苦瓜核糖体失活蛋白的研究

综述了苦瓜核糖体失活蛋白的分离纯化、理化性质、作用机理和方式，并对该蛋白的应用前景作了展望。     

聚乙二醇修饰对苦瓜核糖体失活蛋白的肝细胞毒性影响

目的 探讨聚乙二醇(PEG)修饰对α型苦瓜核糖体失活蛋白(α-momorcharin,α-MMC)的大鼠肝细胞毒性的影响。 方法 将SD大鼠随机分为生理盐水阴性对照组,α-MMC高、中、低剂量组(蛋白含量分别为6.25、2.08、0.70 mg/kg)和PEG修饰后的α-MMC-PEG高、中、低剂量组(蛋白含量相同),每组24只,隔日经尾静脉注射给药一次,连续28 d,停药后恢复14 d,观测动物的一般状况,并分别在给药期末和恢复期末进行肝功能和肝组织病理学检查。 结果 在给药第28 d,与生理盐水阴性对照组比较,α-MMC高、中剂量组有明显的肝功能异常,如血清白蛋白(ALB)含量降低,血清球蛋白(GLB)增加,A/G比值降低,谷草转氨酶(AST)、总胆红素(BIL)和胆固醇(CHO)增加;HE染色可见弥散性肝细胞水肿、变性,炎性细胞浸润,甚至点状坏死。与α-MMC不同,经PEG修饰后的α-MMC-PEG各组的毒性则明显减轻,其高剂量组肝功损害指标及病理改变仅与α-MMC低剂量组接近,而中剂量和低剂量组与阴性对照组一致。 结论 PEG修饰能够明显降低α-MMC对大鼠的肝细胞毒性。     

丝瓜籽核糖体失活蛋白基因Lufiin-a

目的探讨丝瓜籽核糖体失活蛋白基因Luffin—a原核表达载体的构建方法。方法从Pubmed中查到Luffin—a的mRNA全序列,用RT—PCR的方法从未成熟的丝瓜种子中克隆Luffin—a基因,T—A克隆后鉴定核苷酸序列,构建原核表达载体pET-15b（＋）-Luffin—a,转化大肠杆菌BL21（DE3）,并经IPTG诱导表达;SDS-PAGE鉴定Luffin—a表达产物。结果克隆出Luffin—a基因,IPTG诱导后大肠杆菌培养液和超声破碎的菌体沉淀中都有Luffin—a表达产物。结论本研究成功构建了Luffin—a原核表达载体。     

苦瓜籽MAP30的聚乙二醇化学修饰条件优化及纯化研究

目的探讨聚乙二醇修饰苦瓜籽核糖体失活蛋白(MAP30)的反应条件以及修饰产物的纯化方法。方法在不同条件下,将聚乙二醇活性酯(mPEG)2-NHS与MAP30反应,用SDS-PAGE分析不同反应条件对产物成分的影响;采用Sephacryl S-300HR分子筛柱色谱法对修饰产物进行分离纯化,TNBS法测定目标产物PEG-MAP30的氨基修饰度。结果聚乙二醇修饰MAP30的最优反应条件为4℃,pH8.5硼酸硼砂缓冲液,MAP30质量浓度1mg/mL,MAP30与(mPEG)2-NHS质量比1∶10为最佳修饰条件,5min内反应完全;反应产物进一步纯化,经SDS-PAGE检测目标产物PEG-MAP30中不含未修饰的MAP30;TNBS法测定MAP30的氨基修饰度为44.9%。结论初步确定了聚乙二醇修饰MAP30的反应条件和修饰产物的纯化方法。     

苦瓜核糖体失活蛋白广泛的生物学功能

核糖体失活蛋白（ribosomal inactivating proteins,RIPs）广泛存在于植物界,目前已从350余种植物中筛选到110多种RIPs,少数细菌和真菌中也分离出了RIPs。苦瓜RIPs是从苦瓜籽或果肉中分离纯化得到的碱性蛋白质,具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌及真菌和抗生育等广泛生物活性,其中因其抗HIV等病毒及抗肿瘤作用而受到广泛关注和研究,现就苦瓜RIPs的生物学功能作一总结。     

苦瓜核糖失活蛋白的研究

综述了苦瓜核糖体失活蛋白的分离纯化、理化性质、作用机理和方式，并对该蛋白的应用前景作了展望。．     

苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

经穿膜肽与PEG修饰的核糖体失活蛋白Gelonin抗肿瘤作用的研究

目的:通过对核糖体失活蛋白Gelonin进行化学修饰,利用穿膜肽和聚乙二醇（PEG）偶联来提高其到达肿瘤部位和进入肿瘤细胞的能力,使Gelonin更高效地发挥抑瘤作用。方法:利用FPLCSuperdex75分子筛预装柱纯化系统对所修饰的Gelonin进行纯化后,并在不同细胞系测试细胞毒性;通过倒置荧光显微镜、流式细胞分析技术等对药物进入纤维肉瘤细胞HT1080的能力进行评价;采用小动物活体成像技术考察了药物体系在荷瘤动物体内的分布情况。结果:采用分子筛色谱纯化可以得到纯度相对较高的修饰产物,其毒性较无修饰的Gelonin强,且在HT1080细胞系作用最明显;细胞摄取结果显示,与未修饰的Gelonin相比,该药物体系具有更高的细胞摄取效率;动物成像结果表明,PEG₅₀₀₀修饰可以改变Gelonin在动物体内的分布情况,增加在肿瘤的药物蓄积。结论:穿膜肽和PEG₅₀₀₀修饰后的Gelonin有较高的肿瘤细胞摄取和杀伤能力,药物在肿瘤的蓄积量较高,从而增强了药物的其抑瘤效果。     

核糖体失活蛋白及其在生物医学领域的应用与研究进展

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)是一类具有特殊生物毒性的蛋白。它具有N-糖苷酶活性,可以灭活真核细胞的核糖体,使其蛋白质的生成受阻,从而导致细胞死亡[1]。具体来说,RIPs因其具有N-糖苷酶活性,能够作用于真核生物28S核糖体RNA大亚基上的茎环节构顶部GA4324GA的普遍保守的S/R区域,通过脱嘌呤作用,阻滞了