pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗预防接种对慢性鱼藤酮损害小鼠的神经保护作用

目的探讨优化人α-突触核蛋白(humanα-synuclein,hα-syn)核酸疫苗(pVAX1-IL4/SYN-B)预防接种对慢性鱼藤酮损害小鼠的神经保护作用。方法将小鼠随机分为3组:核酸疫苗组、空质粒组、PBS对照组,在小鼠双侧后肢胫前肌部位分别注射pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗,空质粒pVAX1,PBS各100μl,共免疫3次。末次注射3周后全部小鼠背部皮下注射鱼藤酮1 mg/kg,1次/d,连续注射40 d。最后一次注射后,观察小鼠行为学变化;免疫组化方法检测小鼠中脑黑质致密部α-syn表达和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数目变化;RT-PCR检测α-syn mRNA表达情况。结果行为学观察发现,各组小鼠自由活动实验显示核酸疫苗组,空质粒组,PBS对照组小鼠移动格子数及下肢站立次数明显改善,并有显著差异(P<0.05)。免疫组化发现核酸疫苗组小鼠与空质粒组、PBS对照组相比,TH阳性细胞数增加63.27%、55.34%(P<0.05),α-syn表达减少55.68%,55.34%(P<0.05)。RT-PCR发现核酸疫苗组α-syn mRNA相对表达水平0.38±0.03较空质粒组0.77±0.05及PBS对照组0.73±0.01明显减少(P<0.05)。结论 pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗能有效防止鱼藤酮神经毒素对黑质多巴胺能神经元的损害,对多巴胺能神经细胞具有保护作用。     

优化hα-syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价

目的评价pVAX1-IL-4/SYN-B核酸疫苗对C57BL/6J小鼠免疫反应的效果和安全性。方法采用C57BL/6J小鼠模型,应用ELISA法、免疫组织化学、RT-PCR技术,比较PBS对照组、空质粒组、优化核酸疫苗组、全长核酸疫苗组小鼠动物行为学及免疫学指标的差异。结果①优化核酸疫苗组小鼠血清中α-syn抗体明显增加;②优化核酸疫苗组中IL-4较高,IFN-γ较低,其他3组无明显差异;③免疫组织化学法显示疫苗产生的抗体可与帕金森模型小鼠脑切片中α-syn阳性包涵体发生特异性结合反应,而对照组和空质粒组无反应;④RT-PCR显示优化核酸疫苗组COX-2表达量明显少于全长核酸疫苗组(P<0.05),与对照组、空质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论优化核酸疫苗可在小鼠体内产生高效价α-syn抗体,主要引起体液免疫反应;比全长核酸疫苗更有效、更安全,为优化核酸疫苗的进一步筛选奠定了基础。     

优化核酸疫苗对慢性MPTP帕金森病小鼠的免疫作用

目的评价优化核酸疫苗(pVAX1-IL-4/SYN-B)预防接种对小鼠MPTP损害的免疫保护作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、PBS模型组、空质粒模型组、优化核酸疫苗模型组4组,分别在小鼠双后肢胫前肌注射PBS、PBS、空质粒、pVAX1-IL-4/SYN-B各100μl,共3次。末次注射3周后,后3组注射MPTP构建慢性帕金森病小鼠模型,正常对照组注射同体积的PBS。末次给药后观察小鼠行为学变化;免疫组织化学、Western blot检测小鼠黑质部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达情况;RT-PCR检测小鼠黑质TNF-α、IL-1β的mRNA水平。结果与PBS模型组、空质粒模型组相比,优化核酸疫苗模型组小鼠运动症状明显改善;TH丢失减少;TNF-α、IL-1β的mRNA水平表达降低;差异有统计学意义。结论优化核酸疫苗预防接种对小鼠的慢性MPTP损害有一定的神经保护及抗炎作用。     

帕金森病嗅觉障碍的研究进展

嗅觉障碍是帕金森病(PD)最常见和最具特征的早期非运动症状,可作为PD诊断的重要依据之一。PD嗅觉障碍的机制非常复杂,是基础和临床研究的难点。病理性α-突触核蛋白的聚集,多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACh)、五羟色胺(5-HT)和炎性反应等神经介质的改变与PD嗅觉障碍的发生密切相关。深入研究PD嗅觉障碍的发病机制,可为治疗提供新思路及新靶点。     

核酸疫苗与婴幼儿免疫

编码引起保护性免疫反应的抗原基因重组于真核表达载体的构建疫苗，称核酸疫苗。本文对核酸疫苗的免疫机制，影响免疫应答的主要因素及用于婴幼儿免疫的利弊作一简要综述。     

α-突触核蛋白的生物学功能及其在帕金森病中的作用

α-Synuclein is identified as a constant component of dopaminergic neuronal pale eosinophilic inclusions "the Lewy bodies" in Parkinson’s disease. In fact, normal α-synuclein has lots of biological functions, which regulates synaptic plasticity, integrates presynaptic signaling, regulates dopamine level in the synapse, modulates microglial activation and lipid metabolism, and exerts heat shock protein-like function. However, abnormal α-synuclein leads to pathological lesion. Many studies show that pathological α-synuclein levels are elevated under the condition of its gene mutation, certain posttranslational modifications, dysfunction of molecular chaperones or ubiquitin proteasome system. The pathological α-synuclein plays an important role in neurodegeneration, in particular, Parkinson’s disease because it interrupts integrity of synaptic vesicles, ER-Golgi traffic and axonal transport, inhibits histone acetylation and chaperone-mediated autophagy, stabilizes itself against proteasomal degradation, and leads to neuroinflammation and abnormal phosphorylation of tau.     

核酸疫苗与婴幼儿免疫

编码引起保护性免疫反应的抗原基因重组于真核表达载体构建的疫苗，称核酸疫苗。本文对核酸疫苗的免疫机制，影响免疫应答的主要因素及用于婴幼儿免疫的利弊作一简要综述。     

核酸疫苗与蛋白疫苗的免疫特点及其联合免疫的研究进展

核酸疫苗和蛋白疫苗具有各自的免疫特点,分别诱导以细胞免疫和体液免疫为主的免疫应答,并能通过联合免疫提高机体预防病原体的免疫保护力,而核酸疫苗和蛋白疫苗的免疫特点以及联合使用核酸疫苗与蛋白疫苗协同免疫可以提高疫苗免疫效果。     

氯胺酮对MPTP诱导的帕金森病小鼠α-synuclein及星形胶质细胞的影响

目的:探究亚麻醉剂量氯胺酮(ketamine)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠α-突触核蛋白(α-synuclein)及星形胶质细胞的影响。方法:将36只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组(每组12只):NaCl组(腹腔注射生理盐水)、MPTP组(腹腔注射MPTP)和ketamine组(腹腔注射MPTP和ketamine)。悬尾实验和步态分析实验检测3组小鼠间的行为学差异;免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠黑质(SN)、纹状体尾壳核(CP)及视皮层(CX)内α-synuclein和胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:悬尾实验和步态分析实验结果显示,与NaCl组相比,MPTP组小鼠悬尾不动时间延长,步距减小(P<0. 05);与MPTP组相比,ketamine组小鼠悬尾不动时间缩短,步距增大(P<0. 05)。免疫荧光染色及Western blot结果显示,MPTP组小鼠SN、CP及CX内α-synuclein和GFAP的表达较NaCl组显著增多(P<0. 05),ketamine...     

α-突触核蛋白在帕金森病发病机制中的研究进展

帕金森病（PD）是最常见的神经系统退行性疾病,路易小体（LBs）是其最典型的病理改变。LBs的主要成分是α-突触核蛋白（α-syn）,其被认为是PD的致病因子。传递假说认为,病理性α-syn可由受损神经元转运到正常神经元,导致受体神经元中α-syn也产生病理性错误折叠和聚集,导致级联式神经细胞受损。肠脑轴假说认为,病理性α-syn可由肠道产生,经由迷走神经上传至中枢神经系统。本文就α-syn在PD发病机制中的作用进行概述,以期为PD的干预靶点的研究提供参考。     

pBudCE4.1/PPE68DNA疫苗诱导Balb/c小鼠产生Th1免疫应答

目的构建结核分枝杆菌PPE68 DNA疫苗,并探讨其在小鼠体内诱导的Th1免疫应答。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和复制子OriM基因亚克隆入真核表达质粒pBudCE4.1中构建穿梭质粒,并用其免疫Balb/c小鼠,于第3次免疫后2周处死小鼠,分别检测免疫小鼠血清IgG2a水平、IFN-γ和IL-12水平;特异性蛋白刺激后淋巴细胞增殖状态;小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 PPE68 DNA疫苗免疫小鼠后血清中的IgG2a水平、IFN-γ和IL-12均有意义的提高,脾淋巴细胞增殖显著。脾肺未见明显病理改变。结论 PPE68DNA疫苗可有效诱导小鼠Th1免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定了基础。     

禽巴氏杆菌OmpH外膜蛋白DNA疫苗的免疫效果

目的:研究禽多杀性巴氏杆菌omph DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫保护效果。方法:利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌的omph基因片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western blot检测其转录及表达情况。然后进行动物免疫,实验动物分为三组即:pOMPH组、pCDNA3.1(+)空载体组和PBS对照组,每组16只BALB/c小鼠,pOMPH组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μl1×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周。间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免两周后检测脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况。强毒攻击,计算小鼠存活数目及保护率。结果:间接免疫荧光试验、Western blot和RT-PCR检测结果均表明pOMPH可在体外培养的SP2/0细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,pOMPH组免疫小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)组和PBS组相比差异极显著(P0.01)。经提取的外膜蛋白(Omps)刺激后,pOMPH组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P0.05)。免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组产生的IFN-γ(P0.01)。攻毒后pOMPH组保护率明显高于两对照组,可达70%。结论:成功构建了禽多杀性巴氏杆菌omph DNA疫苗,该疫苗可诱导免疫小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答及较好的保护效果。     

空肠弯曲菌PEB1-LTB DNA疫苗构建及其对小鼠免疫保护性的研究

目的:研究粘膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)辅助的空肠弯曲菌(C.jejuni)外膜蛋白PEB1基因重组DNA疫苗诱导小鼠免疫应答水平。方法:构建pcDNA3.1(-)-PEB1-LTB真核重组表达载体,转染Hela细胞,Westernblot鉴定蛋白表达。滴鼻免疫BALB/c小鼠,末次免疫后2周,测定小鼠血清中IgG、IgA及气管、小肠粘膜冲洗液sIgA抗体;脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平。末次免疫后4周,采用空肠弯曲菌重复攻击的方式进行灌胃攻击,攻击后,根据动物疾病指数评价疫苗临床保护率。结果:构建的重组表达质粒能在Hela细胞内表达,重组蛋白。疫苗免疫小鼠后,不仅诱导了高水平血清IgG、IgA抗体,而且诱导了高水平粘膜sIgA抗体。其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击。结论:构建的DNA疫苗经粘膜免疫能诱导小鼠产生较高水平的特异性免疫应答,能有效预防空肠弯曲菌感染。     

仙台病毒核酸疫苗对小鼠脾脏淋巴细胞分型的作用

目的评价核酸疫苗pVAX1-F和pVAX1-HN的免疫效果。方法用成功构建的仙台病毒天津株HN基因和F基因的真核表达质粒pVAX1-F和pVAX1-HN,单独或联合免疫幼鼠,采用流式细胞技术(Flow Cytometry,FCM)。检测免疫后第7、14、21和28天的脾脏淋巴细胞分型,观察它们在幼鼠体内的免疫应答作用。结果淋巴细胞分型结果显示,构建质粒能够增高CD3+CD4+/CD3+CD8+比值、B细胞和NK细胞百分含量。结论构建的核酸疫苗pVAX1-F和pVAX1-HN能够有效增强小鼠的细胞特异性免疫能力。     

肺表面活性蛋白A在免疫炎症反应中的作用

表面活性蛋白A(SP-A)是肺表面活性物质(PS)的重要组成部分，结构上属于胶凝素家族成员之。SP-A除具有降低肺表面张力、维持肺泡正常生理功能的作用外，还参与了肺的局部防御和免疫调节过程。本文就近年来SP-A在免疫炎症调节方面的研究进展作一综述。     

小鼠不同基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系研究

目的 研究实验小鼠基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系.以保证根据小鼠基因型选择适于进行免疫应答检测的实验小鼠,保证进行疫苗免疫应答检测时的规范化和标准化.方法 应用小鼠NIH1、2、3个种群和BALB/c、DBA/1共3种不同品系和同一品系不同种群的小鼠各40只,乙肝疫苗稀释4个不同的稀释度,每个稀释度注射动物10只.酶标法检测乙肝疫苗免疫效力,测定乙肝疫苗的半数有效剂量(ED50)值,再通过微量细胞毒法和PCR方法 检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分比,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性.结果 重组乙肝疫苗(酿酒酵母)经BALB/c鼠检测疫苗的ED50值为2.5μg/ml;经1号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.0μg/ml;经2号种群NIH鼠检测疫苗的EDM50值为1.3μg/ml;经3号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.3μg/ml;经上海某公司DBA/1鼠检测疫苗的ED50值为0.8μg/ml,对乙肝疫苗的效力反应最强.根据<中国药典>2005年版三部的规定,疫苗的ED50值为≤1.5μg/ml.所以得出的结果 是2号种群NIH鼠和DBA/1鼠检测疫苗是合格的.基因检测结果 DBA/1为H-2q近交系小鼠,2号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,3号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是30%,而1号种群NIH小鼠含有H-2q型基因百分比为56%,因此DBA/1小鼠和2号种群NIH鼠对乙肝疫苗均产生高应答效应,且远远高于免疫基因型为H-2d的BALB/c小鼠.结论 在进行乙肝疫苗效力鉴定时选择含有q型基因较多的NIH小鼠作为检测动物可以取得较好的应答效果.     

白细胞介素12提高HBV基因疫苗的免疫应答

目的观察编码IL-12的真核表达载体对HBV基因疫苗诱导Babl/c小鼠免疫应答的影响。方法肌肉注射基因疫苗pCR3.1-S及IL-12的真核表达载体pWRG3169,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h5iCr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。结果免疫8w后,pCR3.1-S及共注射IL-12真核表达载体组血清450nmA值分别为0.87±0.1及1.67±0.15。CTL细胞杀伤活性分别为50.5%±6.4%及73.3%±8.8%,两组差异显著,CTL细胞杀伤活性在抗CD4单克隆抗体处理脾细胞悬液后无明显改变,抗CD8单克隆抗体处理后明显降低。结论IL-12的真核表达载体能提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。     

The acute inflammatory reaction

A major theme in current developments in this field has been the realization that the target tissue, in particular the endothelium, has an active role in initiating and participating in inflammatory reactions and is not a passive target, as was previously thought. Attempts to delineate the mechanisms involved have benefited immeasurably from the application of the modern techniques of molecular and cellular biology, and will continue to do so. It is axiomatic that a fuller understanding of these mechanisms will result in the development of new strategies designed to block the acute inflammatory response more specifically and effectively.     

Induction of SARS-nucleoprotein-specific immune response by use of DNA vaccine

Induction of effective cytotoxic T lymphocyte (CTL) and/or a specific antibody against conserved viral proteins may be essential to the development of a safe and effective severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-Cov) vaccine. DNA vaccination represents a new strategy for induction of humoral and cellular immune response. To determine the ability of SARS-Cov nucleoprotein (N protein) to induce antiviral immunity, in this report, we established a stable C2C12 line expressing SARS-Cov N protein, which was used as a target for specific CTL assay. We also expressed recombinant N proteins in Escherichia coli and prepared N protein-specific polyclonal antibodies. C3H/He mice were immunized with N protein-expressible pcDN-fn vector by intramuscular injections. We found that the DNA vaccination induced both N protein-specific antibody and specific CTL activity to the target. When C3H/He mice were immunized by three separate injections, high antibody titre (1:3200-1:6400, average titre is 1:4580) and high CTL activity (67.4+/-8.4% (E:T = 25:1), 69.6+/-6.7% (E:T = 50:1) and 71.8+/-6.2% (E:T = 100:1)) were observed. In the case of two vaccine injections, CTL activity was also high (56.6+/-12.7% (E:T = 25:1), 57.4+/-11.7% (E:T = 50:1) and 63.0+/-6.3% (E:T = 100:1)) However, antibody titres were much lower (1:200-1:3200, average titre is 1:980). Our results suggest that SARS-Cov nucleocapsid gene might be a candidate gene for SARS DNA vaccination.     

口服生长抑素基因疫苗对小鼠免疫影响的初步研究

目的 研究口服生长抑素(SS)基因疫苗在体内表达HBsAg/SS融合蛋白情况.方法 用SS基因疫苗免疫小鼠,姬姆萨染色观察细菌在体内分布;观察小鼠质量增长情况;应用免疫组化法显示小肠乙肝表面抗原(HBsAg)和SS阳性细胞的分布及数量变化.结果 免疫后16 h空肠细菌数量达到高峰,免疫后4 d脾脏出现细菌;两试验组小鼠体质量较对照组均无显著变化;首次免疫后第3周两试验组小肠内出现HBsAg阳性细胞并维持至第7周;首次免疫后第5、7周两试验组小肠内SS阳性细胞数量比对照组极显著减少(P＜0.01).结论 口服型SS基因疫苗免疫小鼠后可在小肠表达HBsAg/SS融合蛋白,同时SS阳性细胞数量减少,推测该基因疫苗刺激机体表达蛋白后能产生SS抗体.