一步法提取RNA反转录—多聚酶链反应检测汉坦病毒RNA

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测汉坦病毒（Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）的基因ＲＮＡ。同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较，用异硫氰酸胍－载体吸附法，一步提取汉坦病毒ＲＮＡ，将脑腔接种汉坦病毒频临死亡的乳鼠脑制成１０％的悬液，并系列稀释，从１０＾－１到１０＾－１２的１２梯度，结果表明，该引物能够扩增出汉坦病毒Ｈ８２０５株的ＲＮＡ，说明汉坦病毒Ｈ８２０５株与７６－１１８株的Ｍ片段上具有共同的保守序列     

恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测

目的：检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）基因。方法：选择ＨＦＲＳＶ膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成两对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性。结果：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离恙螨５０只组，经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只、１０只和５只组，游离螨１０只和５只组均未见明显扩增带。进一步用ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未检测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，最低检出为５只螨组。并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果。结论：ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，从分子生物学角度为恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了直接证据。     

用RT—PCR方法直接测定麻疹病人唾液,尿液中的麻疹病毒RNA

以反转录二步多聚酶链反应方法（ＲＴ－ＰＣＲ）直接测定麻疹病人急性期尿液、唾液中的麻疹病毒ＲＮＡ（ＭＶ－ＲＮＡ）。实验证明麻疹病人发病后８～１０天的唾液标本中ＲＴ－ＰＣＲ阳性率为９０．９％;发病第１２天的标本中ＲＴ－ＰＣＲ阳性率为６６．６％。抗ＭＶ－ＩｇＭ阳性的病人唾液标本中的ＲＴ－ＰＣＲ总阳性率高于尿液标本的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率,分别为７２．９％、６４．０％。     

聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒的初步研究

应用美国Ａｂｂｏｔｔ公司Ｓｉｍｏｎｓ等人报道的引物序列，以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测３８例甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）指标均阴性的慢性肝炎患者血中的庚型肝炎病毒核酸（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ）。２０例健康供血员血清作为对照，同时用ＲＴ－ＰＣＲ法测丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ），结果３８例慢性肝炎患者中４例ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性，其中２例同时有ＨＣＶＲＮＡ阳性。表明本地区有ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染存在。     

用多聚酶链反应检测环境样品中甲型肝炎病毒RNA的实验研究

采用直接逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对加标海水、海泥、毛蚶的浓缩样品，用不同消毒方法处理过的甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）及毛蚶实测样品进行了ＨＡＶ－ＲＮＡ分析。结果表明，该方法可检出加标海水、海泥及毛蚶中的ＨＡＶ－ＲＮＡ；对苯酚消毒灭活的ＨＡＶ检验结果表明含有完整核酸序列的灭活病毒也能用ＲＴ－ＰＣＲ方法检出；毛蚶实测样品结果表明，只有１９８８年上海毛蚶ＲＴ－ＰＣＲ阳性，但细胞培养间接免疫荧光法检测结果为阴性，说明毛蚶冻存太久（≥５年），ＨＡＶ已不具感染性。直接ＲＴ－ＰＣＲ方法简便敏感，不需超速离心及其它特殊设备，在普通实验室也能使用。     

我国献浆血员中庚型肝炎病毒HGV RNA的检测及部分序列分析

采用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测１００名献浆血员中庚型肝炎病毒ＨＧＶＲＮＡ，其中１９名（１９％）ＨＧＶＲＮＡ阳性；对其中４份ＰＣＲ产物进行了直接测序，结果表明４株病毒在此区的核苷酸序列相对保守，其同源性在９５％以上，与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ的同源性分别为８８％和８５％不同。提示该４株ＨＧＶ与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ不属于同一基因型。     

血浆中HCV RNA的研究

血浆中ＨＣＶＲＮＡ的研究毕宜珺　，张云兰综述郑淑鹏审校由于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）蛋白在血浆中的含量很低，因此用常规的免疫方法无法测定，致力于病毒研究的科学家们自１９９０年以来采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ要）技术，检测到...     

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序？…

为明确保定肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫区的型别采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,检测急性期ＨＦＲＳ病人血清的汉坦病毒（ＨＶ）ＲＮＡ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定,并与国内外ＨＶ的代表株进行比较。结果３１份急性期病人血清经ＲＴ－ＰＣＲ分型,２４份为汉城型（ＳＥＯ型）,２份为汉滩型（ＨＴＮ型）,并测得ＳＥＯ型Ｃ３株Ｍ基因（位于１９８５－２３１４位）,ＨＴＮ型ＬＢＹ株Ｍ基因（位于１９９６－２３１４位）核苷酸序列     

HCV体外感染多种细胞株的观察

目的 寻找ＨＣＶ体外感染的细胞培养系统。方法 选用ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清感染人单核细胞株（Ｕ９３７）、人Ｔ淋巴细胞株（Ｍｏｌｔ－４）、人胆囊细胞株（Ｋｉｒｌｉｃｈ）、猪肾细胞株（ＰＫ１５）、鼠睾丸细胞株（ＳＴＥ）、人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ）等７种细胞。应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ在这种７种细胞中的感染和复制情况。结果 ７种细胞中均能检测到ＨＣＶ ＲＮＡ正链，并且在Ｕ９３７、Ｍｌ     

肾综合征出血热患者病原基因的检测分析

目的：探讨肾综合征出血热基因诊断的方法。方法：采用肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）Ⅰ型病毒ＨＴＮ株,Ⅱ型病毒Ｒ２２株的Ｍ基因序列为参照,设计出引物Ａ１￣Ａ７,用ＲＴ－ＰＣＲ技术,直接从ＨＦＲＳ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中检测ＨＦＲＳ－ＲＮＡ。（２）２０例病人中Ⅰ型引物扩增阳性者５例,Ⅱ型引物阳性者１９例,二者重叠阳性者４例。结论：以ＨＦＲＳ病毒Ｍ片段Ｇ１区核苷酸序列设计的引物可以用于ＨＦＲＳ临床病     

庚型肝炎病毒母婴传播的研究

用ＥＬＩＳＡ法对１１０名健康孕产妇进行血清抗－ＨＧＶ测定,阳性和可颖阳性者再用ＲＴ－ＰＣＲ检测血清ＨＧＶ ＲＮＡ,并对ＨＧＶ ＲＮＡ阳性孕产妇的新生儿脐血和婴儿血进行ＨＧＶ ＲＮＡ检测。结果 １１０名孕产中有７人（６．３６％）抗－ＨＧＶ阳性８人可疑阳性。其中４人被检测到ＨＧＶ ＲＮＡ,阳性率２６．６６％（４／１５）。她们所产的４名婴儿中２人血清ＨＧＶ ＲＮＡ阳性。提示ＨＧＶ的母婴传播率为５０％（２     

RT—PCR法检测甲肝疫苗滴度

建立快速灵敏特异的甲肝减毒活疫苗滴度的ＲＴ－ＰＣＲ检测法。方法：以编码甲肝病毒（ＨＡＶ）ＶＰ３羧基端的基因区为目标区，运用ＲＴ－ＰＣＲ法对甲肝疫苗病毒进行检测，并与ＴＣＩＤ５０检测法进行比较。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法灵敏度和特异性均与ＴＣＩＤ５０法相似，...     

HCV RNA定量PCR检测研究进展

ＨＣＶ ＲＮＡ检测是ＨＣＶ感染的重要诊断手段。本文系统介绍了以ＲＴ－ＰＣＲ定量分析ＨＣＶ ＲＮＡ的标本稀释法，竞争性ＲＴ－ＰＣＲ法及放射性核素掺入法等三种方法的原理和应用，对其可靠性和可操作性进行了评价。此外还就这三种方法对ＨＣＶ ＲＮＡ检测在血液制品的污染的鉴定，慢性丙型肝炎的诊断，以及在ＩＦＮα治疗疗效评价中的应用进行了叙述和展望。     

聚合酶链反应检测血浆及外周血单个核细胞中HCV—RNA的意义

目的 为提高丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ－ＲＮＡ）的率。方法 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测２００例抗－ＨＣＶ阴性,ＡＬＴ反复异常,临床疑似丙型肝炎患的血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 ５２例患血浆中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ,阳性率为２６％,７８例患ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ,阳性率为３９％,其中两同时双阳性有２２例,阳性率为１１％。结论 同步检测丙     

聚合酶链反应法检测戊型肝炎病人粪便HEV—RNA

应用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法，对２６例散发性戊型肝炎（ＨＥ）患者发病后４～２８天收集的９１份粪便标本进行ＨＥＶＲＮＡ检测，并与同病期系列血清ＨＥＶＲＮＡ及ＡＬＴ水平作比较，以了解散发性ＨＥ患者的粪便排病毒规律。结果表明，患者粪便ＨＥＶＲＮＡ阳性率为４２．３％（１１／２６），与血清ＨＥＶＲＮＡ阳性率（５３．８％）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。粪便ＨＥＶＲＮＡ检出率在发病头５天内为７５％（３／４），随后即与血清ＡＬＴ水平一样出现明显下降，于发病后１６～２０天降至１９．２％（５／２６），最长一例持续阳性至发病后２３天。上述结果提示，ＨＥ患者的粪便排病毒主要发生在疾病的急性期早期，将其隔离期定为病后３周可能比较合理。     

加热与洗涤法对HBV,HCV血清标志的影响

采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ），对经６０℃１０ｈ加热的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢＣ及抗－ＨＣＶ阳性血清和洗涤４次的ＲＢＣ洗涤及放散液的血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果，６０℃加热１０ｈ用ＥＬＩＳＡ检测血清标志均由强阳性转为阳性，ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＲＮＡ均为阴性；洗涤液用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ检测血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ均呈阴性反应，放散液用ＥＬＩＳＡ检测阴性，用ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ１０份标本９份阴性，１份阳性。提示６０℃加热１０ｈ和洗涤ＲＢＣ可灭活或去除血清中大部分ＨＢＶ、ＨＣＶ及其血清标志。     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

山东地区HGV—RNA检测及部分核酸序列测定

目的 了解山东地区慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）患者中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的状况，并测定其结构基因ＣＥ１区部分核苷酸序列。方法 用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰｃＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ，并对部分阳性血清扩增的产物采用ＰＣＲ技术片段直接克隆法测定。结果 从１１６例慢性丙型肝炎患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性３１例（２６．７％），其中１例患者ＨＧＶＣＥ１区部分核苷酸序列与中国第一株Ｕ７５３５６及另一例     

套式反转录—聚合酶链反应检测革螨体内肾综合征出血热病毒的？…

用ＨＴＮ病毒姬鼠型Ｍ基因型特异性引物，异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠和肺和厩真厉螨体人７６－１１８株病毒ＲＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和点印迹杂交证实。结果表明，姬鼠型７６－１１８株病毒液和叮刺感染病毒乳鼠后第１０天既真厉螨组织悬液接种乳鼠第９天鼠肺，叮刺后第１０天和３０天螨，均检出病毒ＲＮＡ。