SIEA免疫后的感染血清体外培养日本血吸虫未成熟卵鉴定抗卵胚 …

目的 筛选ＳＩＥＡ抗卵胚胎发育的候选分子。方法 小鼠再感染日本血吸虫尾蚴用ＳＩＥＡ免疫后４９天,实验组收集该免疫血清培养日本血吸虫未成熟卵。对照组用未免疫小鼠相同天数感染的血清培养,２天后,收集虫卵,作免疫沉淀和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果发现实验组仅出现５４ＫＤ。结论 日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原中５４ＫＤ分子可能位于未成熟卵膜或基质中,由未成熟卵所释放,为ＳＩＥＡ诱导保护性免疫中主要的效应分子     

SIEA免疫血清对体外培养的日本血吸虫卵 胚胎发育的作用

目的 采用体外培养方式,探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗源（SIEA）免疫血清的抗卵胚胎发育的作用。方法 从日本血吸虫小鼠肝脏无菌分离提取虫卵,转入RPMI-1640培养基中,对照组与试验组分别加入正常鼠血清 SIEA免疫血清。试验1：培养虫卵30d;试验2：培养虫卵14d。观察统计各期虫卵比较。结果 在试验1中,SIEA免疫血清组成熟卵比例与对照组比较,下降22.5%,初产卵、胚胎卵和死亡卵比例均高于对照组。在试验2中,SIEA免疫血清成熟卵比例下降14.7%,胚胎卵比例上升24.4%。结论 体外培养系统中SIEA免疫血清具有抗日本血吸虫卵胚胎发育的作用。     

日本血吸虫未成熟卵免疫血清抗卵胚反应的观察

目的 研究日本血吸虫未成熟卵免疫血清在抗卵胚方面的作用.方法 采用多途径免疫新西兰家兔的方法,制备日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原的免疫兔血清,通过免疫酶染色定位观察免疫血清与未成熟卵胚的反应.结果 证明未成熟卵免疫血清能特异地识别虫卵早期胚胎抗原,与未成熟虫卵卵胚出现较强的免疫反应.结论 未成熟虫卵可溶性抗原免疫产生的抗卵胚作用与未成熟虫卵胚胎抗原所诱导的保护性免疫应答有关.     

日本血吸虫未成熟虫卵26／28kDa抗原诱导抗雌虫生…

目的：探讨日本血吸虫未成熟虫的２６／２８ｋＤａ抗原（ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ）诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法：采用纯化的ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原以及ＳＩＥＡ－Ｉ抗原，分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于攻击感染后４６ｄ进行粪卵，组织内虫卵定量。结果：证明ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较，ＳＩＥ２６／２８ｋＤａ抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内总卵数、     

日本血吸虫未成熟卵抗血清对日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选

目的为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血吸虫基因。方法通过采用抗日本血吸虫未成熟卵SIEA26—28kDa免疫血清对日本血吸虫成虫cDNA文库进行筛选。结果共获得阳性克隆23个,经重复筛选之后,随机挑取其中的5个阳性克隆,分别进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示获得单一扩增条带,其大小位于150bp～1.5kb之间。结论从SjcDNA文库中筛选出抗卵相关阳性克隆,有关分析鉴定在进一步进行中。     

日本血吸虫未成熟虫卵糖蛋白抗原生物学特性的初步分析

目的 分析日本血吸虫未成熟卵糖蛋白抗原的生物学特性。方法 利用SDS－PAEG、银染色、PAS及脂类染色对SIEA组分进行分析，并根据标准分子量迁移率Rf值，用半对数坐标纸绘图，测算各区带的分子量。结果 SIEA有10种糖蛋白分子，其分子量为101、97、91、87、77、74、66、62、56、50kDa；1条37kDa脂蛋白区带。结论 SIEA含有蛋白、糖蛋白、脂蛋白等抗原分子，可能在宿主的免疫应答中发挥不同的作用。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

抗日本血吸虫生殖抗原SIEA 26-28 ku组分的质谱分析

目的 筛选确定抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA26-28 ku的编码基因. 方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA),选择SIEA 26-28 ku免疫血清识别信号较强的SIEA-2D蛋白质斑点(65～73号)采样,消化处理后进行质谱与生物学信息分析. 结果 从SIEA-2D图谱上共获得1 037个蛋白质斑点;通过MALDI-TOF-MS对其进行肽指纹图谱分析后获得了7张肽指纹图谱.通过PeptIdent软件检索SWISS-PROT数据库,发现有意义的血吸虫同源蛋白质11个,这些同源蛋白质部分与细胞代谢或蛋白质合成代谢相关,部分与核苷酸代谢有关,其中编号为SIEA-2D66为日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),SIEA-2D71为琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SDISP),SIEA-2D73为谷胱甘肽-S-转移酶(GST),其同源程度分别为37.2%、18.7%和22.9%. 结论 初步获得与抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA 26～28 ku相关的编码基因HGPRT、SDISP和GST.     

日本血吸虫卵源性抗原诱导的抗肉芽肿病变保护性免疫调节 …

日本血吸虫卵源性组分抗原ＳｊＲ４７可诱导小鼠产生明显的抗虫卵肉芽肿病变保护性免疫力。本文对免疫小鼠脾Ｔ淋巴细胞亚群表型动态和抗体免疫应答进行了研究。     

诱导保护性免疫的日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原分析

目的：为寻找抗日本血吸虫虫卵成熟疫苗候选分子提供实验依据。方法：用日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）和成虫冷浸抗原经皮肤多次重复注射小鼠，再感染后４９天收集小鼠肝内虫卵。聚乙二醇沉淀虫卵内抗原抗体复合物，应用ＥＩＴＢ分析该抗原抗体复合物。结果：发现各组抗原抗体复合物的组份为６７ＫＤ、５４ＫＤ或４０ＫＤ，其中５４ＫＤ为诱导保护性免疫的各组样品共有组分。结论：推测５４ＫＤ抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟的保护力可能起着重要作用     

日本血吸虫多价DNA疫苗免疫保护作用的研究

目的研究日本血吸虫多价DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫保护作用.方法65只BALB/c雌性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别肌肉注射纯化的质粒DNA pcDNA3.1(对照组)、pcDNA3.1-TPI(TPI)、pcDNA3.1-(CDR3)6[(CDR3)6]、pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6(TLC)和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI(CLT),每鼠100μg.每隔2周加强免疫1次,共3次.末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数.首次免疫前2天及感染前2天经尾静脉采血检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1、IgG2a.末次免疫后2周取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平.结果TPI、TLC组和CLT组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1的比值分别为1.71、2.71和4.70,而其他两组则未检测到特异性IgG抗体;TPI、TLC组和CLT组小鼠的IL-2、IFN-γ较对照组均有不同程度的升高,IL-4则无明显差异.多价DNA疫苗TLC组和CLT组减虫率分别达到37.30%、39.09%,减卵率分别为41.61%、49.54%,均显著高于TPI组和(CDR3)6组(P均＜0.05).结论多价DNA疫苗相对于单价DNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较高的以Th1为主的免疫应答.     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

日本血吸虫重组32×103蛋白诱导小鼠保护力的研究

目的用重组日本血吸虫32×103蛋白(rSj32×103)免疫Balb/c鼠,检测特异性IgG抗体水平,并观察抗日本血吸虫的保护效果。方法用rSj32×103加佐剂免疫小鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染后42d剖杀,计算减虫率。并用ELISA方法检测免疫后的抗体反应。结果间接ELISA测得免疫鼠特异性IgG抗体滴度达1∶12800。与对照组相比,减虫率为21.9%。结论用rSj32×103免疫小鼠后可诱导特异性IgG抗体,并能发挥一定的免疫保护作用。     

日本血吸虫TPI DNA疫苗基因密码子优化增强免疫保护作用的研究

目的　 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶基因（TPI基因）密码子优化后的DNA疫苗增强免疫保护作用的效果。 方法　 60只BALB/c雌性小鼠随机均分为A（pcDNA3.1空质粒对照组）、B（pcDNA3.1-TPI组）、C （pcDNA3.1-TPI-mHSP70组）、D（pcDNA3.1-TPI.opt组）、E（pcDNA3.1-TPI.opt-mHSP70组）等5组。每鼠肌肉注射相应的纯化质粒DNA 100 μg,每隔3周免疫1次,共3次。末次免疫后4周,每鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴（40±1）条,42 d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2 d及感染前2 d经尾静脉采血,检测IgG及IgG₁、IgG_2a的水平。攻击感染前2 d取脾脏,制备单个脾细胞,用流式细胞仪检测白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-5、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子（TNF）的水平。 结果　 B、C、D、E组小鼠血清均检测到特异性IgG及IgG_2a与IgG₁抗体,IgG_2a/IgG₁的比值分别为1.73、2.06、2.44、3.09。D、E组的IL-2、IFN-γ、TNF含量较B、C组均有不同程度地升高。D、E组减虫率分别为36.03%、39.03%,减卵率分别为41.71%、46.85%,均显著高于B、C组（P<0.01）。 结论 TPI基因密码子优化后的DNA疫苗相对于未优化TPI DNA疫苗能诱导小鼠产生较高的免疫保护作用,且诱导宿主产生较强的,及以Th1为主的免疫应答。     

重组日本血吸虫P14蛋白对血吸虫感染小鼠保护性免疫效果

目的 目的 探讨重组日本血吸虫P14蛋白 （SjP14） 对血吸虫感染小鼠的免疫保护效果。方法 方法 构建SjP14原核表达质粒pET28a （+） ? SjP14, 异丙基?β?D?硫代半乳糖苷诱导表达重组蛋白rSjP14, 纯化蛋白后, 进行十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS?PAGE） 和Western blotting鉴定。将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为SjP14重组蛋白实验组 （A组）、 佐剂对照组 （B组）、 生理盐水对照组 （C组）, 每组10只。每鼠每次注射抗原100 μg, 免疫3次, 每次间隔2周, 末次免疫后2周, 血吸虫尾蚴攻击感染。分别于免疫前、 免疫后6周和感染后6周经眶静脉采血, 分离血清, 采用酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测血清总IgG、 IL?4和IFN?γ。血吸虫尾蚴攻击感染后6周, 剖杀小鼠, 计算各组的减虫率和肝脏减卵率。结果 结果 SjP14原核表达产物相对分子质量 （Mr） 约为38 000; rSjP14能被SjP14多克隆抗体识别。血吸虫尾蚴攻击感染后6周, A组特异性IgG抗体水平升高, 为 （25.52±1.91）μg/ml, 与C组 ［（18.65±3.16）μg/ml］ 和B组 ［（22.44±2.83）μg/ml］ 相比差异均有统计学意义 （P 均＜0.05）。IFN?γ浓度升高, 为 （171.30±70.12）ng/L, 与C组 ［（136.89±37.62）ng/L］ 和B组 ［（153.64±43.44）ng/L］ 相比差异均有统计学意义 （P均＜0.05）。A组免疫后6周IL?4先略有升高, 感染后6周下降, 为 （112.05±15.02） ng/L, 与C组 ［（102.82± 27.46）ng/L］ 相比差异有统计学意义 （P＜0.05）。A组小鼠减虫率和减卵率分别为29.2%和41.3%, 与B、 C组相比差异均有统计学意义 （P均＜0.05）。结论 结论 SjP14蛋白疫苗具有一定的抗血吸虫感染免疫保护作用。     

日本血吸虫酚氧化酶诱导免疫对小鼠保护性的初步研究

目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用。方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立3组进行保护性免疫实验A组(实验组)、B组(佐剂对照组)和C组(空白对照组)。初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,最后1次免疫后10d按常规收集各组免疫血清。常规ELISA法测定免疫血清效价。然后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染。6周后,收集成虫计数,常规计算减虫率并检测肝脏虫卵负荷。结果ELISA法测定的酚氧化酶免疫小鼠血清效价在1∶1200以上。日本血吸虫酚氧化酶粗抗原免疫小鼠,其雌虫、雄虫和总虫数的减虫率分别为53.27%、26.76%和39.53%,与C组相比,差异均有极显著意义(P<0.01)。A组减卵率为50.75%,与C组相比,差异有极显著意义(P<0.01)。结论日本血吸虫酚氧化酶具有抗原性,能诱导宿主抗血吸虫感染免疫保护作用。其诱导保护性免疫的机制尚待进一步研究。     

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。