SigB (Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成

目的 探讨金黄色葡萄球菌SigB(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响.方法 比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成.进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变位点.分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体pBT2,构建同源重组质粒pBT2-sigB(Q225P),电转化至金葡菌RN4220,再将经RN4220修饰后的质粒电转入Newman.利用pBT2质粒对温度敏感的特点筛选Newman-sigB(Q225P).利用同样的方法构建sigB敲除菌株Newman-△sigB,并构建回补菌株Newman-△sigB/sigB以及Newman-△sigB/sigB(Q225P).比较这些菌株的生物被膜形成差异.结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现XQW的sigB基因发生(Q225P)突变.构建的同源重组质粒pBT2-sigB(Q225P)及pBT2-△sigB转化金葡菌Newman后,经筛选,获得Newman-sigB(Q225P)及Newman-△sigB菌株;回补质粒pLI50-sigB及pLI50-sigB (Q225P)转化Newman-△sigB,筛选获得回补菌株Newman-△sigB/sigB及Newman-△sigB/sigB(Q225 P).经过结晶紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现Newman-sigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;Newman-△sigB/sigB(Q225P)的生物被膜形成能力明显高于Newman-△sigB/sigB.结论 SigB (Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力.     

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的筛选和生物被膜形成能力的研究

目的 调查笔者医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分离率,并探索hVISA菌株的生物被膜形成能力。方法 收集临床139例MRSA菌株,采用浓度为5mg/L的替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)进行hVISA筛选,应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)法进行确证,报告笔者医院hVISA的发生率。用刚果红琼脂和结晶紫染色法检测hVISA的生物被膜形成能力,微量肉汤稀释法和K-B纸片法检测生物被膜中细菌对抗生素的敏感度。结果 经过PAP-AUC方法检测,从139株MRSA中确定1例为hVISA阳性,hVISA的分离率为0.72%。分离出来的hVISA菌株可以形成生物被膜,hVISA菌株的最低抑制生物被膜浓度(MBIC)明显升高,K-B法检测显示它对利奈唑胺和替加环素敏感。同时,研究发现低浓度的万古霉素可能对生物被膜的形成有促进作用。结论 笔者医院hVISA的发生率虽然不高,但此菌株可以形成生物被膜,形成生物被膜后细菌对万古霉素敏感度降低,需要引起临床的高度重视,此时可尝试换用利奈唑胺或替加环素。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的调查分析研究

目的：了解四川攀枝花地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行情况，制定本地区MRSA控制措施。方法：以本地区三所三级医院医护人员、住院病人为调查对象。结果：医务人员MRSA携带率3．2％，病人携带率6．2％，住院时间越长携带率越高，使用抗菌药的病人比未使用抗菌药物的携带率高，本次分离的MBSA对头孢一代，大环内酯，喹诺酮类高度耐药，未分离到万霉素耐药株。结论：本地区要严格执行消毒隔离制度，缩短病人住院时间，合理使用抗菌药物以降低MRSA携带率。     

金黄色葡萄球菌的3种凝固酶鉴定方法研究比较

目的 评价3种鉴定金黄色葡萄球菌方法的敏感度和特异性.方法 临床分离的651株革兰阳性球菌,经革兰染色、触酶试验、VITEK2鉴定后,对试管法、玻片法、乳胶血凝法(slidexstaph-kit),鉴定葡萄球菌3种实验方法进行评价.3种实验方法结果不一致的菌株进行重复试验.用VITEK2作为“金标准”,比较其他3种凝固酶方法的敏感度、特异性、准确性.结果试管法1株菌鉴定假阳性;玻片法有8株菌鉴定假阳性,乳胶血凝法有株4假阳性.结论 试管法敏感度和特异性最好,其次是乳胶血凝法,玻片法的假阳性较高.     

trap基因表达在表皮葡萄球菌生物膜形成及附属基因调节(agr)系统活化中的作用

目的研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用。方法采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型,二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱,实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNAⅢ的转录水平,CLUSTALX对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析．Mega软件构建进化树。结果比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC35984株与不形成生物膜的ATCC12228株生长中期的蛋白质组,发现ATCC35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC12228株。转录水平的检测显示ATCC12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录,但RNAⅢ的转录水平未降低。SE1457株agr系统突变后,RNAⅢ的转录明显降低,trap基因的转录无变化．RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加,trap基因转录保持不变．trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守,但存在明显的进化距离。结论在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中,trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性;并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物;表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之问存在差异,可能与其功能差异相关。     

金黄色葡萄球菌(普通型、L型)的药敏试验及临床应用

目的分析金葡菌及其L型耐药性变化规律,指导临床合理应用抗生素。方法采用K-B法对临床标本中分离出的金葡菌及其L型做药敏试验。结果金葡菌对苯唑西林和头孢他啶呈高度耐药,对头孢噻肟的耐药率上升相对较快。220株L型金葡菌对苯唑西林和氨苄西林呈高度耐药。结论金葡菌及其L型对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类等耐药率的逐年上升与药物在临床广泛应用、用法不合理及对药敏试验结果没有足够重视而采取经验用药有关。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

WONCA研究论文摘要汇编(七十九)——茶和咖啡消耗与鼻内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的已有研究发现,热茶和咖啡具有抗微生物的特性。本研究是为了探讨茶、咖啡或两种消耗是否与少见鼻内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)相关。方法我们针对源自调查了美国非专门机构人群中,咖啡、热茶和软饮料与MRSA鼻内携带之间关系,2003—2004年国家健康与营养监测调查的数据,完成了二次分析。结果评估有250万人为MRSA鼻内携带者。调整年龄、种族、性别、收入额、目前健康状况、前12个月住院和前1个月抗生素使用后,进行校正逻辑回归分析,相对于无热茶消耗的个体,报告有热茶消耗者中仅1/2有MRSA鼻内携带[OR=0.47;95%CI(0.31,0.71)]。相似,相对于无咖啡消耗个体,报告有咖啡消耗者MRSA鼻内携带风险要减少约1/2[OR=0.47;95%CI(0.24,0.93)]。结论热茶或咖啡消耗与MRSA鼻内携带要低可能性相关。我们的发现提升了减少MRSA鼻内携带新方法的使用概率,这种方法安全、便宜且容易接受。