左旋炔诺孕酮,雌二醇对离体子宫内膜细胞增殖的影响

[目的]观察左旋炔诺孕酮(LNG),雌二醇(E2)在体外对子宫内膜上皮细胞及间质细胞的影响.[方法]对20例人子宫在位内膜离体组织进行体外分离培养,细胞汇合后消化,一部分用盖片法培养,用特异性抗体鉴定细胞纯度,一部分在相同的生长期加入不同浓度的LNG,E2,培养24,48,72 h,用MTT法测定LNG,E2对子宫内膜上皮细胞及间质细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪及DNA切口末端标记法测定LNG,E2对子宫内膜上皮细胞及间质细胞的增殖及凋亡作用.[结果]LNG浓度为5×10-5mol/L时,抑制细胞生长速度,促进细胞的凋亡;随药物作用时间延长,抑制作用加强,凋亡率增加.E2浓度为5×10-5mol/L时,促进细胞的增殖.两种激素同时作用,抑制细胞生长速度,促进细胞的凋亡.[结论]特定浓度的LNG对子宫内膜细胞生长有抑制作用,并诱导子宫内膜细胞凋亡;特定浓度的E2对子宫内膜细胞生长有促进增殖作用.     

睾丸支持细胞与间质细胞的相互作用

睾丸中主要包括3种细胞,支持细胞与间质细胞及生精细胞。生精细胞与生精有关;间质细胞分泌雄激素;而支持细胞主要维持睾丸曲细精管的结构、维持血睾屏障的完整性、维护睾丸组织天然免疫豁免的功能以及对生精细胞及间质细胞功能的调控,因此间质细胞与支持细胞为组织工程睾丸组织构建的潜在种子细胞。本文就间质细胞及支持细胞之间的相互作用、调控予以综述。     

TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变

目的 检测转化生长因子（TGF-β1）能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞-间质细胞转变（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及其相应的信号转导机制.方法 在体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型细胞（RLE-6TN）中加入TGF-β1后,于不同时间段收取细胞,分别采用Real-time PCR及Western blot检测上皮及间质细胞标志物表达的改变;Western blot检测TGF-β1对RLE-6TN细胞p-Smad 2/3表达的影响;TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞形态学的改变采用倒置相差显微镜观察,超微结构的改变采用透射电子显微镜观察.结果 加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其间质细胞标志物表达上调,上皮细胞标志物的表达下调;加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其p-Smad 2/3的表达明显上调;形态学上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞向成肌纤维细胞样细胞转变;超微结构上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞特有的嗜锇性板层小体发生变性、肿胀并随TGF-β1作用时间延长最终完全消失.结论 TGF-β1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关.     

人肝癌乳酸脱氢酶的细胞膜定位和酶学特性研究

【立论依据及设计思路】 已有研究表明在人肝癌组织中,间质细胞的线粒体会在癌细胞的驱动下会发生线粒体自噬,只进行糖酵解,且糖酵解相关酶的表达水平显著升高,尤其是间质细胞特异高表达LDHA(乳酸脱氢酶A),将糖酵解产物丙酮酸转化成乳酸,排出间质细胞。而排出的乳酸被邻近的肝癌细胞摄取,肝癌细胞特异表达LDHB,将乳酸转变成丙酮酸。肝癌细胞具有完整的氧化磷酸化过程,能利用间质细胞提供的乳酸,经三羧酸循环、糖异生和脂肪合成,为肿瘤细胞的增殖提供物质和能量。间质细胞的糖酵解和肿瘤细胞的氧化磷酸化之间代谢偶联,是维持肿瘤细胞快速增殖的重要机制。前期实验发现肝癌细胞表达膜型LDHB,而膜型LDHB的功能尚不清楚。本课题拟研究LDHA和LDHB在人肝癌间质细胞和肝癌细胞中的表达和定位和酶学特征,阐述LDH在肝癌组织能量代谢偶联过程中的生化机制,同时评价LDH作为人肝癌能量代谢干预靶点的可能性。 【实验内容】 第一部分:人体肝癌组织标本中肝癌细胞和间质细胞线粒体功能和反向Warburg效应的检测,利用免疫组化的方法检测线粒体标志物和线粒体自噬标志物及LDHA和LDHB的表达分布;第二部分:建立肝癌细胞SMMC-7721和正常人成纤维细胞的共培养体系;第三部分:检测LDH在肝癌细胞及肝癌相关成纤维细胞中的膜定位及表达水平;第四部分:对细胞膜上的LDH进行酶活性检测,明确其酶活性和代谢特征;第五部分:在细胞水平上研究LDH抗体,抗寄生虫药,单羧酸转运体抑制剂对能量代谢偶联的抑制作用;第六部分: 裸鼠模型的抗体和阿苯达唑的抗肿瘤实验。 【材料】 人肝癌SMMC-7721细胞株及成纤维细胞株,特异性LDH抗体,抗寄生虫药物(吡喹酮,阿苯达唑),免疫组化相关材料,qPCR相关材料,免疫印迹相关材料,MTT比色法相关材料。 【可行性】 本实验室已完成了人LDHA和LDHB的克隆表达和酶学特性研究,已实验证实人肝癌细胞SMMC-7721只表达LDHB, 且定位于细胞膜上。 【创新性】 提出肝癌组织中,间质细胞和实质细胞分别表达膜型LDHA和LDHB,不仅负责丙酮酸和乳酸之间的相互转化,而且可能是产物的转运体;抗寄生虫LDH的抗体和药物可以抑制人LDH的酶活性,抑制肿瘤的生长和转移。     

死胎胎盘组织中HBsAg表达及其意义

目的　观察乙型肝炎病毒在胎盘组织中的表达及其意义。方法　收集 40只孕周为 36～ 40周、肝功能异常、娩下死胎的乙型肝炎产妇的胎盘组织 ,采用SP法检测HBsAg ,行常规病理观察 ;检测产妇产前静脉血乙型肝炎病毒 (HBV)标志物。结果　HBsAg阳性颗粒在死胎胎盘的蜕膜细胞 (DC)、滋养层细胞 (TC)、绒毛间质细胞 (VSC)、绒毛毛细血管内皮细胞 (VCEC)的细胞质、血管中呈点、灶状分布 ,这些细胞的核不着色。产妇HBV标志物呈单项阳性、小三阳、大三阳的死胎胎盘组织中HBsAg阳性率及DC、TC、VSC、VCEC细胞质中HBsAg阳性率均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。死胎胎盘绒毛发育迟缓、慢性绒毛炎、单脐动脉的发生率比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　HBV母婴传播可能还存在一种从胎盘母体面向胎儿的细胞转移的方式 ;HBV可以导致胎盘发育不良和屏障功能障碍 ;死胎胎盘组织中HBsAg阳性率与孕妇静脉血中HBV标志无关。     

Cajal间质细胞与肠易激综合征脑肠轴相互作用关系

<正>Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)是连接胃肠道神经系统与平滑肌细胞的重要间质细胞,广泛分布于胃肠组织,是胃肠慢波电位的起搏者、传导者,在调控胃肠动力方面起重要作用。肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种胃肠功能紊乱性疾病,发病机制至今仍未阐明。目前,研究认为,IBS存在ICC数量、形态、结构及功能的异     

人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞分离与培养

目的：建立子宫内膜异位症（EMs）异位、在位内膜间质细胞的体外细胞模型,实时观察间质细胞形态变化。方法胶原酶消化异位、在位内膜组织,二次筛网过滤结合低速离心法分离纯化间质细胞,应用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并进行传代培养,观察细胞生长状况及细胞形态差异。结果培养成功率91．3％,间质细胞纯度达95％;异位间质细胞9代内、在位及对照组间质细胞11代内,细胞形态及活性并无明显改变。结论子宫内膜间质细胞可为子宫内膜异位症研究提供较好的细胞模型。     

肝硬化大鼠睾丸一氧化氮合酶免疫组化研究

探讨肝硬化睾丸功能障碍的发生机制.将清洁级雄性SD大鼠分为假手术组(SO,n=10)、肝硬化组(CIR,n=10).采用胆管结扎(BDL)复制肝硬化模型,假手术组则仅分离出胆总管而不予结扎.应用免疫组织化学法对SO组和CIR组大鼠睾丸组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达进行比较性研究.结果术后4周,组织学检查显示胆汁性肝硬化特征性表现.CIR组和SO组大鼠睾丸组织eNOS表达均在间质细胞胞浆,二者平均吸光度和面密度相比较均无显著性差异(P＞0.05).而iNOS表达则存在较大差异,SO组仅在睾丸组织间质细胞胞浆表达;CIR组不仅在间质细胞胞浆,还在支持细胞、生精细胞以及脱落的生精上皮细胞胞浆表达,二者平均吸光度及面密度相比均存在非常显著性差异(P＜0.01).表明CIR组大鼠睾丸组织iNOS活性增高,参与了支持细胞、生精过程的调节,从而进一步证明了肝硬化睾丸功能障碍的发生机制中存在NO途径.     

TGF-β_1诱导肺泡上皮细胞间质转化

目的:通过观察TGF-β1诱导下A549细胞出现的细胞形态学和E-cad表达的变化,探讨上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程在肺纤维化发病机制中的作用。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,应用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测TGF-β1干预前后E-cad的mRNA表达变化;倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;间接免疫荧光观察E-cad蛋白表达的变化。结果:倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。间接免疫荧光显示A549细胞的E-cad表达(红色荧光染色)随时间延长逐渐减少。RT-PCR显示E-cad的mRNA表达下调(P<0.05)。结论:TGF-β1在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,肺泡上皮细胞间质转化是肺纤维化的重要发病机制之一。     

Lumican基因与恶性肿瘤

基膜聚糖(Lumican)是富含亮氨酸低分子蛋白多糖,为细胞外基质成分。Lumican最初发现于角膜,能组织胶原空间,使角膜透明。近来发现Lumican基因在正常上皮细胞与间质细胞均有表达,并调节间质细胞分泌基质蛋白。Lumican基因表达异常影响细胞基质形成,促使肿瘤发展。本文就Lumican基因在恶性肿瘤中的表达及抗肿瘤机制加以综述。     

高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

茶多酚对高糖时内皮细胞产生NO、NOS和ICAM-1的影响

目的:研究在高糖环境下人脐静脉内皮细胞(ECV304)产生一氧化氮(NO)量及其合酶和表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM鄄1)的变化,以及茶多酚(tea polyphenols,TPs)的干预作用。方法:培养ECV304,加入不同培养液,分为正常对照组、高糖组、茶多酚组、茶多酚干预组,以硝酸还原酶法测定培养液中NO的代谢产物NO2/NO3鄄(NOX-)含量,用分光光度法检测培养液中NOS活性,用逆转录鄄多聚酶链反应(RT鄄PCR)和细胞酶联免疫吸附法(ELISA)观察ICAM鄄1的基因和细胞表面蛋白的表达。结果:高糖组NO含量、NOS活性、ICAM鄄1的基因和蛋白表达较正常对照组显著增加,且ICAM鄄1的蛋白表达呈现一定的时间依赖性;茶多酚干预组显著抑制高糖时NO含量、NOS活性以及ICAM鄄1的基因和蛋白表达的上调。结论:高糖时内皮细胞NOS的激活、NO的大量释放以及ICAM鄄1mRNA和蛋白的表达上调,对糖尿病早期进展起一定作用,茶多酚对这种损伤具有明显的保护作用。     

茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的保护作用

目的　研究茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤内皮细胞的保护作用。方法　在大鼠左冠状动脉前降支结扎致心肌缺血再灌注损伤模型的基础上 ,观察茶多酚药物干预对损伤大鼠血浆中血管性血友病因子 (vWF)活性及脂质过氧化终产物丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)含量的影响。结果　茶多酚能明显降低血浆MDA含量、vWF活性及提高NO含量。结论　茶多酚对心肌缺血再灌注损伤内皮细胞有明显保护作用 ,可能与其通过清除氧自由基的膜脂质过氧化作用和提高NO含量有关     

茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌生长、产酸的影响

目的探讨茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌生长、产酸的影响。方法采用棋盘稀释法测定茶多酚葡萄柚提取物混合液对变异链球菌的最低抑菌浓度(MIC)值,计算分级抑制浓度(FIC)指数来判定二者的联合效应;并测定低于MIC浓度的茶多酚葡萄柚提取物混合液对变异链球菌产酸的影响。结果茶多酚和GSE单独用药时,其MIC分别为2 mg/ml和46.88 mg/L,联用时可降低单组分的使用浓度,如茶多酚1 mg/ml联用GSE 37.5 mg/L即可达到联合应用的M IC,FIC=0.75。变异链球菌培养前后的△pH值随混合液浓度的降低而明显增加。结论茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌的体外抗菌活性具有相加作用,较各自的单组分用药在更低浓度即可有效抑制变异链球菌的生长、产酸。     

Introduction to risk management plans in the Singapore context

A risk management plan (RMP) contains an overview of important safety concerns associated with the use of a therapeutic product (TP) and proposed pharmacovigilance activities to monitor and manage these safety concerns in the post-approval stage. The Health Sciences Authority (HSA) of Singapore has legislated its requirements for RMPs as part of its product life cycle approach in the management of safety concerns associated with TPs. Under the Health Product (Therapeutic Products) Regulations enacted in November 2016, companies may be required to implement RMPs under the direction of HSA to help ensure that the benefits of TPs outweigh their risks. In this commentary, we present a case study on the local RMP for Dengvaxia®, the world’s first dengue vaccine, which has been approved for use in Singapore. We hope that this article raises awareness among healthcare professionals about the concept of RMPs and how RMPs are implemented locally.     

早孕期蜕膜组织中细胞的形态学及组织化学研究

用多种组织化学方法对人早孕期蜕膜组织的细胞种类和各类细胞的化学成份作了研究。蜕膜组织内有两类细胞:大细胞和小细胞,其数量各占一半,大细胞胞质内含有丰富的糖原、脂类、脂酶,碱性磷酸酶以及3-β-羟基甾体脱氢酶,小细胞的胞质内含有丰富的酸性磷酸酶和三磷酸腺苷酶,部分小细胞内含有酸性粘多糖。含颗粒的小细胞占小细胞的20.7％,不含颗粒的小细胞有待进一步研究,研究表明,大细胞是形态一致,功能多样的细胞,而小细胞是形态各异和功能不一的细胞。     

普萘洛尔凝胶治疗小儿血管瘤的病理分析

目的 从病理学角度探讨普萘洛尔凝胶治疗婴幼儿血管瘤的优越性。方法 选取南京军区福州总医院普外科2012年6月~2014年9月手术切除的13例血管瘤标本进行分析,所有患儿手术前均进行过激光、冷冻或普萘洛尔凝胶治疗,对比不同治疗方式治疗后的病理表现。结果 经普萘洛尔凝胶治疗的瘤体表面未见明显瘢痕形成,病理切片下见少量管腔狭窄,管壁薄的血管,血管周围纤维组织少量增生,增生的组织排列较整齐。畸形的静脉少且细小,尽管血窦仍不规则,但血窦较小,且血窦之间腔隙相通较少。而激光和冷冻疗法后复发的患者,病灶表面可见瘢痕形成,光镜下纤维组织增生杂乱,可见炎性细胞密集浸润。同时,在较厚的纤维组织下可见密集的微血管管腔,管腔内血窦相通。结论 普萘洛尔凝胶治疗婴幼儿血管瘤较激光、冷冻治疗具有疗效确切、不良反应少等优势。     

边缘型肺癌和结核球的常规CT与薄层CT扫描的对比分析

目的：探导CT在边缘型肺癌和结核球中的诊断价值。方法：分析并比较34例经X线平片发现的边缘型肺癌和结核球的常规CT和薄层CT影像。结果：分叶：在边缘型肺癌中多见（薄扫85％，常规65％）；不规则状：结核球多见（薄扫53.6%，常规37.5%)；粗大毛刺：结核球多见（薄扫81％，常规31.5%)；细小毛刺：主要出现在边缘型肺癌（薄层75%，常规20％）；胸膜尾征：肺癌较结核多约10％（薄扫30％，常规15％）；不均匀密度：肺癌（薄扫65％，常规35％）,结核球无软组织密度的不同。结论：X线平片发现肺部球形病变应常规CT扫描，薄层CT分辨力明显高于常规CT，能更好地显示肺部肿块的边缘和内部结构特征。     

新生儿卵巢输卵管和子宫的组织学观察

新生女婴卵巢中已存在大量原始卵泡、初级卵泡,还有一定数量的生长卵泡。生长卵泡中含大小不一的卵泡腔,明显的卵丘和颗粒层,卵泡膜。子宫已具成人雏形,上皮呈柱状,子宫腺细胞部分显空泡状,提示这些变化与激素水平有关。