天花粉蛋白新有效组分的纯化及相对分子质量测定

目的：研究从新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分的方法,测定新有效组分的相对分子质量,并对野生型及人工培植型植物来源的新有效组分进行对比研究。方法：采用粉碎、盐析、透析和离子交换层析、分子筛层析方法分别从野生型及人工培植型新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分,应用LDI-1700激光解吸电离飞行时间质谱仪测定其相对分子质量。结果：从野生型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为33 388.9,产率为1.2 mg•g^-1;从人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为32 116,产率为0.3 mg•g^-1。两者的相对分子质量高于已应用于临床的天花粉蛋白针剂（相对分子质量为26 000）及从美国产的栝楼中分离纯化出的TAP29（相对分子质量为29 000）,野生型产率高于人工培植型的产率。结论：分别从野生型与人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量及含量不同,且两者的相对分子质量亦不同于天花粉蛋白针剂及TAP29。     

草药红丝线的降压成分

从民间降压草药红丝线Peristrophe roxburghiane(Schalt)Berm.全草的乙醇提取物水不溶部位中分得八个结晶单一成分,经理化数据和光谱分析,分别鉴定了三个结晶为羽扇豆酮(Lupenone).羽扇豆醇(Lupeol)和β-谷甾醇(β-sitosterd).已有药理试验表明羽扇豆醇和β-谷留醇具有良好的降压作用。     

蛇床子中喔斯脑、欧芹属素乙的提取分离及鉴定

从蛇床果实的乙醇提取物中经柱层析、薄板层析、高效液相层析证明有八种成分,已测定其中喔斯脑(Qsthol,欧芹酚—7—甲醚)及欧芹属素乙(imperatonin)为主要成分,并分离得到单体,其它六种化合物因含量少,未进一步进行分离。     

牛黄解毒丸(蜜丸)中黄芩甙和番泻甙的分离及测定方法研究

本文在不分离的情况下,研究在70%甲醇提取液中和70%乙醇提取液中分别测定牛黄解毒丸的番泻甙和黄芩甙,并探索二组分薄层层离的条件。结果显示:采用和三氯化铁—氢氧化钠比色法直接测定番泻甙(在490nm 测定),不受干扰,显色稳定时间为10分钟,回收率为95.5%(n=8)。黄芩甙采用内标标准系列工作曲线外推法,在紫外276nm 处测定,方法回收率为98.9%(n=5)。薄层层析条件为硅胶 G 板,二甲基甲酰胺:丙酮为1.5:10预展一次后,作分配薄层层离,正丁醇:醋酸:水为4:1:5,展距:2cm 后,获得二组分的△Rf 达0.3,斑点分离清晰度高,题示物二组分分离获满意结果。本文还检测了二种不同工艺(已灭菌和未灭菌)的牛黄解毒丸二组分含量变化情况,其中黄芩甙测定获得 CV%=0.438%,r=0.9997,发现未灭菌产品含量均稍高。     

响应面法优化玉竹多糖的酶法提取工艺

[目的]优化酶法提取玉竹多糖的工艺.[方法]在单因素实验的基础上,采用响应面分析法对影响酶法提取玉竹多糖得率的主要因素(酶解时间、酶解温度和酶用量)进行优化,建立了影响因素与玉竹多糖得率之间的函数关系.[结果]玉竹多糖酶法提取的最佳工艺为:木瓜蛋白酶加酶量为6.5 g/L,酶解温度为50C、酶解时间为125 min,在此条件下,玉竹多糖得率达到100.89 mg/g,试验结果与模型预测值相符.[结论]Box-Behnken设计结合响应面分析法可以很好地对玉竹多糖酶法提取工艺进行优化.     

人衰老相关DNA片段的筛选及特征分析

目的:探索衰老相关新基因.方法:采用RAPD法筛选衰老相关的DNA片段,采用Southern blot 分析基因状态,Northern blot 分析mRNA水平.结果:筛选出衰老特异的DNA片段,长894 bp,命名为sad.将sad片段克隆、测序,查询GenBank,确认为一种新的衰老相关序列,基因登录号为AQ324104.Southern blot分析表明,sad基因可能是一种单拷贝基因;sad在衰老2BS细胞中的Southern blot图谱不同于年轻细胞,而与人胃癌细胞系BGC-823类似.Northern blot分析显示,sad基因具有表达活性,其RNA长约0.5 kb,相对水平在各代龄的细胞间差异无显著性.结论:sad是一种新的与衰老相关的DNA片段,sad基因可能为单拷贝基因,具有表达活性.     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术 ,以结核杆菌H37Rv的培养滤液免疫Balb/c小鼠 ,以H37Rv及BCG抗原同时筛选杂交瘤细胞 ,得到了 7株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株 ,并对它们的特性作了初步鉴定。在 7株单克隆抗体杂交瘤中 ,5株 (2C5、2C11、2D1、2E11及 3D3)为IgG1亚类 ,另两株 (3C3及 5D8)为IgM。腹水经ELISA检测 ,效价可达 10 -3 ～ 10 -4 ,同时应用ELISA及免疫印迹试验分析了 7株单抗的种间反应性 ,结果 7株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应 ,其中 1株单抗 (5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应 ,提示结核抗原组分十分复杂 ,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇 ,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇。将这 7株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估     

香砂养胃制剂中挥发油β-环糊精包结的实验研究

用正交试验法考察香砂养胃制剂中挥发油的β－ 环糊精（β－ ＣＤ） 包结, 实验研究以挥发油与β－ ＣＤ的比例为１ｍＬ∶８ｇ, ５５ ℃包结１ｈ 为工艺条件。经ＧＣ－ ＭＳ分析, 证明包结前后挥发油主要成分基本一致, β－ ＣＤ包结物能有效地保存挥发油的有效成分     

加味左金丸胶囊剂的药效学及含量测定研究

加味左金丸由黄连、吴茱萸、木香组成,本文将原处方制备成胶囊剂后,进行了药效学和含量测定的研究,检验制备工艺对药效和主要成分含量的影响。胶囊剂对大鼠应激性溃疡发生指数抑制率为66.86％,与雷尼替丁类似。对盐酸—乙醇所致大鼠胃粘膜损伤的溃疡指数抑制率为99.38％。以上药效有剂量依赖性。实验结果与加味左金丸汤剂的结果(已发表资料)基本一致。根据《药典》的技术方法,测定胶囊剂中小檗碱的含量,结果为6.6％。参考《药典》对类似处方制剂的规定(香连丸小檗碱含量不得少于6.0％,左金丸不得少于5.6％),提示胶囊剂的小檗碱含量符合要求,可作为质量标准控制的参考。     

岗梅根化学成份定性鉴别及其方法的探讨

本文为探讨中药岗梅根化学成份的定性鉴别方法,用各种溶剂对岗梅根所含化学成份进行分离、预试。结果表明:岗梅根所含生物硷可能是其主要有效成份。同时对岗梅根所含生物硷进行提取,并对其氯仿液进行薄层层析、纸电泳分析和荧光分析。认为在对生药岗梅根化学成分进行分离、预试的基础上,采用薄层层析、电泳和荧光分析技术对生药岗梅根进行定性鉴别,结果比较准确,且适合我国国情。     

不同提取工艺芹菜籽油得率及芹菜甲素和总酞内酯含量的研究

【目的】以不同提取工艺下芹菜籽油的得油率及芹菜甲素、总酞内酯的含量评价各提取工艺。【方法】采用有机溶剂提取法、索氏提取法、水蒸气蒸馏法3大常规方法及亚临界和超临界提取法提取芹菜籽油。并分别采用高效液相色谱法及紫外可见分光光度法考察芹菜籽油中芹菜甲素及总酞内酯的含量。【结果】不同提取工艺下芹菜籽油得油率、芹菜甲素与总酞内酯的含量差别较大,范围分别为0.30%~20.02%、1.40%~10.13%、4.74%~17.65%。【结论】提取芹菜甲素以R134a与丁烷为溶剂的亚临界提取工艺为佳,芹菜甲素转移率相当;提取总酞内酯则以二甲醚为溶剂的亚临界提取法为优。     

RS21-C6分子的原核表达、纯化、抗体制备及免疫组织化学分析

目的:在原核细胞中表达胸腺发育相关分子RS21-C6重组蛋白,制备RS21-C6的多克隆抗体,研究RS21-C6分子在胸腺组织中的分布.方法: 在大肠杆菌中表达和纯化RS21-C6重组蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体,以免疫组织化学实验分析RS21-C6分子在小鼠胸腺的分布.结果: 成功表达和纯化了RS21-C6重组蛋白,并制备获得高效价的特异性多克隆抗体.免疫组织化学显示RS21-C6分子在胸腺髓质区有较强的表达,在皮髓质交界处和皮质区也有散在分布.从胸腺细胞分布类型来看,RS21-C6分子共表达于胸腺淋巴细胞和基质细胞.结论: RS21-C6分子在胸腺分布广泛,且具有较高的表达水平,推测其在胸腺细胞发育的不同阶段均可发挥作用,是一个可能具有多种功能的胸腺发育相关分子.