雷公藤红素阻断LP-1人多发性骨髓瘤细胞周期及抑制血管生成的实验研究

目的研究雷公藤红素对于多发性骨髓瘤细胞株LP-1细胞周期及血管生成的影响。方法采用台盼蓝染色法考察雷公藤红素对细胞生长曲线的影响;划痕法检测雷公藤红素对血管内皮细胞体外血管生成能力的影响;采用碘化吡啶(PI)染色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞周期的调控作用。结果雷公藤红素作用浓度为2μM时即可引起细胞生长停滞,雷公藤红素对人多发性骨髓瘤LP-1细胞的生长曲线具有明显的抑制作用,这种效应具有明显的剂量-效应关系。雷公藤红素能剂量依赖性地抑制人血管内皮细胞对划痕损伤的修复能力,雷公藤红素1μM作用24 h即可引起划痕修复停滞,并引起部分血管内皮细胞死亡,在作用48 h后对人脐静脉内皮细胞表现出明显的杀伤活性。雷公藤红素以不同浓度作用24 h后随着雷公藤红素浓度增加,人多发性骨髓瘤细胞进入G1期比例明显增多,S期细胞明显减少。结论雷公藤红素能抑制骨髓瘤细胞株的生长,并抑制人脐静脉血管内皮细胞体外血管生成能力;雷公藤红素可将人多发性骨髓瘤LP-1细胞周期阻断于G1期,从而抑制其后续的DNA合成及有丝分裂。     

苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡及其对Bcl-2、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

雷公藤红素诱导多发性骨髓瘤细胞系KMS26凋亡及对细胞周期的影响

目的：探讨雷公藤红素（celastral）对多发性骨髓瘤细胞株KMS26的抑制机理及对细胞周期的影响。方法：使用CCK-8法抑制作用;用V—Annexiin—FITC及PI双染色、sub—S1期分析、与广谱caspase抑制剂Z—VAD—FMK共培养试验三种方法观察诱导凋亡作用;流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果：南蛇藤红素以IC50值为0．75μM的低剂量,通过诱导凋亡作用,抑制KMS26细胞增殖,并使细胞阻滞在GO,G1期,而S期细胞明显减少。结论：雷公藤红素以较低的剂量通过诱导凋亡作用抑制KMS26细胞增殖,具有潜在的临床应用价值。     

通关藤提取物体外对Jurkat、Raji、RPMI8226细胞的抑制作用研究

目的探讨通关藤提取物对Jurkat、Raji、RPMI8226细胞的抑制作用及可能机制。方法以不同浓度通关藤提取物处理Jurkat、Raji、RPMI8226细胞,MTT法检测其对3种细胞的抑制作用,Annexin V/PI双染法观察细胞形态并检测细胞的凋亡率,JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平。结果通关藤提取物对Jurkat细胞的抑制作用最强,对RPMI8226细胞最不敏感。25,50μL/mL的通关藤提取物能降低Jurkat、Raji细胞内ΔΨm,并促进其凋亡。100μL/mL的通关藤提取物也可降低RPMI8226细胞ΔΨm而诱导其凋亡。结论通关藤提取物体外对部分淋巴细胞白血病细胞株和骨髓瘤细胞株有不同程度的诱导凋亡作用,可能是通过降低ΔΨm途径触发这些细胞凋亡。     

尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤细胞株RPIMI 8226增殖及其机制研究

目的 探讨尿多酸肽（CDA-2）抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖作用及其机制。方法 采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法检测CDA-2对RPMI8226抑制作用并筛选研究浓度;通过Hoechst33258、Annexin-V/PI、细胞周期分析、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测CDA-2诱导RPMI8226凋亡作用;使用Western Blot法检测caspase-8、caspase-3及其激活物的表达改变;半定量RT-PCR法检测TNF、FADD、TRAF3mRNA表达。结果 CDA-2能够抑制RPMI8226细胞株增殖,并呈浓度依赖性,IC50为1.64mg·mL1;经CDA-2作用后,Hoechst33258荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡小体,Annexin-V/PI分析示早期凋亡细胞比例呈时间依赖增加,细胞周期分析提示呈浓度依赖上调凋亡峰及下调G1期比例,DNA凝胶电泳可见断裂成180~200bp及其倍数的片断梯形条带,故CDA-2可诱导RPMI8226细胞株凋亡;WesternBlot检测发现随药物作用时间延长caspase-8、caspase-3表达明显下降,而active-caspase8、active-caspase3表达上升;半定量RT-PCR证实凋亡相关基因TNF、FADD、TRAF3mRNA表达上调。结论 CDA-2可抑制RPMI8226增殖,且可通过死亡受体途径诱导细胞凋亡。     

榄香烯对B细胞淋巴瘤Raji细胞株的体内外抑制作用

目的:探讨榄香烯对B细胞淋巴瘤Raji细胞株的体内外作用。方法:不同浓度的榄香烯体外作用Raji细胞不同时间,CCK-8法检测增殖抑制作用,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,DAPI染色进行细胞核形态学分析,PI单染色法检测细胞周期改变;动物实验观察榄香烯体内抑瘤作用。结果:榄香烯对Raji细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;榄香烯能诱导Raji细胞凋亡,呈量效关系;DAPI染色显示榄香烯作用Raji细胞具有凋亡细胞核的特征性核形态;细胞周期分析显示G0/G1期细胞相对增多、S期和G2/M期细胞均相对减少;榄香烯明显抑制Raji细胞在SCID小鼠体内增殖。结论:榄香烯对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制可能是通过G0/G1期阻滞导致细胞凋亡发挥效用的。     

雷公藤红素诱导弥漫大B淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨雷公藤红素对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用不同浓度的雷公藤红素处理弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞,MTT法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting实验分析不同浓度的雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中YAP1蛋白水平.结果 雷公藤红素作用OCI-LY-19细胞后,细胞的活力明显抑制,24h的IC50为0.56μM,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05).随着药物作用浓度升高,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),YAP1蛋白水平下降(P<0.05).结论 雷公藤红素能抑制人弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY-19细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制YAP1蛋白表达有关.     

二甲双胍联合马法兰抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的实验性研究

目的探讨二甲双胍联合马法兰抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的效果。方法选择骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266作为研究细胞株,将不同浓度的二甲双胍与马法兰联合作用于细胞株24、48、72 h,采用CCK-8法检测二甲双胍与马法兰对骨髓瘤细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的RPMI8226细胞株凋亡率均显著高于浓度为20mmol/L和5 mmol/L(P<0.05);当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的U266细胞株凋亡率均显著高于浓度为20 mmol/L和5 mmol/L(P<0.05);观察组C骨髓瘤细胞RPMI8226、U266凋亡率均显著高于观察组A、观察组B,且当二甲双胍和马法兰浓度为80 mmol/L时,培养24、48、72 h的U266细胞株凋亡率均显著高于浓度为20 mmol/L和5 mmol/L。结论二甲双胍与马法兰联合使用抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的效果明显,可有效促使细胞凋亡,可在临床上广泛推荐应用。     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

雷公藤红素的药理作用研究进展

［摘要］雷公藤红素是雷公藤的一个单体化合物,具有确切的抗炎、免疫抑制及抗癌作用。研究表明,雷公藤红素对狼疮性肾炎肾小球硬化有防治作用,对支气管哮喘气道炎症有抑制作用,对结肠炎大鼠有显著保护作用;同时具有诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管内皮细胞生长的作用。     

四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。     

维拉帕米对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的维拉帕米对HSCs处理48 h,CCK-8试剂盒(cell counting Kit-8)检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化,流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测HSCs的凋亡率。结果维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为(150±10)mmol·L-1;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变;Annexin-V/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs凋亡,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维拉帕米可抑制HSCs的增殖,诱导其凋亡。     

Effect of genistein on mouse blastocyst development in vitro

AIM: To examine the cytotoxic effects of genistein, an isoflavone compound, on early postimplantation embryonic development in vitro. METHODS: Mouse blastocysts were incubated in medium with or without genistein (25 or 50 micromol/L) or daidzein (50 micromol/L) for 24 h. Cell proliferation and growth was investigated by dual differential staining, apoptosis was analyzed by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) assay, and apoptotic or necrotic cells were visualized by Annexin-V and propidium iodide (PI) staining. Implantation and postimplantation development of embryos were measured by in vitro development analysis. RESULTS: TUNEL staining and Annexin-V/PI staining showed that genistein dose-dependently increased apoptosis in mouse blastocysts, while daidzein, another soy isoflavone, had no such effect. The pretreatment of the blastocysts with genistein caused fewer cells than the control group and this effect was primary in the inner cell mass. The genistein-pretreated blastocysts showed normal levels of implantation on culture dishes in vitro, but significantly fewer genistein-pretreated embryos reached the later stages of embryonic development versus the controls, with many of the former embryos dying at relatively early stages of development. In addition, genistein treatment decreased the development of morulas into blastocysts, and dietary genistein was found to induce cell apoptosis and decrease cell proliferation in an animal assay model of embryogenesis. CONCLUSIONS: Our results collectively indicate that genistein treatment of mouse blastocysts induces apoptosis, decreases cell numbers, retards early postimplantation blastocyst development, and increases early-stage blastocyst death in vitro, while dietary genistein appears to negatively affect mouse embryonic development in vivo by inducing cell apoptosis and inhibiting cell proliferation. These novel findings provide important new insights into the effect of genistein on mouse blastocysts.     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

三萜皂苷Saxifragifolin D抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM生长并诱导细胞凋亡作用研究

目的研究Saxifragifolin D(SD)对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的生长抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察SD对HepG2/ADM细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞仪分析SD对细胞周期的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,JC-1染色观察SD对细胞内线粒体膜电位的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-9,caspase-3和PARP的激活及c-Raf,MEK和ERK蛋白的表达和磷酸化水平。结果 SD可以明显抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的增殖。细胞周期检测发现SD诱导细胞产生亚二倍体凋亡峰,同时细胞凋亡率也由对照组的5.3%增加到34.8%和47.8%。线粒体膜电位检测结果显示SD导致细胞内线粒体膜电位的明显降低。Western blot检测结果表明caspase-9,caspase-3被激活,PARP被剪切活化,cytochrome C由线粒体释放至胞质,c-Raf、MEK和ERK蛋白的磷酸化水平降低。结论 SD可以抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与线粒体功能障碍及抑制c-Raf/MEK/ERK通路的活化有关。     

2-苯基-3,4-噻二唑[3,2-α]并嘧啶-7-酮对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及相关因子表达的影响

目的研究新化学合成药物2-苯基-3,4-噻二唑[3,2-α]并嘧啶-7-酮(TPh)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及相关因子表达的作用。方法MTT法检测空白对照组和不同浓度TPh(0.6、0.4、0.2、0.1和0.05μmol·mL^-1)组培养24、48、72 h后对HeLa细胞增殖的作用,流式细胞术检测TPh对HeLa细胞周期的影响,Annexin-V FITC/PI双染检测TPh对HeLa细胞凋亡的影响,JC-1染色观察TPh对HeLa细胞线粒体膜电位的影响,Western blotting法检测凋亡相关因子表达情况。结果与空白对照组相比,TPh组Hela细胞增殖被显著抑制,HeLa细胞G0/G1期比例增加、G2/M期比例减少,HeLa细胞线粒体膜电位降低,HeLa细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9表达增加、凋亡细胞比率增加(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性趋势。结论TPh可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并促进凋亡,这可能与其激活细胞内源性和外源性凋亡途径有关。     

新型化合物F-2对人肺癌NCI-H520细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：探讨新型化合物F-2对人非小细胞肺癌NCI-H520细胞增殖迁移及凋亡的影响。方法： CCK-8实验检测肺癌细胞增殖情况;采用划痕实验检测化合物对H520细胞迁移的情况;倒置显微镜观察化合物刺激对细胞形态的影响;流式细胞术实验检测化合物对细胞凋亡的影响;Western blot实验检测化合物对细胞迁移及凋亡相关蛋白表达的影响。结果：化合物对H520细胞增殖有明显的抑制作用,且与浓度和时间呈依赖性关系。划痕实验结果表明化合物能够明显抑制肿瘤细胞迁移,并且western blot 实验结果表明化合物处理H520细胞后可上调Ｅ-cadherin的表达,下调N-cadherin蛋白的表达。Annexin-V／PI双染法结果显示,化合物可诱导H520细胞发生凋亡,且随着药物浓度增加凋亡率上升,并且增加了BaX/BcL-2蛋白表达比率。结论：化合物能够明显抑制肺癌细胞的增殖、迁移及诱导细胞凋亡,可能是通过阻断肿瘤细胞EMT过程,调节细胞凋亡过程中相关基因表达从而发挥抗肿瘤作用。