性Luminex分析法检测BALF和血清中IL-4、IL-13、INF-γ的表达。结果  地塞米松组和连花高剂量组能显著降低气道阻力(P<0.05)。地塞米松组和连花高、低剂量组BALF中的各类炎性细胞数量和IL 13的表达均明显减少(P<0.05)。血清IL-13的表达在地塞米松组明显降低(P<0.05),但在连花高、低剂量组中没有变化。各组小鼠BALF和血清中IL-4和INF-γ的表达没有统计学差异。结论  连花定喘片可缓解哮喘症状,可能与其降低Th2型细胞因子IL-13的含量,从而减轻气道炎症有关。     

流感嗜血杆菌下气道定植对哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达及气道重塑的影响

目的 检测下呼吸道流感嗜血杆菌定植对哮喘小鼠TH17细胞的表达、气道炎症及对气道重塑的影响。方法 用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）致敏和激发制备慢性哮喘小鼠模型,同时制作流感嗜血杆菌琼脂糖菌珠,在气道注菌之后的第1、7、21天处理小鼠,观察肺组织病理变化,流式细胞仪检测肺组织TH17细胞表达、测定CD4⁺T细胞TLR4的表达,并进行气道细菌培养和肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞计数。结果 与正常组和哮喘非注菌组相比,哮喘注菌组有明显的哮喘症状和感染症状;病理学结果显示哮喘组气道黏膜水肿,管壁增厚,大量的炎性细胞浸润,注菌后炎症加重。哮喘小鼠气道注菌之后,随着时间的延长,气管壁厚度（WAt/Pbm）和平滑肌厚度（WAm/Pbm）均显著高于哮喘非注菌组。细菌学培养结果显示正常组第1、7天气管流感嗜血杆菌培养阳性,第21天阴性;哮喘组注菌后1、7、21天气管流感嗜血杆菌检测均阳性。流式细胞仪检测小鼠肺组织TLR4和TH17在CD4⁺T细胞的表达,哮喘组的TLR4和TH17表达均显著高于正常组,注菌之后二者表达显著增加,观察指标在哮喘注菌组变化更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。BALF细胞计数结果显示,哮喘组BALF中细胞数明显高于正常组,注菌后细胞数进一步增多。相关性分析发现,哮喘组小鼠肺组织中CD4⁺T细胞TLR4的表达与BALF细胞总数呈正相关（r=0.746,P<0.05）,TH17表达与CD4⁺T细胞TLR4的表达、气道WAt/Pbm、WAm/Pbm和BALF细胞总数呈正相关（分别r=0.612、0.611、0.537、0.752,P<0.05）。结论 流感嗜血杆菌下呼吸道定植可以通过激活TLR4,增加哮喘小鼠肺组织TH17细胞表达,加重哮喘气道炎症和气道重塑,可能是难治性哮喘预后的重要机制之一。     

吸入不同浓度NO对脂多糖所致大鼠急性肺损伤TLR4表达的影响

目的 观察正常大鼠气道Toll样受体4(TLR4)的分布及脂多糖(LPS)对大鼠气道TLR4分布的影响,以及吸入不同浓度NO对TLR4表达的影响.方法 气管内滴注LPS复制大鼠急性肺损伤模型,观察6 h后的病理变化,免疫组化法观察气道内TLR4的变化,以及分别吸入10×10-6,20×10-6,40×10-6, 100×10-6mg/L的NO对大鼠气道内TLR4 mRNA表达的影响.结果 免疫组化和实时荧光定量PCR结果显示TLR4在正常组大鼠气道内有广泛分布和表达.LPS急性肺损伤组大鼠病理检查显示支气管、肺内炎症程度均明显高于正常组,免疫组化及荧光定量PCR结果显示主支气管和肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达明显升高.NO 20×10-6mg/L组病理检查结果显示气管和主支气管的炎症程度明显减轻,免疫组化及荧光定量PCR结果提示肺内细支气管上皮细胞内TLR4的表达量较LPS损伤组明显降低.结论 TLR4在大鼠气道内广泛分布,LPS刺激可使TLR4的表达增加,吸入适当浓度NO可降低由LPS引起的肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达的升高.     

五倍子酯提物抗流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤作用机制

目的探索Toll样受体4(TLR4)在A型流感病毒所致小鼠急性肺损伤中的作用,进一步探讨五倍子酯提物的干预机制。方法实验设正常组、模型组、五倍子酯提物组和奥司他韦组,以流感病毒小鼠肺适应株A/PR/8/34滴鼻感染C57BL小鼠,建立小鼠急性肺损伤模型。病毒感染后第1天开始予以相应干预,共6 d。分别于第2、4、6天处理动物。观察肺组织大体解剖学变化,肺组织切片病理学变化,ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,Western blot法检测肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6的蛋白表达。结果流感病毒感染小鼠后,模型组小鼠肺脏充血、水肿,外观呈暗褐色,肺泡间质水肿、肺泡腔变小,内有大量炎细胞浸润,肺泡灌洗液中IL-6、IL-10水平及肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6蛋白表达升高,与正常组相比,差异有显著统计学意义(P0.01)。与模型组相比,五倍子酯提物组能减轻肺部病变,降低肺泡灌洗液中IL-6、IL-10水平及肺组织中TLR4、MyD88、TRAF6蛋白表达水平,差异有显著统计学意义(P0.01)。结论五倍子酯提物可通过抑制TLR4的活化及下游MyD88依赖的转导路径,减少炎性因子的转录生成,减轻肺部炎症,减缓急性肺损伤进程。     

慢性哮喘小鼠肺组织巨噬细胞移动抑制因子的表达及地塞米松对其的调节

[ 摘要] 目的 研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在慢性哮喘小鼠肺组织的表达, 探讨MIF在气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响。方法 24只 C57/BL6 小鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松组（C组）, 每组 8只; 卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;支气管肺泡灌洗液（BALF）行细胞学分类;HE 染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况; 免疫组化观察肺中 MIF的表达及定位; RT-PCR测定各组小鼠MIF mRNA的表达变化。结果 B组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞（Eos）和淋巴细胞与A组相比明显增高,C组明显低于B组(均P <0.01);HE 染色提示B组与A组相比出现Eos浸润增多、气道壁增厚等改变,C组上述改变较B组为轻(P < 0.01); 免疫组化显示 MIF 在B组小鼠气道上皮细胞、上皮下黏膜、炎症细胞中皆有表达而在A组中表达较弱, C组表达量较B组低(均P < 0.01) ; RT-PCR 检测发现MIF在B组表达较A组高, 而C组表达量低于B组 (均P < 0.01) 。结论 哮喘小鼠肺中MIF 表达增高,与气道重塑有关; 地塞米松可下调 MIF表达,延缓气道重塑进程。     

屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用

目的研究屋尘螨（HDM）对于气道上皮Toll样受体4（TLR4）表达及T淋巴细胞分化的影响,以进一步探讨其在哮喘小鼠气道炎症中作用。方法雌性BALB/c小鼠30只随机分为OVA哮喘模型组（OVA组）、HDM组和生理盐水对照组（对照组）。OVA组用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立小鼠哮喘模型,HDM组给予HDM提取液替代OVA致敏与激发,对照组用生理盐水替代OVA。观察小鼠气道及肺组织病理炎症浸润情况,支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及细胞分类计数。ELISA检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IL-17的含量。实时荧光定量PCR法测定气道上皮TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法测定气道上皮TLR4蛋白的表达。流式细胞技术检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4＋T淋巴细胞百分率情况。结果 OVA组支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,以嗜酸粒细胞为主的炎症细胞浸润;HDM组出现肺泡腔及间质充血,中性粒细胞等炎症细胞浸润;对照组小鼠气道上皮无增厚,无炎症细胞浸润,肺泡壁完整。与OVA组比较,HDM组BALF细胞总数及分类计数除嗜酸粒细胞无显著差异外（P〉0.05）,其余均显著升高（P〈0.05）;HDM组BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平较OVA组明显增高（P〈0.05）,IFN-γ的表达无显著差异（P〉0.05）;HDM组气道上皮TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达明显增高（P〈0.05）,OVA组与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。与OVA组比较,HDM组外周血Th2、Th17细胞显著增高（P〈0.05）,而Th1细胞无明显变化（P〉0.05）。结论 HDM诱导气道上皮TLR4表达增高,使Th2与Th17淋巴细胞活化,气道内炎症细胞浸润,可能在哮喘气道炎症中起重要作用。     

不同剂量原儿茶酸对脂多糖致急性肺损伤小鼠的作用及其机制研究

目的：探索不同浓度原儿茶酸（ PCA ）对脂多糖（ LPS ）诱导的急性肺损伤（ ALI ）小鼠的保护作用,并探讨其对TLR4信号通路的作用。方法将60只小鼠分为6组：正常对照组、LPS模型组、PCA高剂量组、PCA中剂量组、PCA低剂量组、地塞米松阳性对照组。模型组以5mg· kg -1 LPS腹腔内注射诱导ALI。观察小鼠肺组织病理学变化;用BCA法检测肺泡灌洗液中总蛋白浓度;用ELISA检测肺泡灌洗液及血清中炎症因子TNF-α,IL-1β的表达,Western Blot 检测肺组织中TLR4蛋白的表达水平。结果与模型组相比,PCA治疗组肺组织损伤程度显著减轻,且与PCA给药浓度有关,高浓度组减轻显著;BALF及血清中TNF-α,IL-1β含量出现明显下降, PCA高剂量组差异显著（ P＜0．05）;BALF中蛋白浓度与模型组相比出现明显下降,PCA高剂量组差异显著（ P＜0．01）;TLR4蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低（P＜0．01）,并随浓度的增高而降低。结论 PCA对脂多糖所致急性肺损伤的保护作用与浓度有关,高浓度组作用显著,其作用机制可能与其抑制TLR4信号通路有关。     

单肺通气导致的肺炎性损伤及姜黄素的干预作用

【目的】 探讨姜黄素预先给药对兔单肺通气导致的肺炎性损伤的影响及可能机制。【方法】 将12只健康新西兰白兔随机分为2组,每组6只:开胸单肺通气+对照剂组(组1)和开胸单肺通气+姜黄素组(组2)。两组兔经腹腔注射分别预先给予对照剂和姜黄素,每天早晚各1次。连续给药7 d后,两组兔均经口插入单腔气管导管行右侧单肺通气,并左胸开一小口模拟手术操作。分别于机械通气前(T0)及实验结束前(T4)采集动脉血行血气分析,计算氧合指数。处死动物后,行右侧支气管肺泡灌洗测定髓过氧化物酶 (MPO)含量及中性粒细胞数量;取左侧肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分;采用ELISA法分别检测左右侧肺组织匀浆中白细胞介素-8(IL-8)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-1 (MIP-1)的含量;采用免疫组化法检测左侧肺组织中核因子-κB(NF-κB), 髓样分化因子88(MyD88)和Toll样受体2(TLR2)的 表达。【结果】 T4时组2氧合指数较组1显著升高(P < 0.05)。与组1比较,组2支气管肺泡灌洗液中MPO含量、中性粒细胞计数、肺损伤评分、肺组织匀浆中IL-8、IL-1β、TNF-α、MIP-1含量均降低,IL-10含量升高(P < 0.05)。同组内两侧肺比较,组1非通气侧肺炎性损伤更严重(P < 0.05),组2无差异(P > 0.05)。 与组1比较,组2肺组织中NF-κB, MyD88和TLR2的 表达明显减少。【结论】姜黄素预先给药显著抑制开胸手术单肺通气时炎性因子的释放,减轻肺炎性损伤,其机制可能与TLR2通过MyD88信号通路调节NF-κB的活性有关。     

乌司他丁减轻失血性休克大鼠肺炎性损伤的机制

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎性介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法72只SD大 鼠,随机分为休克不复苏组（SR,n=24）,醋酸钠林格液组（AR,n=24）及乌司他丁组（UR,n=24）。通过股动脉放血将3组制成休 克模型（平均动脉压维持在30~40 mmHg）,SR组休克制备成功后不予复苏,并分别于休克后1、4、6 h（若大鼠死亡则大鼠死亡即 刻）取大鼠肺组织;AR组、UR组分别系维持休克60 min后应用醋酸钠林格液、醋酸钠林格液联合乌司他丁进行30 min液体复 苏,并分别于复苏后1、4、6 h取大鼠肺组织。利用实时荧光定量PCR法检测各组肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、 IL-10的mRNA含量以及通过Western blot检测TLR4、MyD88、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p65、IRAK4、p-IRAK4（Thr345、Ser346）、 p-IRAK4（Thr342）、TRAF6的蛋白相对表达量。在光镜下观察3组肺组织病理学变化。结果与休克组相比,醋酸钠林格液组 肺组织炎症浸润程度稍减轻,其中miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平升高（P<0.05）,IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4 (Thr345、ser346)的蛋白表达增加（P<0.05）;TNF-α、IL-1和IL-6的水平降低（P<0.05）,TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK- 4及TRAF6的蛋白表达减少（P<0.05）。与醋酸钠林格液组比较,乌司他丁组的肺组织炎性损伤得到了进一步改善,升高了miR- 146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平（P<0.01）及IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达（P<0.01）,降低 了TNF-α、IL-1和IL-6的水平（P<0.01）和TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达（P<0.01）。结论乌 司他丁联合醋酸钠林格液复苏创伤失血性休克大鼠可能是通过增强miR-146a的表达,负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路,进而 调节体内促炎因子和抗炎因子平衡,以达到保护肺组织的作用。     

基于神经影像学技术的双语语码切换研究新进展

探究双语者对两种语言系统的加工过程,尤其是双语者有效地从一种语言切换到另一种语言即双语语码切换,是双语研 究领域的关键科学问题。随着神经影像学技术的快速发展,双语加工尤其是语码切换研究取得了重要的进展,但是对于双语语 码切换的内部产生机制,目前还没有一致的结论。从神经心理和影像学角度开展的双语切换研究可以从时间和空间两方面阐 明双语者进行语码切换的过程和大脑机制,为双语者语码切换的产生机制提供直接的证据。本文从事件相关电位技术、功能性 磁共振成像技术和脑磁图技术三个方面分析双语语码切换的研究,并对未来研究方向及其技术手段进行展望。     

清肺口服液黄酮类成分改善RSV感染小鼠肺上皮屏障损伤的机制研究

  目的  探讨清肺口服液黄酮类成分(Fla)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺上皮屏障损伤的保护机制。  方法  将BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,Fla低、高剂量组(30、60 mg·kg-1·d-1),阳性药利巴韦林组(46 mg·kg-1·d-1)。建立RSV感染的小鼠模型, 持续给药4 d后, HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; 以BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比评估肺上皮通透性; Western blot检测肺组织紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达。  结果  与模型组相比, Fla高、低剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻(P < 0.05, P < 0.01), BALF中IL-1β、TNF-α含量下降(P < 0.05, P < 0.01), BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比降低(P < 0.05, P < 0.01), 肺组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P < 0.05, P < 0.01), p-p38 MAPK/p38 MAPK、TLR4、MyD88蛋白表达下降(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  Fla可能通过抑制TLR4/MyD88/p38 MAPK通路, 促进紧密连接蛋白表达, 减轻肺部炎症, 从而改善RSV导致的肺上皮屏障损伤。      

铜绿假单胞菌肺部感染对小鼠 Toll 样受体 2、4 的影响

目的探讨Toll样受体（TLR）2、4mRNA在铜绿假单胞菌慢性感染小鼠肺内的动态改变及其作用。方法56只雄性Balb／c小鼠随机气道接种含有铜绿假单胞菌（PA）琼脂糖珠（感染组,34只）和无菌琼脂糖珠（对照组,22只）。于第1、3、5、7、10天处死小鼠,取肺组织细菌培养,行肺组织病理观察,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）中自介素（IL）-6和IL-17的含量,采用Real—timePCR检测TLR2mRNA及TLR4mRNA表达。结果感染组在接种后第3天IL-6和IL-17水平均达高峰,分别为（154．83±12．51）ng／L和（601．05±25．53）ng／L,均显著高于对照组（40．05±2．98）ng／L和（213．75±9．25）ng／L,差异有统计学意义（P〈0．05）,且两者在接种后第10天仍处于高水平。感染组中TLR4mRNA的相对表达量第7天达高峰（4．09±0．25）,与对照组第7天（0．97±0．05）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;而TLR2mRNA在感染组和对照组各时间相比变化均不明显（P〉0．05）。结论TLR4与小鼠肺部慢性感染PA的发生发展密切相关,其机制可能与TLR4在肺的免疫损伤中起到重要作用有关。     

H2S Protecting against Lung Injury following Limb Ischemia-reperfusion by Alleviating Inflammation and Water Transport Abnormality in Rats

Objective To investigate the effect of H2 S on lower limb ischemia-reperfusion(LIR) induced lung injury and explore the underlying mechanism. Methods Wistar rats were randomly divided into control group, IR group, IR+ Sodium Hydrosulphide(NaHS) group and IR+ DL-propargylglycine(PPG) group. IR group as lung injury model induced by LIR were given 4 h reperfusion following 4 h ischemia of bilateral hindlimbs with rubber bands. NaHS(0.78 mg/kg) as exogenous H2 S donor and PPG(60 mg/kg) which can suppress endogenous H2 S production were administrated before LIR, respectively. The lungs were removed for histologic analysis, the determination of wet-to-dry weight ratios and the measurement of mRNA and protein levels of aquaporin-1(AQP1), aquaporin-5(AQP5) as indexes of water transport abnormality, and mRNA and protein levels of Toll-like receptor 4(TLR4), myeloid differentiation primary-response gene 88(MyD88) and p-NF-κB as indexes of inflammation. Results LIR induced lung injury was accompanied with upregulation of TLR4-Myd88-NF-κB pathway and downregulation of AQP1/AQP5. NaHS pre-treatment reduced lung injury with increasing AQP1/AQP5 expression and inhibition of TLR4-Myd88-NF-κB pathway, but PPG adjusted AQP1/AQP5 and TLR4 pathway to the opposite side and exacerbated lung injury. Conclusion Endogenous H2 S, TLR4-Myd88-NF-κB pathway and AQP1/AQP5 were involved in LIR induced lung injury. Increased H2 S would alleviate lung injury and the effect is at least partially depend on the adjustment of TLR4-Myd88-NF-κB pathway and AQP1/AQP5 expression to reduce inflammatory reaction and lessen pulmonary edema.     

双氢青蒿素对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞TLR/MyD88信号通路的影响研究

背景　类风湿关节炎（RA）的发病机制复杂,已有研究证实Toll样受体（TLR）在RA的发病中起关键作用,其表达于树突状细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞等细胞表面,识别病原体不同的分子结构,进而上调炎性细胞因子和趋化因子,激活细胞内的信号转导通路,引起宿主细胞发生自身炎性反应,在自身免疫性疾病中发挥重要作用。目的　观察双氢青蒿素（DHA）对RA患者外周血单个核细胞（PBMCs）TLR4/MyD88信号通路及蛋白表达的影响。方法　选取2017年10月-2018年12月于内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院就诊的活动期RA患者10例为观察组,同时随机选取本院体检中心健康体检者10例为对照组。取两组外周血PBMCs分离培养,将PBMCs分为5组,每组设5个复孔。（1）对照组：健康志愿者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（2）RA组：RA患者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（3）TLR2抑制剂组：RA患者外周血PBMCs,给予100 μg/L的TLR2抑制剂干预TLR介导的信号通路;（4）DHA低剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予200 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路;（5）DHA高剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予1 000 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路。检测并比较5组TLR2阳性率、TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、TLR2、MyD88、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白介素6（IL-6）水平。结果　RA组TLR2阳性率高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2阳性率高于DHA高剂量组（P<0.05）。RA组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TLR2、MyD88高于对照组（P<0.05）。RA组TLR2、MyD88高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2、MyD88高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TNF-α、IL-6水平高于对照组（P<0.05）。RA组TNF-α、IL-6水平高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TNF-α、IL-6水平高于DHA高剂量组（P<0.05）。结论　DHA可抑制RA患者的PBMCs中TLR2、MyD88表达和上清液中TNF-α及IL-6水平,可能与其可抑制TLR4/MyD88信号通路介导的炎性反应有关。