葛根素对脉络膜血管内皮细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度葛根素(Puerarin,Pur)对体外培养脉络膜血管内皮细胞(Choroidal vascular endothelial cells,CVECs)增殖的影响。方法:取第3代人CVECs用于实验。实验组中加入含不同浓度的Pur培养液,细胞对照组加入等量空白培养液。24 h及48 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测血管内皮细胞的增殖情况。结果:与细胞对照组比较,0.05、0.50、5.00μg/ml和50μg/ml Pur组作用24 h及48 h后CVECs A值均增加(P<0.01)。结论:Pur对体外培养的CVECs有明显的促进增殖作用,其作用与Pur的剂量有关。     

葛根素对牛主动脉内皮细胞增殖的影响

目的:观察葛根素(Pue)对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响.方法:取BAECs细胞,分为窄白对照组(C组):常规培养24 h;溶媒组(S组):加PBS后培养24 h;葛根素(Pue)低、中及高剂量组:分别加入终质量浓度为0.5 g/L(P1组)、1.0g/L(P2组)及1.5 g/L(P3组)的Pue,再培养24 h.另取细胞,同上分组,均于加药前2h加入L-单甲基精氨酸(L-NMMA),加药后再培养24 h.采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western Blot检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果:Pue可促进BAECs的增殖,升高S+G2/M期的细胞比例,促进BAECs eNOS蛋白的表达(F=277.27,570.65,1 051.99,P<0.001),而L-NMMA可抑制上述效应.结论:Pue可促进BAECs进入分裂期从而促进增殖,其机制可能与增加eNOS的表达从而上调NO水平有关.     

三氧化二砷对血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的:观察As2O3对血管内皮细胞增殖、凋亡和细胞周期的干扰,探讨As2O3对血管内皮细胞生长的直接影响。方法:血管内皮细胞EVC-304体外培养,As2O3干预。采用MTT测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡。结果:ECV-304细胞经过As2O3干预,其存活率明显降低,并且呈剂量依赖性。As2O3干预后,进入S期的细胞减少,细胞周期被阻在G1期,细胞可能在G1期进入凋亡。As2O3诱导早期凋亡是对照组的2.88～5.1倍,并且呈剂量依赖性;其晚期凋亡是对照组的1.17～1.67倍。结论:As2O3可直接干扰血管内皮细胞的细胞周期,阻滞细胞在G1期,并诱导细胞凋亡,进而抑制血管内皮细胞的增殖。     

脉络宁注射液对血管内皮细胞增殖的影响

采用体外培养的铬的主动脉血管内此细胞，以含浓度为１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ和５０ｍｇ／ｍｌ脉络宁注射液的培养基培养７２小时后，检测培养基中内皮细胞代谢的ＭＴＴ的含量。结果表明，这三个浓度的脉络宁注射液均有明显的促进血管内皮细胞增殖的作用。     

热应激对培养血管内皮细胞增殖的影响

目的：探讨热应激条件下血管内皮细胞增殖变化的特点有相关机制。方法：以血管内皮细胞株MCV304受热43℃、2h为热应激实验模型，观察血管内皮细胞的细胞间粘附分子（ICAM－1）、分化抑制因子1（Id1)、P16及P21的蛋白表达变化，^3H标记胸腺嘧啶核苷酸（^3H-TdR)掺入法测定细胞DNA的合成。结果：热应激后血管内皮细胞ICAM－1表达增强，Id1表达受抑制，P16，P21蛋白的表达增强。^3H-TdR掺入实验显示热应激可显著抑制血管内皮细胞的DNA合成。结论：热应激可以活化血管内皮细胞，抑制细胞增殖，从而改变增殖与分化的协调关系，并可能进而影响创伤后组织细胞的修复。     

17β－雌二醇对血管内皮细胞增殖的影响

【目的】 从膜雌激素受体(membrane estrogen receptor，mER)的角度探讨17β雌二醇(17β-estradiol，E2)对血管内皮细胞vascular endothelial cells，VEC)增殖的影响，以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在促VEC增殖中的作用。【方法】 在培养小牛胸主动脉内皮细胞(BAECs)上，应用[3H]-Tdr掺入法测定DNA合成，免疫印迹法检测磷酸化MAPK蛋白(磷酸化p42／p44)表达，流式细胞仪检测mER。【结果】 不同浓度的E2(0．001～1μmol／L)作用于BAECs 24h，均能使[3H]-Tdr掺入率增加，以0．01μmol／L E2作用最强。雌激素受体(estrogen receptor，ER)阻断剂他莫昔芬(tamoxifen)(0．1μmol／L)或MAPK特异性抑制剂PD98059(50μmol／L)预处理BAECs 1h，均明显抑制0．01μmol／LE2诱导的BAECsDNA合成；E2(0．0lμmol／L)、E2BSA(0．01μmol／L)作用于BAECs 15min后均能激活p42／p44磷酸化MAPK蛋白，他莫昔芬可明显抑制E2、E2BSA的作用；流式细胞仪检测结果显示阳性处理组和阴性对照组间荧光强度均值差异有统计学意义。【结论】 BAECs膜上存在mER．E2可通过mER介导发挥其快速激活MAPK信号通路的非基因效应，进而促进VEC增殖。     

兔血管内皮细胞与平滑肌细胞体外增殖的相互影响

目的　研究在体外培养条件下血管内皮细胞条件培养基（ECCM）、内皮素-1（ET-1）、内皮素转化酶抑制剂phosphoramidon对血管平滑肌细胞（SMC）增殖的影响,同时研究了血管平滑肌细胞条件培养基（SMCCM）对血管内皮细胞（EC）增殖方面的影响. 方法　EC和SMC均来源于兔主动脉,在获得了EC和SMC的条件培养基（CM）后,分别用两者以及ET-1进行实验,细胞的增殖率通过3H掺入法进行测定. 结果　ECCM和ET-1可明显促进SMC的增殖,并呈现剂量依赖性. 其最大效应分别为(190±11)% (100% ECCM)和(166±9)% (100 ng*L-1 ET-1). 而phosphoramidon存在条件下的ECCM使其分裂作用降低了(33±2)%. SMCCM抑制EC的增殖,这种抑制作用并非剂量依赖性,其最大的抑制效应为基本水平的(78±3)%. 结论　ECCM和ET-1可促进SMC的增殖作用. phosphoramidon可明显地抑制ECCM对SMC的增殖作用.同时SMCCM对EC的增殖起抑制作用.     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Pg)对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，探讨Pg对牙龈血管内皮细胞的毒性作用。方法：以厌氧袋法培养Pg，原代培养HUVEC，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）观察HUVEC的增殖状态。结果：活的和灭活的Pg都剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖，活的Pg作用比灭活的Pg更为强烈，而Pg毒力株W83和非毒力株ATCC33277对HUVEC增殖的影响无显著差异。结论：Pg可能通过损伤牙龈组织的血管内皮细胞加重局部的炎性反应，可能是Pg诱导牙周组织破坏的病理机制之一。     

葛根素对急性水肿性胰腺炎血管内皮细胞血管内皮钙黏着蛋白表达的影响

目的探讨葛根素注射液对急性水肿性胰腺炎（AEP）动物模型的胰腺血管内皮细胞血管内皮钙黏着蛋白（VE-cadherin）的表达、分布及其调节作用。方法 18只Wistar大鼠按数字表法随机分为正常对照组、AEP治疗组和AEP自然病程组,每组各6只,后两组建AEP动物模型。AEP治疗组给予葛根素注射液100 mg/kg。应用荧光免疫组织化学染色,观察3组大鼠胰腺血管内皮VE-cadherin的表达。结果 3组血清淀粉酶比较差异有统计学意义（P〈0.05）,治疗组与自然病程组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。正常对照组胰腺组织肉眼观察无明显改变;AEP自然病程组胰腺组织水肿较明显,AEP治疗组与AEP自然病程组胰腺外观相似。3组标本的平均荧光强度差异有统计学意义（P〈0.05）,AEP自然病程组的荧光强度为（1.04±0.05）,低于正常对照组的（1.41±0.06）,差异有统计学意义（P〈0.05）,而治疗组为（1.25±0.07）,较非治疗组明显改善,但与正常对照组比较仍低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在AEP时VE-cadherin分布异常、表达水平下降,葛根素可改善其分布及表达水平。     

不同浓度川芎对血管内皮细胞生长的影响

目的探讨不同浓度川芎提取液对血管内皮细胞生长的影响;方法分别用浓度为2、20、200g／ml的川芎嗪实验培养液对血管内皮细胞进行培养干预,作用时间分别为24、48、72、96h观察不同浓度川芎嗪对血管内皮细胞生长的影响;结果在培养24h情况下,加入不同浓度川芎嗪的实验组细胞个数极显著低于空白对照组（“P〈0.01”）,同样,在培养48h条件下,随着川芎嗪浓度的增加,对血管内皮细胞生长的抑制作用越来越明显,细胞个数分别为11.01、8．68和7.97,显著低于空白对照组的11.76（“P〈0．05”）,差异显著。在培养72h条件下,随着川芎嗪浓度的增加,对血管内皮细胞生长的抑制作用越来越明显,细胞个数分别为15.36、13．78和9．09,显著低于空白对照组的21．37（“P〈0.01”）,差异极显著,在培养96h条件下也有同样的趋势。结论川芎嗪显著抑制血管内皮细胞的生长,随着浓度的增加,其抑制作用越明显,并且随着培养时间的增加,其抑制作用也越明显。     

黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究黄芪微乳载入修饰后胶原对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,进一步探讨黄芪微乳对HUVEC增生的作用及其机制?方法:体外培养HUVEC细胞,用含1%FCS的RPMI-1640培养液同步24 h后,分为2组进行观察:空白微乳胶原组和黄芪微乳胶原组,并设定空白微乳和黄芪微乳的浓度分别为16.90?8.50?4.20?2.10?1.05 μg/ml等5个浓度,每组每个浓度设3个复孔?干预48 h后,采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖情况;实时荧光定量RT-PCR检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达?结果:干预48 h后,在浓度分别为16.9?8.5?4.2 μg/ml的黄芪微乳胶原组HUVEC的吸光度值?细胞分裂增殖指数和VEGF mRNA表达均明显高于相应浓度的空白微乳胶原组(P < 0.05,P < 0.01)?结论:黄芪微乳能促进HUVEC的增殖,并上调HUVEC的VEGF mRNA表达,推测黄芪微乳可能具有促进血管生成的作用?     

骨桥蛋白对骨髓内皮祖细胞体外增殖功能的影响

目的观察骨桥蛋白(OPN)对体外培养的人骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖功能的影响及可能的机制。方法以密度梯度离心法获取人骨髓单个核细胞(MNCs),差速贴壁法培养8d,由形态学、流式细胞仪、Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双染鉴定为EPC后,免疫组化和RT-PCR方法检测OPN在EPC的表达。加入不同浓度人重组OPN和PI3K抑制剂LY294002和Akt抑制剂作用于EPC,采用CCK-8法观测EPC的增殖能力。结果人重组OPN促进EPC的增殖功能,并且呈剂量依赖性。抑制PI3K/Akt信号通路可以阻断OPN对EPC增殖能力的影响。结论人重组OPN在体外可能通过PI3K/Akt信号通路调节人骨髓源性EPC的增殖能力。     

内皮细胞生长因子诱导大鼠血管内皮细胞增殖过程中FKBP12的表达

目的探讨内皮细胞生长因子(Endothelial cell growth factor，ECGF)诱导的血管内皮细胞(Vascular endothelial cell，VEC)增殖过程中FK506结合蛋白12(FK506 binding protein 12，FKBP12)表达的变化，为VEC的鉴定提供新的方法。方法培养大鼠VEC并传代。倒置显微镜下观察其在ECGF作用下的增殖情况，检测Ⅷ因子相关抗原、FKBP12和不同时期FKBP12 mRNA水平的表达。结果VEC表达FKBP12；VEC传代后第4天FKBP12 mRNA表达水平达到最高，6—8d下降。结论FKBP12既可作为VEC的标志物，又可反映VEC的增殖情况。     

VIP促进人脐静脉血管内皮细胞增殖及合成VEGF的初步研究

目的 通过观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)促进人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein vessel endothelial cells,HUVECs)的增殖以及刺激VEGF的合成情况,探讨VIP在创伤组织修复过程中的生物学效应.方法 体外培养HUVECs细胞系,分为有血清培养组和无血清培养组,这两组分别加入VIP和PBS进行干预,应用MTT法测定HUVECs的增殖情况,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF165)在HUVECs的合成.结果 VIP能促进血管内皮细胞的增殖,且两组都有VEGF生成,但VIP组VEGF的量显著高于PBS组.结论 VIP能促进HUVECs的增殖以及增强血管内皮细胞内VEGF的合成和分泌,在创伤组织修复过程中可能发挥促新生血管形成的作用.     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的 探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)功能的影响。方法 以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12h后细胞显微结构。结果 不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用(P<0.01),低剂量兔血清作用1h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF(P<0.01)。结论 生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一。     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株（ECV304细胞）增殖及分泌血管内皮生长因子（VEGF）功能的影响.方法以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12 h后细胞显微结构.结果不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12 h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用（P＜0.01）,低剂量兔血清作用1 h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF（P＜0.01）.结论生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一.