胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

绿脓假单胞菌DNA的分子生物学研究

为使医院感染流行病学调查方法由生物学提高以分子生物学水平。方法选用不同限制性核酸内切酶（ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，ＥｃｏＲＩ），对绿脓假单胞菌主要生物型进行染色体ＤＮＡ酶切，凝胶电泳后获得限制性核酸内切酶（ＲＥＡ）图谱，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从Ｅ．Ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ，２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因，以（α－Ｐ＾３２）ｄＡＴＰ经缺口平移法标记ｒＤＮＡ作为广谱探针，经Ｓｏｕｔｈ     

中国人凝血因子Ⅸ基因MseⅠ多态性

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ），有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。     

一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变

目的　为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ） 患者的ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５ 还原酶（ｂ５Ｒ） 基因突变类型,探讨ＲＣＭ 发生的分子机制。方法　从已报道的１ 例ＲＣＭⅠ型患者的外周血白细胞中提取ＲＮＡ,应用逆转录聚合酶链反应法（ＲＴＰＣＲ） 扩增了ｂ５ＲｃＤＮＡ（９２１ ｂｐ）,测定其ｂ５ＲｃＤＮＡ的全部编码序列。结果　ｂ５ＲｃＤＮＡ基因的第２０３ 位密码子存在（ＴＧＣ→ＴＡＣ）Ｃｙｓ→Ｔｙｒ 的错义突变。经基因组ＰＣＲ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ） 分析证实该突变并非ＰＣＲ过程中的错配。结论　Ｃｙｓ２０３ →Ｔｙｒ 是ＲＣＭ 的一种新的基因突变类型     

人β3-肾上腺素能受体基因第64位密码子突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子突变频率的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增β３－肾上腺素能受体基因含编码６４位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｔＯＩ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１７４名汉族人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子点突变，其中野生型纯合子频率为６９．５％，杂合子频率为２７．６％，突变型纯合子频率为２．９％。突变等位基因频率为０．１７。结论该方法简便、快速、准确，适合于一般实验室检测及大规模的人群调查。     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

人β2—肾上腺素能受体基因第64位密码子突变频率的检测

建立一种简便，准确，实用的人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子突变的检测方法。方法应用聚合酶链反应特异性扩增β３－肾上腺素能受体基因含编码６４位氨基酸的基因 列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｔＯＩ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性图谱。     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见Gytb5R基因Arg^57…

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ＾５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ＾２２２→ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ＾２２２→Ｇｌｎ突变是中国人民     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症二个家系所见 Cytb5R 基因 Arg~(57)→Gln 突变

目的：探明遗传性高铁血红蛋白血症ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ）缺陷的分子机制。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，克隆３个遗传性高铁血红蛋白血症家系Ｃｙｔｂ５Ｒ９２１ｂｐ的ｃＤＮＡ编码序列，并用限制性酶切ＰＣＲ产物分析３个家系的基因组ＤＮＡ。结果：２个家系存在Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变，３个家系均未发现Ｇｌｕ２２２→Ｇｌｙ突变。结论：Ａｒｇ５７→Ｇｌｎ突变是中国人遗传性高铁血红蛋白血症的致病原因之一。     

ERCP用导丝的临床评价

ＥＲＣＰ用导丝的临床评价牟壮博孙升芝（济南市第三人民医院，济南２５０１０１）ＣｌｉｎｉｃａｌＡｓｓｅｓｍｅｎｔｏｆＧｕｉｄｅＷｉｒｅｉｎＥｎｄｏｓｃｏｐｉｃＲｅｔｒｏｇｒａｄｅＣｈｏｌａｎｇｉｏ－ＰａｎｃｒｅａｔｏｇｒａｐｈｙＭｕＺｈｕａｎｇｂｏ，Ｓ...     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—EFLP）分析维生素D受体（VDR） …

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型可以早期预测骨质疏松，为探讨便捷、可靠的实验条件供一般临床实验室使用，本文对比常规ＰＣＲ效果、不同ＮＤＡ模板量对ＰＣＲ和限制性内切酶酶切结果的影响。结果显示：热启动消除了引物错配和二聚体形成的机遇，使特异性条带大量扩增；模板量控制在２００～８００ｎｇ最佳，可避免太低不出现扩增条带，太高造成某些结果的误判。据此认为：     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测维生素D受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型的检测方法，以利于ＶＤＲ基因变异在骨质疏松研究中的应用。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ＶＤＲ基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｍⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果应用ＰＣＲＲＦＬＰ法检测了１１０名健康汉族人ＶＤＲ基因型，ｂｂ、Ｂｂ、ＢＢ基因型分布频率分别是９４％（１０３例）、６％（７例）、０。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于一般实验室及流行病学调查。     

变性梯度凝胶电泳中PCR实验条件的探讨

变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ）能可靠快速地检测含有一个碱基突变、达５３６ｂｐ的ＤＮＡ片段。当结合ＰＣＲ技术后，在一个引物的５′端加入３０～５０ｂｐ的ＧＣ片段（ＧＣ－ｃｌａｍｐ），...     

中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH—细胞色素b5还原酶基因L …

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测定分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因，限制性酶切分析其基因组ＤＮＡ。结果；发现一例ＲＣＭ患者ｂ５Ｒ基因第７２密码子存在新的错义突变（ＣＴＣ→ＣＣＣ）。结论：该突变导致ｂ５Ｒ蛋白第７２位亮氨酸被脯氨酸替换（Ｌ７２Ｐ）是该先证     

子宫颈及卵巢肿瘤中端粒长度的变化

探索端粒长度变化与妇科肿瘤中细胞繁殖状态的关系及其临床意义。方法常规酚－氯仿法提取组织ＤＮＡ后，与端粒寡聚核苷酸探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交，γ－＾３２Ｐ检测及光密度扫描法测定端粒平均长度。结果宫颈上皮内瘤样病变（ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ，ＣＩＮ），宫颈癌、卵巢良性交界性及恶性肿瘤中端粒限制性片段长度（ｔｅｌｏｍｅｒｉｃ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ     

PCR定点诱变方法构建BCR—ABLcDNA竞争性PCR内参照物

本实验通过合成与原有下游引物（Ｂ）相似的一条新引物（Ｂ’）,经聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）扩增出比原ＢＣＲ－ＡＢＬｃＤＮＡ序列减少了４个碱基的参照物,达到定点诱变的目的。经酶切分析证明,两型ＢＣＲ－ＡＢＬｍＲＮＡ均可通过此方法得到相应的ｃＤＮＡ参照物。参照物和特测模板的共扩增产物可通过毛细管电泳达到基线分离,证明了其可行性。该参数物可用于慢性粒细胞白血     

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓背角浅层内C纤维的主要神经活性物质

本文用免疫荧光双重标记技术对三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓背角浅层内ＢａｎｄｅｉｒａｅａＳｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａＩｓｏｌｅｃｔｉｎＢ４（ＢＳＩ－Ｂ４）标记的Ｃ纤维及其终末与Ｐ物质（ＳＰ）能、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）能、谷氨酸（Ｇｌｕ）能和一氧化氮（ＮＯ）能纤维及其终末的分布和相互关系，三叉神经节（ＴＧ）和脊髓背根节（ＤＲＧ）中ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ，谷氨酸能细胞的特异性标识物）样和ＮＯＳ样阳性的双标细胞进行了定位、定性和定量的系统研究。Ｖｃ和腰髓背角内ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样、ＮＯＳ样阳性纤维和终末及ＢＳＩ－Ｂ４标记的Ｃ纤维及其终末分布的主要重叠区域是Ⅱ层外带（Ⅱｏ）。ＴＧ和ＤＲＧ内可见ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样或ＮＯＳ样阳性的双标细胞，其中ＰＡＧ／ＢＳＩ－Ｂ４双标细胞的数量最多。此结果提示Ｃ纤维主要含Ｇｌｕ，Ｇｌｕ是初级传入最主要的神经活性物质。此外还有一些Ｃ纤维含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＯ。     

应用聚合酶链反应研究载脂蛋白B基因多态性及其临床意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１００例正常人及１０３例冠心病人载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）研究表明：①此两个位点上少见等位基因（Ｘ＾＋和Ｅ＾－）相对频率在冠心病组中均明显高于正常对照组，提示这些基因多态性与冠心病发病有一定关联。②ＸｂａＩ位点上具Ｘ＾＋Ｘ＾－基因型者血浆ＨＤＬ－Ｃ水平明显低于相应的Ｘ＾－Ｘ＾－基因型者，可能为Ｘ＾＋等位基因与冠心病关     

深红沙雷菌染色体DNA分子生物学特性研究

院内感染流行病学调查方法已由生物学迈进到分子生物学领域。选用ＨｉｎｄⅢ、Ｅｃｏ ＲＩ、Ｂａｍ ＨＩ、Ｂｇｌ Ｉ和Ｘｂａ Ⅰ限制性核酸内切酶，对某院心外科６名患者术后感染和呼吸机三通接头分离的深红沙雷菌（ＳＲ），分别进行染色体ＤＮＡ酶切图谱（ＲＥＡ）分析，并应用ＰＣＲ技术，从Ｅ．ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ、２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因。以［α＾３２Ｐ］ｄＡＴＰ经缺口平移法标记探针ｒＤＮＡ为广