高血压病人小动脉中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及ets样基因1的蛋白表达

目的 研究细胞外信号调节激酶系统(ERK)及其下游底物ets样基因1(Elk-1)在原发性高血压中的作用.方法 采用免疫组织化学方法,对比观察高血压和非高血压病人胃肠小动脉血管平滑肌细胞及内皮细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和ets样基因1(Elk-1)的磷酸化情况.结果 高血压组胃肠小动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率(8.31%)明显高于非高血压组(0.53%),P＜0.05;高血压组内皮细胞中磷酸化ERK1/2的阳性率(4.97%)明显高于非高血压组(P＜0.05).高血压组胃肠小动脉血管平滑肌细胞中磷酸化Elk-1染色阳性率(3.53%)明显高于非高血压组(0.27%),P＜0.05.在血管平滑肌细胞、血管内皮细胞中磷酸化ERK1/2与磷酸化Elk-1的表达均有正相关关系.结论 原发性高血压患者的胃肠细小动脉血管平滑肌细胞以及内皮细胞中细胞外信号调节激酶及其下游底物Elk-1的磷酸化增加.     

替米沙坦对高血压大鼠血管前纤维蛋白1及ERK磷酸化水平的影响

目的：探讨替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）血管前纤维蛋白1（Profmn-1）及细胞外信号调节激酶（ERK1／2）磷酸化水平的影响。方法：选取10周龄SHR及其同源对照魏-凯氏（WKY）大鼠,给予替米沙坦（5～10mg／kg·d）或安慰剂,为期10周。尾套法测量大鼠尾血压。采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）和Western免疫印迹检测治疗后大鼠主动脉组织中Profilin-1mRNA和蛋白及ERK1／2磷酸化水平。结果：与WKY对照组相比,SHR大鼠血压明显升高[（126±3．5）mmHg：（195±6．1）mmHg],伴血管Profilin—1mRNA[（1．0±0．11）;（7．8±0．57）]及ERK硫酸化水平[（1．0±0．11）：（2．43±0．19）]表达明显升高（P均〈0．01）,而经替米沙坦治疗后SHR大鼠血压明显降低[替米沙坦低剂量组（169±6．2）mmHg,高剂量组（161±4．9）mmHg],伴Profilin-1mRNA[替米沙坦低剂量组（4．45±0．92）,高剂量组（1．95±0．41）]表达及ERK1／2磷酸化水平[替米沙坦低剂量组（1．62±0．20）,高剂量组（1．34±0．09）]明显下调（P均〈0．05）。结论：长期替米沙坦治疗可降低高血压大鼠血压水平,降低血管Profilin-1表达及ERK1／2磷酸化水平,提示替米沙坦对高血压血管重塑具有一定的保护功效。     

高血压大鼠血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞PAI-1表达的作用与ERK及AT1受体的关系

目的　观察高血压大鼠的血管内皮细胞和平滑肌细胞上胞外信号调节激酶 (ERK)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 1型受体 (AT1R)的变化与AngⅡ对纤溶酶原激活物抑制物 - 1(PAI 1)活性调节作用的内在因果关系 ,探讨AngⅡ促血管内皮细胞和血管平滑肌细胞合成与分泌PAI 1的受体和受体后信号途径。方法　将 16只健康SD大鼠随机分为腹主动脉缩窄型高血压组 (n =8)和假手术对照组 (n =8)。第 6周时应用放射免疫法检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中AngⅡ含量 ,发色底物法检测血浆与主动脉孵育液中PAI 1活性的变化 ,免疫组织化学法测定ERK和AT1R在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的表达。结果　血浆AngⅡ、血浆PAI 1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R均显著增高 (P均 <0 0 5 ) ,且四者之间互为正相关 (r =0 89～ 0 96 ,P <0 0 1～ 0 0 0 1) ,主动脉匀浆AngⅡ、主动脉孵育液PAI 1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R也显著增高 (P均 <0 0 5 ) ,且四者之间亦互为正相关 (r =0 86～ 0 96 ,P <0 0 1～ 0 0 0 1)。结论　高血压时AngⅡ具有诱导PAI 1合成与分泌的作用 ,可能与AngⅡ经AT1R激活ERK ,介导血管平滑肌合成及释放PAI 1有关。     

高血压大鼠血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞PAI-1表达的作用与ERK及AT1受体的关系

目的观察高血压大鼠的血管内皮细胞和平滑肌细胞上胞外信号调节激酶(ERK)和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)1型受体(AT1R)的变化与Ang Ⅱ对纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)活性调节作用的内在因果关系,探讨AngⅡ促血管内皮细胞和血管平滑肌细胞合成与分泌PAI-1的受体和受体后信号途径.方法将16只健康SD大鼠随机分为腹主动脉缩窄型高血压组(n=8)和假手术对照组(n=8).第6周时应用放射免疫法检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中Ang Ⅱ含量,发色底物法检测血浆与主动脉孵育液中PAI-1活性的变化,免疫组织化学法测定ERK和AT1R在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的表达.结果血浆Ang Ⅱ、血浆PAI-1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R均显著增高(P均＜0.05),且四者之间互为正相关(r=0.89～0.96,P＜0.01～0.001),主动脉匀浆Ang Ⅱ、主动脉孵育液PAI-1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R也显著增高(P均＜0.05),且四者之间亦互为正相关(r=0.86～0.96, P＜0.01～0.001).结论高血压时Ang Ⅱ具有诱导PAI-1合成与分泌的作用,可能与Ang Ⅱ经AT1R激活ERK,介导血管平滑肌合成及释放PAI-1有关.     

心房颤动患者心房组织的血管紧张素转换酶2表达及血管紧张素转换酶抑制剂干预的影响

目的 探讨心房颤动（房颤）患者心房肌组织中血管紧张素转换酶2（ACE2）的表达和血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）干预的影响及可能的信号传导途径。方法 选取接受开胸手术的风湿性心脏病患者47例,手术中取右心耳处心房肌标本。采用RT-PCR法检测心房肌ACE2和ACEmRNA水平,采用Western blot法检测ACE、ACE2、细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）和磷酸化的细胞外信号调节激酶1／2（pERK1／2）蛋白表达水平,应用放射免疫法检测心房肌组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平。结果 与窦性心律组相比,持续性房颤组心房肌组织中ACE2表达显著减少（P〈0．05）,而ACE的表达和AngⅡ含量显著增加（P〈0．05）。ERK1／2的活化水平在持续性房颤组较窦性心律组明显增加（P〈0．05）。与持续性房颤组相比,ACEⅠ干预组ACE2表达水平显著增加（P〈0．01）,ERK1／2的活化水平显著降低（P〈0．05）,而ACE表达和AngⅡ含量差异无统计学意义。结论 房颤患者心房肌组织中ACE2表达下调,ACE／ACE2平衡失调;ACEⅠ对房颤的长期临床效应可能与其上调ACE2、抑制有丝分裂素激活蛋白激酶信号途径有关。     

ERK1／2抑制剂PD98059对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的观察细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1／2）抑制剂PD98059对大肠癌细胞侵袭和转移的影响,探讨其可能机制。方法PD98059不同浓度（0、10、20、40μmo1／L）干预大肠癌细胞24h。用Boyden小室检测其体外运动和侵袭能力,Western blot法检测ERK1／2磷酸化蛋白和ERK1／2蛋白表达情况。结果随着PD98059剂量增大,大肠癌细胞穿膜数逐渐减少（P〈0．05）,磷酸化ERK1／2蛋白水平逐渐降低（P〈0．05）,ERK1／2蛋白水平无明显变化（P〉0．05）。结论PD98059能抑制大肠癌细胞的运动和侵袭力;其机制与PD98059抑制磷酸化ERK1／2有关。     

IGFBP-2对U251细胞增殖和ERK1／2磷酸化及核转移的影响

目的探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）对人胶质母细胞瘤细胞株U251细胞增殖的影响及可能通过的信号转导通路。方法MTT比色法检测IGFBP-2对U251细胞增殖的影响;Westernblot检测IGFBP-2对细胞外信号调节蛋白激酶（ERKI／2）磷酸化的影响;免疫荧光染色观察IGFBP-2对磷酸化ERK1／2细胞内转位的影响。结果各浓度外源性IGFBP-2（125、250、500ng／m1）均促进U251细胞增殖（P〈0．01）;在U251细胞中500ng／mlIGFBP-2作用5min磷酸化ERK1／2增加近1倍（P〈0．05）,作用30rain磷酸化ERK1／2增加2倍以上（P〈0．05）;500ng／mlIGFBP-2作用30min磷酸化ERK1／2发生核转移（P〈0．01）。结论IGFBP-2可能通过ERK信号通路促进U251细胞增殖。     

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。方法: 采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果: E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯（L-NAME）孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论: E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。     

整合素与钙通道协同调节人肾小管上皮细胞转分化过程及其机制

目的 用转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化,探讨转分化过程中可能的细胞信号转导机制。方法 25ml TGF-β1（5ng／ml）刺激HK-2,用特异性细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂PD98059（25μmol／L）和（或）钙通道拮抗剂Nifedipine（10μmol／L）处理;于不同时间段分别用免疫荧光、S-P法和免疫印迹法检测黏着斑激酶（FAK）、整合素β1（β1-Integrin）。结果 相比空白组TGF-β1成功诱导HK-2转分化;TGF-β1刺激15min后FAK-Tyr397磷酸化增强,60min达顶峰。相比TGF-β1对照组,PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化减弱（P〈0．05）,而Nifedipine无明显抑制作用（P〉0．05）,两者协同作用明显（P〈0．01）;PD98059使FAK蛋白表达呈时间依赖性减弱（P〈0．05）,PD98059及Nifedipine均呈时间依赖性抑制β1-Integrin表达（P〈0．05）。二者协同作用明显（P〈0．01）。结论 TGF-β1与Integrin信号通路之间通过ERK／FAK相互作用;钙通道参与调节FAK活化及FAK与β1-Integrin的表达。     

替米沙坦对高血压大鼠纤溶功能的作用机制

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促血管内皮细胞和平滑肌细胞合成与分泌纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)的受体和受体后信号转导途径以及替米沙坦对高血压大鼠纤溶参数的影响和可能机制。方法腹主动脉部分缩窄构建高血压大鼠模型,随机分成高血压组和替米沙坦组(3mg/·d)6周,另设假手术组为对照组。检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中AngⅡ含量,血浆与主动脉孵育液中纤溶酶原激活物(tPA)、PAI1活性,血管内皮细胞、平滑肌细胞胞外信号调节激酶(ERK)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)蛋白的表达。结果①高血压组血浆AngⅡ含量、血浆PAI1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.89～0.96,P<0.01～0.001)。主动脉匀浆AngⅡ含量、主动脉孵育液PAI1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.86～0.96,P<0.01～0.001)。②与高血压组比较,替米沙坦能明显抑制主动脉分泌PAI1的能力(P<0.05),降低血浆PAI1活性(P<0.05),升高血浆与主动脉孵育液中tPA活性、tPA/PAI1值(P均<0.05),明显改善纤溶参数。③替米沙坦组ERK和AT1R在血管内皮细胞和平滑肌细胞的表达较高血压组明显减少(P均<0.05)。结论替米沙坦抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞ERK和AT1R的表达,抑制AngⅡ引起的PAI1合成增加,可能是其改善纤溶功能的机制。     

鼻咽癌组织中 ERK1／2、p-ERK1／2和 MMP-9蛋白的表达变化及其相关性

目的：观察细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及相关性,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测75份NPC组织（ NPC组）和27份鼻咽黏膜慢性炎组织（炎性组）中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达,分析三者在NPC组织中表达的相关性。结果 NPC组ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白阳性表达率均显著高于炎性组（P均＜0．01）,χ2值依次为19．8、17．1、21．3;NPC组织中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白三者间的表达呈正相关（P均＜0．01）,其中ERK1/2与p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值分别为0．58、0．34,p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值为0．34。结论 ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白在NPC组织中呈高表达且三者间呈正相关,p-ERK1/2可能通过调节MMP-9表达参与NPC侵袭、转移。     

Targeting MEK1/2 blocks osteoclast differentiation, function and cytokine secretion in multiple myeloma

Osteolytic bone disease in multiple myeloma (MM) is associated with upregulation of osteoclast (OCL) activity and constitutive inhibition of osteoblast function. The extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) pathway mediates OCL differentiation and maturation. We hypothesized that inhibition of ERK1/2 could prevent OCL differentiation and downregulate OCL function. It was found that AZD6244, a mitogen-activated or extracellular signal-regulated protein kinase (MEK) inhibitor, blocked OCL differentiation and formation in a dose-dependent manner, evidenced by decreased alphaVbeta3-integrin expression and tartrate-resistant acid phosphatase positive (TRAP+) cells. Functional dentine disc cultures showed inhibition of OCL-induced bone resorption by AZD6244. Major MM growth and survival factors produced by OCLs including B-cell activation factor (BAFF) and a proliferation-inducing ligand (APRIL), as well as macrophage inflammatory protein (MIP-1alpha), which mediates OCL differentiation and MM, were also significantly inhibited by AZD6244. In addition to ERK inhibition, NFATc1 (nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic, calcineurin-dependent 1) and c-fos were both downregulated, suggesting that AZD6244 targets a later stage of OCL differentiation. These results indicate that AZD6244 inhibits OCL differentiation, formation and bone resorption, thereby abrogating paracrine MM cell survival in the bone marrow microenvironment. The present study therefore provides a preclinical rationale for the evaluation of AZD6244 as a potential new therapy for patients with MM.