一种培养细胞免疫组织化学染色方法的建立

细胞培养是医学研究中重要的手段之一 ,即往对细胞贴壁生长的盖玻片进行免疫组织化学染色时 ,需特殊器皿 ,且操作烦琐 ,效果常不令人满意。我们在实践中建立了一种方法 ,其效果更为理想 ,介绍如下。１材料与方法１．１选用贴附在盖玻片生长良好的平滑肌细胞 ,免疫组化试剂购自北京中山生物技术有限公司。１．２方法 :(１)细胞贴壁生长的盖玻片经水洗 (生理盐水 )、干燥、冷丙酮固定１０ｍｉｎ ,将细胞生长面标记 ,备用。(２)用甘油明胶将细胞生长盖玻片贴附在普通载玻片上 ,细胞生长面向上。(３)滴加３ %过氧化氢溶液５ｍｉｎ ,水洗。(４)Ｔ…     

动脉平滑肌细胞体外培养模型及生长特点

目的 探讨胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞体外培养方法,明确不同平滑肌细胞的原代和传代后生长情况。方法 采用改良贴壁法一玻片压迫组织贴壁方法进行胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞的原代培养,并将细胞进行传代后培养,同时对各细胞的生长进行观察。结果 ①采用改良贴壁法可使原代细胞良好生长,动脉导管的平滑肌细胞无论是从组织块游出时间还是生长呈“峰一谷”样时间和细胞首次传代时间都比肺动脉和主动脉的要长;②在细胞的继代培养期,动脉导管平滑肌的生长周期长于主动脉,主动脉的平滑肌生长周期长于肺动脉。结论 动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞体外生长存在差异。     

清洁大量玻片的快速方法

<正> 在组织切片制作过程中,需用大量载玻片和盖玻片(统称玻片)。按常规的玻片清洁方法,必须先入清洁液浸泡一天以上,然后经流水冲洗,再转入95％酒精浸泡脱脂,用干净棉布擦干备用。这是一项费时而又繁杂的工作。虽则有人为此进行过探索,并在一定程度上减少了工作量,但仍费时很多。作者经过反复摸索,用下列方法在较短的时间内可清洁完大量玻片。现将方法介绍如下。一、操作步骤: 1.将新玻片一片一片地放入清洁液内浸泡1小时; 2.经自来水冲洗约1小时。中途翻动几次,以便彻底冲去玻片上的清洁液; 3.蒸馏水换洗两次;     

高效、快速清洗盖玻片法

1　材料和方法取卧式染色缸,在缸内第四五槽之间插入一张载玻片,将染色缸分为两部分,每侧竖着放入盖玻片300张～350张,每缸盖玻片不宜超过700张。加入1%盐酸酒精,充分浸泡盖玻片,加盖,浸泡1ｈ以上。倾去盐酸酒精,用流水冲洗缸中盖玻片,水流大小以不将盖玻片从缸内冲出为宜。冲洗过程中适当晃动缸中盖玻片,使流水充分冲洗每张盖玻片。蒸馏水浸泡2ｓ×10ｓ。无水乙醇浸泡3次,每次数分钟,使乙醇替换盖玻片间的水分。倾去无水乙醇,放入温度为60℃左右烤箱中烘干数小时或过夜。从烤箱中取出染色缸,室温放置自然冷却后,即可使用。如一次清洗数缸盖…     

体外培养细胞原位包埋电镜样品的制作方法

目的:探讨一种快速简单的单层细胞原位包埋及电镜样品的制作方法,避免离心法等对细胞造成伤害以致影响电镜下细胞结构的观察?方法:将细胞培养在盖玻片上并进行原位包埋,通过置入液氮冷却的方式迅速彻底分离树脂与玻片上的细胞层?结果:此方法所得细胞的超微结构清晰,损伤明显减少?结论:体外培养细胞原位包埋电镜样品的制作方法快速简单,对细胞伤害少,完全可以满足科研和临床病理诊断的需要?     

玻片覆盖组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞及其生物活性的观察

目的 采用玻片覆盖组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞,以用于实验观察中药单体对培养人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响,进而探讨中医药治疗牙周病的有效性及其作用机制.方法 用玻片覆盖组织块方法进行人牙周膜成纤维细胞原代培养,利用形态学、免疫组化方法鉴定其来源,通过生长曲线及贴壁率的测定来研究其生物学特性.结果 原代培养成功率为85%,细胞形态呈长梭形,抗波形丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白染色呈阴性,细胞倍增时间为54 h,细胞12 h贴壁率为96%,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性,生长良好.结论 采用玻片覆盖组织块法可提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率,且简单易行,可满足中医药治疗牙周病的有效性及其作用机制的实验研究需求.     

胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达

目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达。结果:经10-14 d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达。结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础。     

细胞爬片集成染色法及应用

细胞爬片是根据实验研究的需要,使贴壁细胞在一定的固相表面(如盖玻片、载玻片)上贴壁生长而获得的一种体外细胞实验材料。许多被检样本量庞大、待测指标众多的科研课题,经常需要对大量的细胞爬片进行HE染色、免疫细胞化学(immunocyto-chemistry,ICC)染色及原位杂交(in situ hybridization,ISH)等各种实验处理。     

如何制作一张满意的血涂片

众所周知,血液一般检验在临床上是一种常规检测项目,它工作量大,标本多,对临床的诊断、治疗产生着重要的影响。因此,对检验质量的控制成为我们工作中的重要任务,特别是在血常规检测中对细胞形态观察尤为重要,血涂片制作和染色效果的好坏直接影响血细胞的观察继而关系着检验的结果。1玻片的清洗将玻片放入肥皂或洗衣粉中煮沸20 m in;用热水将肥皂和血膜等污物洗去,用自来水反复冲洗,再用蒸馏水冲洗3次~5次。必要时再置95%酒精浸泡1 h,然后擦干或烘干备用.新玻片先置95%酒精浸泡或10%盐酸浸泡24 h,然后用水彻底清洗。2标本的采集首先用75%酒精…     

介绍一种发霉玻片的处理方法

病理工作者在制片时,常常会遇到发霉了的玻片(载玻片和盖玻片)。使用这样的玻片制作切片,势必影响切片质量,若丢弃不用,又造成浪费。但如果经过处理,则可克服这一缺点。现将处理方法介绍如下: 一、将玻片逐片浸入清洁液中,浸泡72小时或更长时间; 二、从清洁液中取出玻片于流水中冲洗,直至将玻片表面附着的清洁液全部冲洗     

培养细胞透射电镜标本制作方法的改进

培养细胞的形态学观察,特别是超微结构的观察,多年来由于制作标本时细胞即难收集,又易离散等诸多问题而受到一定的限制。当前关于这方面技术的多种报道可规纳为两类,一类为“顶扣包埋法”,即将细胞置于载玻片或盖玻片上进行培养,然后直接在玻片上进行常规的清洗、固定、脱水和包埋等一系列透射电镜样本制作程序。最后,用灌满包埋树脂的四环素胶囊扣在载有培养细胞的玻片上进行聚合,     

两种不同基质对体外培养成骨细胞的促贴壁生长影响

目的比较多聚赖氨酸(PLL)与鼠尾胶原对成骨细胞体外培养生长的影响。方法分别采用多聚赖氨酸(PLL)和鼠尾胶原铺制培养皿,然后接种成骨细胞。于24、48、72h镜下观察细胞形态及占培养皿面积的百分比。结果24 h PLL组,细胞贴壁呈均匀分布状,贴壁面积比为30.6%±12.9%。鼠尾胶原组细胞贴壁呈团状,贴壁面积比为42.5%±15.7%,差异显著;48hPLL组,细胞呈均匀分布生长,贴壁面积比为43.8%±14.5%。鼠尾胶原组,细胞团相互连接,生长面积比为61.3%±17.1%,差异显著;72hPLL组细胞相互连接生长面积比为56.3%±15.4%。鼠尾胶原组,细胞连成片,生长面积比为94.4%±14.1%,差异显著。结论对体外培养的成骨细胞而言鼠尾胶原促贴壁生长比多聚赖氯酸(PLL)更为适宜。     

新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察。方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和B iocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况。48 h后观察组织块贴壁率,在培养5 d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离。使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化。常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构。结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在B iocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离。上丘脑组织在接种后31~5 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平。培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏。结论B iocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退。     

新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察.方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和Biocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况.48 h后观察组织块贴壁率,在培养5d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离.使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化.常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构.结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在Biocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离.上丘脑组织在接种后3～15 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平.培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏.结论Biocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退.     

揭膜法培养兔角膜内皮细胞的改进

目的探讨培养兔角膜内皮细胞的最佳方法。方法在手术显微镜下撕下兔角膜后弹力层及内皮细胞层并使之完整覆盖于盖玻片上,避免其卷曲和折叠并剪切成均匀小块,使内皮面向上置于培养瓶中进行培养。结果未加入任何促细胞分裂剂的情况下,细胞在体外生长良好,角膜内皮细胞很快自组织片迁移生长,1周后组织块周围长出细胞晕,2周内铺满瓶底,可以快速获取角膜内皮细胞。结论本法培养的内皮细胞不需用酶,具有组织片无折叠,贴壁更牢固,细胞更易移行、增殖等优点,可为角膜内皮的研究提供较多的纯内皮细胞。     

影响家蝇胚胎细胞系建立的相关因素研究

目的 探讨家蝇胚胎细胞系建立的影响因素.方法 取不同发育时间的家蝇卵(胚胎),用不同培养基将细胞培养于玻璃培养瓶和塑料培养瓶中,观察细胞生长.结果 产出约6 h的家蝇胚胎细胞能生长增殖,并成功建立贴壁生长细胞.其它时间段产出卵的家蝇胚胎不能建立贴壁细胞;家蝇胚胎细胞在TC-199培养基中不能生长,在TC-199加酵母提取液和水解乳蛋白的培养基中,家蝇胚胎细胞生长缓慢.在M3培养基中迅速生长,其中在15%胎牛血清(FBS)、20?S的M3培养基中,细胞生长迅速并可传代.细胞在玻璃培养瓶中不能贴壁生长,而在塑料培养瓶中能迅速贴壁生长.结论 取产出后约6 h的家蝇胚胎细胞接种于含15%～20% FBS的M3培养基的塑料培养瓶中,家蝇胚胎细胞能贴壁生长,成功传代.     

真菌的盖玻片培养及扫描电镜片的制作

介绍一种利用盖玻片制作丝状真菌盖片标本，并可利用制成的盖片标本进一步制作扫描电镜玻片标本的方法。     

肝癌细胞系表达p53,c-myc和增殖细胞核抗原的定位

0　引言　野生型 p5 3是一种抑癌基因 ,而其突变型和 c- myc都是癌基因 .增殖细胞核抗原 (PCNA)是一种细胞增殖相关蛋白 .关于它们在培养的原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞中表达的定位情况以往文献很少涉及 .HCC- 92 0 4是一株较新的肝癌细胞系[1 ] .我们采用免疫组织化学技术检测 p5 3,c-myc和 PCNA在培养的 HCC- 92 0 4细胞中的表达情况 .1　材料和方法1.1　细胞来源　人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4为本室建立 .于含盖玻片的 6孔板内用含有 10 0 m L· L- 1 新生小牛血清的RPMI16 40培养液培养 .待细胞生长至单层时 ,取出玻片 ,PB…     

胎儿骨髓间充质干细胞的培养及鉴定

目的从胎儿骨髓中分离培养纯化骨髓间充质干细胞(MSC),并进行细胞表面标志的检测,探讨MSC的培养方法。方法采用全骨髓培养、贴壁筛选法分离培养MSC,采用差速贴壁培养方法纯化细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志,并观察不同方法处理的培养界面对细胞贴壁和生长的影响。结果通过分离纯化培养,光镜下细胞形态以长梭形、不规则多角形为主;IV型胶原包被和Co60照射(照射量6GY)处理的培养瓶更利于MSC的贴壁、生长;流式细胞仪检测结果显示CD44( )、Stro-1( )、CD14(-)、CD34(-)、CD45(-)、CD11b(-)。结论采用贴壁筛选法和差速贴壁法结合可获得较高纯度的MSC,并且细胞生长良好,在体外具有较强的扩增能力。     

HEK-293细胞复苏培养及冻存

目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁。结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。