人胰腺癌与端粒酶及其亚单位表达的关系

目的：探讨粒酶活性及其亚单位表达水平与人胰腺癌发生及其临床病理特征的关系。方法：应用聚合酶链反应－银染法（PCR－银染，聚合酶链反应－酶联免疫吸附试验（PCR－ELISA）、逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）及DNA测序等技术，对24例人胰腺癌中端粒酶活性及其亚单位的表达情况进行研究。结果：24例胰腺癌标本中端粒酶活性及hTERTmRNA表达表达阳性率为87．5％、83．3％，而癌旁组织为12．5％，两组差异有显著性（P＜0．05）。hTERTmRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。端粒酶活性的表达水平与肿瘤的分化程度，有无淋巴结的转移及临床分期明显相关。结论：端粒酶参与了胰腺癌的寻生；hTERTmRNA表达水平的上调可在胰腺癌形成过程中起重要作用。端粒酶活性的表达与人胰腺癌的生物学行为及临床病理特征有关，且有助于判断胰腺癌的恶性程度的患者的预后。     

膀胱癌人端粒酶催化基团表达研究

为研究膀胱癌人端粒酶催化基团(hTRT)mRNA的表达情况，我们采用分子生物学核酸原位杂交技术对48例膀胱肿瘤组织和30例正常膀胱组织的端粒酶hTRT mRNA进行研究，同时采用TRAP-银染法对上述标本的端粒酶活性进行了测定。     

siRNA端粒酶催化亚单位诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的：研究siRNA（small interference RNA）对人膀胱癌BIU-87细胞凋亡和端粒酶催化亚单位（hTERT）基因表达的影响。方法：设计并体外转录合成针对hTERT基因的3个特异性siRNA,通过脂质体将siRNA转入BIU-87细胞,分别采用MTT和DNA原位末端标记（TUNEL）法检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率（IR％）和凋亡指数（A100）的影响,半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western Blotting检测siRNA对hTERT mRNA及其蛋白表达的影响。结果：转染后的siRNA 1～3组的B1U-87细胞的IR（34．62％、62．19％、57．43％）和AI（30．62％、54．26％、51．50％）均分别显著高于正常对照组（3．46％和5．03％）（均P〈0．05）,hTERT mRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA2～3对BIU-87细胞的IR、AI和hTERT表达的抑制作用均显著高于siRNA1。结论：体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞hTERT的表达,诱导BIU-87细胞凋亡,从而抑制BIU-87细胞生长,为siRNA介导的膀胱肿瘤基因沉默提供实验依据。     

胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位、c-myc蛋白的表达及其相互关系

目的探讨胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)的表达状况及其与c-myc蛋白表达的关系。方法应用免疫组织化学技术检测45例慢性胃炎和19例胃癌中hTERT和c-myc蛋白的表达。结果hTERT蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。c-myc蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织(P<0.05);在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。hTERT蛋白表达率在c-myc蛋白阳性患者中显著高于c-myc蛋白阴性患者(P<0.01)。结论在胃癌和胃癌前病变阶段,端粒酶(telomerase)与c-myc均可能发挥重要作用,促进了胃癌的发生、发展;c-myc表达增加可能是胃粘膜上皮细胞端粒酶激活的主要机制之一。     

人端粒酶蛋白催化亚单位基因转染对人胚胎成纤维细胞增殖的影响

目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEF)增殖的影响。方法体外培养hEF。应用脂质体转染法将pIRES2增强性绿色荧光蛋白(EGFP)hTERT正义重组质粒及pIRES2EGFP空载质粒分别导入hEF中,相应称为hEFhTERT和hEFEGFP。采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测正常hEF、hEFhTERT、hEFEGFP中hTERT蛋白、分化抑制因子Id1、增殖细胞核抗原(PCNA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平。用噻唑蓝(MTT)法测定3种细胞的生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期并计算增殖指数(PI)。结果(1)Westernblot与hEFEGFP和hEF比较,hEFhTERT中的hTERT蛋白、Id1、PCNA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平均较高。(2)MTT法细胞接种后第4—6天,hEFhTERT的吸光度(A)值明显高于hEF和hEFEGFP(P<005),接种后1—6dhEF与hEFEGFP的A值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)细胞周期与hEFEGFP和hEF比较,hEFhTERTG0/G1期细胞较少,S、G2/M期细胞较多;其PI为5747%,高于hEFEGFP(13.13%)和hEF(17.38%)。结论外源性hTERT基因转染可使hEF增殖能力增强。     

胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位、c—myc蛋白的表达及其相互关系

目的探讨胃粘膜病变中人端粒酶催化亚单位（human telomerase catalytic subunit，hTERT）的表达状况及其与c—myc蛋白表达的关系。方法应用免疫组织化学技术检测45例慢性胃炎和19例胃癌中hTERT和c—myc蛋白的表达。结果hTERT蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织（P〈0．05）；在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织（P〈0．05）；在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织（P〈0．05）。c—myc蛋白的表达率在胃癌组织中显著高于不典型增生、肠化生和萎缩性胃炎组织（P〈0．05）；在不典型增生组织中显著高于肠化生和萎缩性胃炎组织（P〈0．05）；在肠化生组织中显著高于萎缩性胃炎组织（P〈0．05）。hTERT蛋白表达率在c—myc蛋白阳性患者中显著高于c-myc蛋白阴性患者（P〈0．01）。结论在胃癌和胃癌前病变阶段，端粒酶（telomerase）与c—myc均可能发挥重要作用，促进了胃癌的发生、发展;c-myc表达增加可能是胃粘膜上皮细胞端粒酶激活的主要机制之一。     

靶向端粒酶催化亚单位基因hEST2反义寡核苷酸对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的观察靶向端粒酶催化亚单位基因hEST2反义寡核苷酸对人肝癌细胞生长的抑制作用。方法从Genebank中钓取人端粒酶催化亚单位基因hEST2的mRNA序列，通过计算机模建二级结构辅助设计并合成硫化修饰反义寡核苷酸（癌泰得）。采用人肝癌裸小鼠原位移植模型（HCM—Y89）。实验分为生理盐水组，5-Fu10mg／kg组，癌泰得50mg／kg组、75mg／kg组，癌泰得75mg／kg联合5-Fu10mg／kg组、50mg／kg联合5-Fu10mg／kg组。尾静脉给药，每天1次，连续20d。观察移植瘤质量和抑瘤率、移植瘤体积、AFP浓度和移植瘤组织学。结果（1）5-Fu10mg／kg组的抑瘤率为27．85％，其他各治疗组的抑瘤率均在42．14％～74．29％之间；（2）各治疗组瘤质量、瘤体积和AFP浓度均低于生理盐水组且差异有统计学意义；（3）瘤体积和AFP浓度之间呈直线关系，为显著正相关（r=0．9977）；（4）癌泰得和5-FU治疗人肝细胞癌后，肝癌细胞出现不同程度的凋亡、坏死，同时伴有纤维组织增生。结论癌泰得对肝癌细胞生长具有抑制作用，疗效优于5-FU；与5-FU合用具有协同抗肿瘤效应。     

小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用。方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3300bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒。应用Lipofeetamine^TM 2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果。设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒。Lipofectamine^TM 2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞。分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况。结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRV和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3300bp和约300bp条带,而后者出现3300bp和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒。K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制。结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达。     

端粒酶催化亚单位基因反义寡核苷酸诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(hTRT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用。方法合成针对hTRT的28mer ASODN,转染前列腺癌细胞12～36 h后,细胞计数、透射电镜、DNA Ladder、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测癌细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)技术检测hTRT基因表达和端粒酶活性。结果0.5～2.0μmol/L ASODN转染后,癌细胞体外生长抑制16.08％～53.41％(P<0.05),部分癌细胞呈现凋亡形态学改变和DNA片段化,凋亡率为9.36％～37.54％(P<0.05),hTRT表达减弱24.48％～86.73％(P<0.01),端粒酶活性降低24.74％～76.72％(P<0.01)。 结论运用ASODN阻断端粒酶hTRT基因表达,能降低端粒酶活性,显著诱导前列腺癌细胞凋亡。     

人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及基因转染

目的：探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性。方法：利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞，以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基，通过角蛋白19（K19）和整合素β1免疫组化染色、细胞周期分析及克隆形成率测定，对培养细胞进行鉴定。采用脂质体介导法，以含血管内皮细胞生长因子165（VEFG165）基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(pcDNA3.1/VEGF165)转染培养细胞；采用病毒载体介导法，以含报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺相关病毒载体（raav/GFP)转染培养细胞。应用免疫组化染色及荧光显微镜观察检测转染效果。结果：人胎儿表皮干细胞呈明显克隆性生长、克隆形成率高，G1期细胞比例明显高于普通基底层角质细胞，K19和整合素β1免疫组化染色呈强阳性。pcDNA3.1/VEGF165转染的表皮干细胞VEGF165免疫组化染色阳性，raav/GFP转染的表皮干细胞呈现强荧光。结论：利用Ⅳ型胶原快速贴附法及人胎儿成纤维细胞条件培养基，可初步实现人胎儿表皮干细胞的分离培养。以质体为介导或以腺相关病毒为载体进行人胎儿表皮干细胞的体外基因转染是可行的。     

表皮干细胞抽提物重编程脂肪干细胞表达表皮细胞表型的实验研究

目的研究富集的表皮干细胞（Keratinocyte enriched with epidermal stem cells,KSC）抽提物对重编程人脂肪干细胞（Adipose derived stem cells,ASCs）表达表皮细胞表型的影响。方法常规方法收集表皮细胞（Keratinocyte,KC）后,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法分别收集KSC与富集后剩余的表皮细胞（Keratinocyte enriched with epidermal stem cellsleft,KCL）,鉴定K19和P63的阳性表达率,Gimsa染色法测定KC、KSC、KCL的克隆形成率,分别制备KC、KSC、KCL的细胞抽提物,作用于链球菌溶血素-O（SLO）通透处理过的原代ASCs,分别应用流式细胞仪与Western-blot测定重编程后ASCs中广谱角蛋白（Pan cytokeratin,P-CK）与ASCs的BRG1表达变化。结果 KSC与KC、KCL来源的细胞抽提物重编程ASCs的CK及BRG1表达率,均有明显统计学差异（P〈0.01）。结论脂肪干细胞在表皮细胞抽提物的诱导作用下能表达表皮细胞表型,且对表皮细胞优化处理后的KSC有更加显著的重编程作用。     

RNA干扰抑制整合素β1在人表皮干细胞中的表达

目的观察整合素β1对人表皮干细胞（KSC）增殖与分化的影响。方法选择人整合素β1RNA干扰靶点特异性的寡核苷酸，连接到小干扰RNA（siRNA）表达质粒pSilencer3.1／H1上，将其转染到KSC中，并根据转染的方式将KSC分为非转染、转染空载体、转染si整合素β1-1、转染si整合素β1-2、转染siNegative5个部分。通过蛋白质印迹法检测各部分KSC整合素β1蛋白的表达水平，并筛选出最有效的阳性载体，将其命名为si整合素β1进行后续实验；通过逆转录聚合酶链反应检测各部分KSC整合素β1mRNA的表达水平，上述检测均重复测定5次。结果非转染、转染空载体的KSC不能抑制整合素β1蛋白的表达；转染si整合素β1-1、si整合素β1-2的KSC能够在蛋白水平抑制整合素β1的表达，并且后者效果强于前者，抑制效率达到60％-70％，将其命名为si整合素β1；si整合素β1使KSC中整合素β1 mRNA水平明显下降，抑制效率约达70％。结论重组质粒转染KSC后可下调整合素β1 mRNA及其蛋白的表达。     

基因芯片技术筛选人不同发育阶段表皮干细胞差异表达基因的研究

目的 分析人不同发育阶段表皮干细胞基因表达变化特征,探讨其可能的生物学意义.方法 收集胎龄28～32周胎儿、4～12岁少儿、35～55岁成人3组正常皮肤组织标本,每组10例.采用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸联合消化法分离表皮,Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化表皮干细胞,免疫细胞化学染色法行整合素β1、角蛋白19单克降抗体检测鉴定.Trizol一步法分别提取各组细胞总RNA,琼脂糖甲醛变性凝胶电泳质检.制备探针并与表达谱芯片进行杂交,扫描芯片荧光信号图像.对芯片图像进行分析,以2倍差异表达值筛选差异表达基因.选择明显上调或下凋的基因,用实时RT-PGR技术进一步验证相关基因.结果 与少儿组比较,成人组差异表达基因1808个,其中上调的基因1089个、下调的基因719个,已知基因1462个、未知基因346个.少儿组样本与胎儿组比较,差异表达基因4534个,其中上调的基因1783个、下调的基因2751个,已知基因3577个、未知基因957个.根据基因功能分类,成人组与少儿组差异表达基因可分为128类,少儿组与胎儿组差异表达基因可分为216类.1104个基因在胎儿组、少儿组与成人组样本中呈持续差异表达,根据基因功能分为32类.实验检测到持续差异表达基因中,有94个差异表达基因呈持续上调状,75个差异表达基因呈持续下调趋势.实时RT-PCR验证结果与芯片筛选结果一致.结论 体外培养的胎儿、少儿与成人表皮干细胞基因表达谱有明显不同,其差异可能与不同发育阶段人表皮干细胞的增殖分化能力及皮肤创伤修复能力不同密切相关.

Abstract：

Objective To analyze expression characteristics of human skin epidermal stem cell at different developmental stages, and to explore its biological significance. Methods Health skin samples from 28-32 w fetuses(F group) , 4-12 y children(C group) , and 35-55 y adult(A group) were harvested,with 10 cases in each group. Epidermis were separated using trypsin digestion and EDTA, and human epidermal stem cells were isolated and purified with type Ⅳ collagen attachment method. The monoclonal antibody of integrin β1 and keratin 19 were used for detection and identification of epidermal stem cells by immunohistochemical staining. Total RNA was extracted from above cells by Trizol one-step method, and were detected by formaldehyde denaturing agarose gel electrophoresis. Probes were prepared and hybridized into cDNA microarray for scanning fluorescent signals and analysis of images, with two-fold differential expression value for screening. Significantly up/down-regulated genes were selected for verification by real time RT-PCR. Results By comparing expression profile between A and C groups, a total of 1808 genes with differential expression were detected, including 1089 up-regulated genes and 719 down-regulated genes, and they were classified into 128 categories. Among them, 1462 genes were known (found in GeneBank), 346 genes were unknown. A total of 4534 genes with differential expression were detected between C and F groups, in which 1783 genes were up-regulated and 2751 genes were down-regulated, and they were classified into 216 categories. Among them, 3577 genes were known (found in GeneBank), and 957 genes were unknown. There were 1104 genes with differential expression consistently detected in F, C and A groups,which were classified into 32 categories according to gene function. Among them, 94 genes were consistently up-regulated and 75 genes consistently down-regulated. Test results of real time RT-PCR were in accordance with above-mentioned results. Conclusions Gene expression profiles of epidermal stem cells cultured in vitro, harvested from fetuses, children, and adult, exhibit obvious difference. This may be closely related to different stages of proliferation and differentiation of human epidermal stem cell and self-repair ability of wound at different developmental stages.     

人表皮干细胞的体外分离与培养

目的 探索人表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）的分离方法和培养体系。方法 用Ⅳ型胶原纯化、富集ESCs，将黏附细胞（实验组）和未黏附细胞（对照组）分别接种在Ⅳ型胶原摹质（实验组为A1，对照组为A2）和3T3细胞滋养层（实验照组为B1，对照组为B2），培养体系为：低糖无钙DMEM培养基（添加10％胎牛血清、表皮生长因子10μg／L、氯化钙0．05mmol／L、氢化可的松0．8mg／L），观察细胞能否呈克隆状生长，用流式细胞仪和免疫细胞化学染色，对ECSs周期和表型进行分析。结果 实验组细胞呈克隆状生长，G0／G1期细胞和α6^briCD71 dim细胞百分率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性，对照组呈刚性。结论 人ESCs可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选，并可在适当的培养体系里扩增。     

人表皮干细胞的体外分离和培养

目的:建立人表皮干细胞的体外分离和培养体系的方法,探索表皮干细胞体外大量扩增的途径.方法:采用0.375%的DispaseⅡ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,采用MTF法筛选表皮细胞基础培养基和表皮细胞生长因子(epidermal growthfactor,EGF)的最适浓度,建立表皮干细胞培养的干预体系.逐日观察培养的细胞呈表皮干细胞样的形态,免疫组化方法检测β1整合素和角蛋白19的表达.结果:以表皮细胞数量和活性作指标,不同浓度EGF干预条件细胞活性不同,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液为最适培养液,可使细胞呈表皮干细胞克隆样生长,β1整合素和角蛋白19表皮干细胞活性表达呈阳性.结论:采用0.375%的Dispase Ⅱ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液培养,此方法是一种简便、快速、经济的表皮干细胞分离和培养的方法.     

人表皮干细胞的体外分离培养和鉴定

目的:探讨人表皮干细胞的体外快速分离培养及鉴定方法。方法:中性蛋白酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离表皮层和真皮层,并获得表皮单细胞悬液,采用Ⅳ型胶原铺板选择性粘附、分离和角质形成细胞无血清培养基(K-SFM)培养表皮干细胞。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况,检测细胞克隆形成率,免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达;以角质形成细胞作为对照。结果:组织学观察显示,培养24h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞组;免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及Kl9均呈阳性表达。结论:运用Ⅳ型胶原粘附结合K-SFM培养可以实现人表皮干细胞的体外快速分离和培养。     

端粒酶在大鼠胚胎神经干细胞的表达及其生物学特性

目的观察Wistar大鼠胚胎神经干细胞及其分化细胞的端粒酶活性，探讨神经干细胞维持其生物学特性的分子生物学基础及神经干细胞分化调控的内在机制。方法显微镜下分离大鼠胚胎室管膜下区细胞，在含生长因子的神经干细胞完全培养液中培养形成神经干细胞，然后在不含生长因子而含10％血清培养液中分化14～16d，应用改良的端粒重复序列扩增法(TRAP)研究神经干细胞及其分化细胞的端粒酶活性。结果Wistar大鼠胚胎神经干细胞表达较强的端粒酶活性，而分化后的细胞则不再表达端粒酶活性。结论端粒酶活性的改变可能是胚胎神经干细胞诱导分化的机制。随着端粒酶活性的逐渐下降，胚胎神经干细胞随之分化为具有一定生物学特性的细胞。     

表皮干细胞的研究进展

表皮干细胞（epidermal stem cells）主要位于表皮基底层和毛囊外根鞘膨凸部（bugle）。表皮干细胞通过不对称分裂完成自我更新,同时形成一个新的子代细胞——短暂扩增细胞（transit amplifying cells,TA cells）。TA细胞继续分裂扩增、上移从而形成其他各细胞层如颗粒细胞层、棘细胞层等。随着时间的推移,颗粒层细胞、棘层细胞发育成熟行使组织功能,并逐渐老化失去细胞器,被细胞自身分泌的角质蛋白所替代,形成透明层或者角质层直至脱落。这个过程又可称为：生长期、衰退期和静止期。表皮就是遵循这个不断循环往复的生理过程,自我更新,自我修复。     

表皮干细胞的研究进展

表皮干细胞（Epidermal stem cells,ESCs）是指表皮组织中具有不断增殖和分化能力的细胞。近年来,ESCs 的研究取得了一定的进展,为临床疾病的治疗开辟了新思路。本文就ESCs 定位、标记物、特性、调节机制及其应用前景等研究现况进行综述。     

人诱导性多潜能干细胞向表皮样干细胞分化的实验研究

目的 探讨人诱导性多潜能干细胞( iPSC)向表皮样干细胞分化的可能性.方法 (1)以经过灭活处理的小鼠胚胎Fb株作为滋养层,将人iPSC株接种于其上,加入胚胎干细胞完全培养液培养,Ⅳ型胶原酶消化法传代,倒置相差显微镜下观察人iPSC形态及生长状况并行碱性磷酸酶(AKP)染色.以胚胎干细胞不完全培养液悬浮培养iPSC,观察拟胚体形成能力.(2)将人iPSC接种于铺有人羊膜的6孔培养板培养,设为诱导组;另于未铺羊膜的6孔培养板上培养iPSC,作为对照组.观察2组iPSC形态,免疫细胞化学染色法检测整合素β1和细胞角蛋白19( CK19)表达.结果 (1)人iPSC在胚胎干细胞完全培养液中呈典型的干细胞克隆状生长,边界清楚,增殖旺盛;AKP染色阳性.iPSC在无滋养层条件下悬浮培养可形成拟胚体.(2)诱导组iPSC经培养4d后形成干细胞克隆,部分细胞整合素β1和CK19表达阳性.对照组细胞大量死亡,未见整合素β1和CK19表达.结论 人iPSC在羊膜诱导下可定向分化为表皮样干细胞,有望成为皮肤组织工程新的种子细胞.