胞内Ca^2＋,Na^＋和ATP的稳定性介导NMDA诱导兴奋保护作用

目的;研究Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）诱导大鼠小脑颗凿神经元兴奋毒性保护作用的机制。方法：分别用Ｃａ＾２＋和Ｎａ＾＋敏感的染料Ｆｕｒａ－２／ＡＭ和ＳＢＦＩ／ＡＭ测定胞内Ｃａ＾２＋和Ｂａ＾＋浓度「（Ｃａ＾２＋）ｉ,（Ｎａ＾＋）ｉ」,并用反向高效液相法测定胞内三磷酸腺苷（ＡＴＰ）的含量。结果：（１）在ＮＭＤＡ预处理组与非处理组,谷氨酸均迅速触发胞内Ｃａ＾２＋反应高峰,两者无显著性差异。而后在ＮＭ     

CNTF对AMPA和NMDA引起海马神经元Ca2+浓度升高的作用

①目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对两种谷氨酸(Glu)离子型受体激动剂(α-氨基羧甲基异哑恶唑丙酸,AMPA;N-甲基-D-天冬氨酸,NMDA)激发的海马神经元内游离Ca2+([Ca2+]i)升高的作用.②方法原代培养海马神经元,在有或无CNTF条件下用活细胞内荧光探针Fura-2-AM实时检测AMPA和NMDA引起海马神经元内[Ca2+]i变化的情况.③结果 AMPA和NMDA均可引起细胞内[Ca2+]i升高,并呈量效依赖性;CNTF可快速抑制NMDA引起的海马神经元内[Ca2+]i升高(t=2.97～4.86,P＜0.05),而对AMPA的作用无影响(t=0.22～0.74,P＞0.05).④结论 CNTF可能通过与NMDA型受体相互作用而快速启动Ca2+信号的途径,保护因Glu引起的海马神经元损伤.AMPA型受体可能与CNTF的快速作用无关.     

NMDA受体和IP3受体介导NMDA诱导的小脑颗粒神经元内Ca2＋超载

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）诱导的小脑颗粒神经元（CGNs）钙超载与NMDA受体（NMDAR）及细胞内钙库受体三磷酸肌醇受体（IRR）和兰尼定受体（RyR）之间的关系。方法取出生后8dSD大鼠小脑进行颗粒神经元体外培养。用NMDA（100μmol／L）急性损伤神经元,在激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）扫描开始前30min,或扫描开始后4,9,14min分别加入NMDAR、IRR、RyR拮抗剂MK．80l、2-APB和DAN,检测神经元内Ca^2＋浓度的动态变化。结果MK-801预孵育神经元经NMDA急性刺激后,神经元内ca2’的荧光强度不再升高,NMDA刺激后加入MK-801,上升的ca^2＋水平立即下降,最终下降至基线水平;NMDA急性刺激2-APB预孵育神经元,神经元内ca^2＋的荧光强度升高,但升高幅度明显低于未经NMDA刺激组,NMDA刺激后加入2-APB,细胞内升高的Ca^2＋水平急剧下降,最终下降至接近基线水平;DAN预孵育的神经元经NMDA急性刺激后,胞内ca^2＋的荧光强度急剧升高,达到NMDA刺激组水平,NMDA刺激后加入DAN,神经元内ca^2＋水平无明显下降。结论NMDA诱导的神经元ca^2＋超载,主要由细胞膜钙通道NMDAR和细胞内钙释放通道IP3R介导,而细胞内钙释放通道RyR不起主导作用．     

微孔板神经元NMDA损伤模型的建立及药物神经保护作用评价

[目的]建立96微孔板神经元N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）损伤模型,并评价NMDA受体拮抗剂氯胺酮和抗炎症药米诺环素（minocycline）对神经元NMDA损伤的保护作用。[方法]用96微孔板原代培养的新生大鼠神经元体外培养至第10天（DIV10）时,用不同浓度的NMDA处理不同时间,以形态学和MTT染色为指标观察神经元的损伤情况,并观察氯胺酮和米诺环素对50μmol／L NMDA处理3h造成的皮层神经元急性损伤的作用。[结果]随着NMDA浓度的增加和作用时间的延长,其神经毒性增加。氯胺酮100、10、1μmol／L和minocycline 135、45μmol／L预处理对50μmol／L NMDA处理3h造成的皮层神经元急性损伤有明显的保护作用（P〈0．01）。[结论]96微孔板培养的原代神经元NMDA损伤模型可以用于评价药物对神经元损伤的保护作用。     

兴奋性氨基酸和特异性受体对大鼠百日咳杆菌脑损伤的作用

目的 :探讨兴奋性氨基酸、N 甲基 D 天冬氨酸受体 (NMDAR)在大鼠百日咳杆菌脑损伤中的变化及作用机制。方法 :用高效液相色谱法、[3 H]MK 80 1放射配体结合分析法及Fura 2 /Am分别检测大鼠百日咳杆菌脑损伤时大脑皮质内谷氨酸 (Glu)和谷氨酰胺 (Gln)含量、NMDAR钙通道的结合位点 (最大结合位点Bmax)及活性 (平衡解离常数Kd)、大脑皮质突触细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的变化。结果 :与盐水组比较 ,注菌组Gln显著增高 (P <0 .0 5 ) ,Kd值减小 (P <0 .0 5 )、Bmax值差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,[Ca2 + ]i 较盐水组增高 (P <0 .0 1) ,并随注菌时间延长而显著增高 (2 4hvs 4h ,P <0 .0 1) ;MK 80 1预处理组 [Ca2 + ]i、脑含水量、伊文思蓝含量、Glu和Gln含量均较注菌组减少 (F值分别为 5 4 .2 4 36、15 .6 2 8、14 .4 2 5、10 .2 4 5 8、14 .0 2 34,P <0 .0 1) ,2 4h组 [Ca2 + ]i 减少最为显著 (P <0 .0 1)。结论 :EAAs介导的NMDAR激活及相应的钙内流增加在大鼠百日咳杆菌脑损伤中 ,尤其在百日咳杆菌致大鼠迟发性脑损伤的发病机制中可能起着重要作用。     

G蛋白耦联受体30通过抑制NNR2B受体介导雌激素快速神经保护作用

雌激素是一种类固醇激素,能够抑制兴奋性神经毒性损伤而发挥神经保护作用。雌激素可通过基因组和非基因机制调节谷氨酸NMDA（N—methyl—D—aspartate,N-甲基-D-天冬氨酸）和非NMDA受体,从而调控兴奋性神经毒性和细胞信号传递。研究表明GPR30受体（G—protein—coupled receptor30,G蛋白耦联受体30）参与局部缺血损伤的神经保护,但是分子机制仍不清楚。     

沸水烫伤后大鼠心、肝组织Na+,K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性变化及三七保护作用探讨

目的 :观察严重烫伤后大鼠心、肝组织Na 、K -ATPase和Ca2 -ATPase活性变化及三七的保护作用。方法 :采用健康Wistar大鼠制作 40 %TBSAⅢ度烫伤模型 ,在伤后 4h、8h、2 4h和 48h取心和肝组织匀浆 ,用比色法测定Na 、K -ATPase和Ca2 -ATPase活性变化。结果 :单烫伤组大鼠心肌组织Na 、K -ATPase在伤后 4h酶活性稍有升高 ,心、肝组织Na 、K -ATPase和Ca2 -ATPase活性均进行下降 ,伤后48h达最低点。治疗组大鼠心和肝组织Na 、K -ATPase和Ca2 -ATPase活性均进行性增加。结论 :Na 、K -ATPase和Ca2 -ATPase分布存在组织的特异性 ,严重烫伤对远隔重要生命器官心和肝有损害作用 ,用三七则对严重烫伤大鼠心和肝有保护作用     

米诺环素对大鼠原代神经元和海马脑片缺氧缺糖及NMDA损伤的保护作用

目的:建立神经元和海马脑片缺氧缺糖(OGD)及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,观察抗炎药米诺环素的神经元保护作用及其特点.方法:体外培养大鼠脑皮层神经元,以OGD和NMDA(50 μmol/L)处理,观察损伤前后神经元形态变化,并以MTT检测神经元活性;以透光法检测OGD和NMDA处理引起的大鼠海马脑片透光度(LT)改变;在上述模型中同时观察米诺环素及NMDA受体拮抗剂MK-801的作用.结果:在OGD过程中米诺环素1、10 μmol/L能浓度依赖地提高神经元的活性,改善神经元形态改变;米诺环素10、100 μmol/L对NMDA损伤有保护作用;MK-801 1 μmol/L对两种损伤模型均有保护作用.米诺环素1或10 μmol/L对OGD和NMDA引起的海马脑片LT增加无明显影响;MK-801 1 μmol/L则能显著抑制LT增加.结论:米诺环素对神经元OGD损伤具有保护作用,可能是通过对NMDA受体介导的兴奋性毒性的间接抑制;但对海马脑片OGD和NMDA即刻损伤无保护作用.     

Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin （HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）
组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果： 倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。 结论： NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。     

基于自噬探讨龙蛭汤含药血清对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞氧化损伤的保护作用

目的:基于自噬探讨龙蛭汤(LZD)含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化损伤的保护作用.方法:采用H2O2诱导SH-SY5Y构建氧化应激损伤模型,观察LZD含药血清对细胞的保护作用.加入自噬激动剂雷帕霉素(RAP)、抑制剂氯喹(CQ)干预SH-SY5Y细胞,观察自噬在SH-SY5Y损伤中...     

腹主动脉狭窄致心功能不全大鼠主动脉Na~ /Ca~(2 )交换功能变化

探讨压力负荷增高致心功能不全大鼠主动脉Na /Ca2 交换功能变化。心功能不全大鼠模型制备采用腹主动脉狭窄术 ,以Langendorff离体心脏灌流装置对大鼠离体心功能进行监测 ,分别用无钠台氏液以及 30、6 0、90、12 0mmol/LNa 浓度的台氏液对大鼠离体主动脉环灌流 ,并进行张力测定。实验结果表明 ,腹主动脉狭窄大鼠各项心功能指标与伪手术组动物相比均降低 (P <0 0 5 ) ;在用不同钠浓度的台氏液灌流离体血管环实验中 ,手术组大鼠血管张力增加均高于伪手术组 (P <0 0 5 )。说明压力负荷增高致大鼠心功能不全的同时 ,主动脉平滑肌Na /Ca2 交换功能增强 ,可能为血管对压力负荷增高作出的一种适应性反应。     

异丙酚、咪唑安定、依托咪酯及同芬太尼复合后对大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

的　观察麻醉诱导峰浓度的异丙酚、咪唑安定、依托咪酯及同芬太尼复合后,对心肌细胞钙离子移动的影响,研究其对心肌收缩力的作用。方法　用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色急性分离的大鼠心肌细胞,在激光共聚焦显微镜下动态观察用药前和使用异丙酚(50μmol/L)、咪唑安定(3μmol/L)、依托咪酯(3μmol/L)及复合芬太尼(20ng/ml)后,KCl诱发的细胞内钙离子荧光强度的变化。结果　异丙酚明显抑制钙离子跨膜内流,细胞内钙荧光强度峰值较对照组下降15.3%(P<0.05),而咪唑安定、依托咪酯虽减慢钙的内流,但最终细胞内钙荧光强度与对照组无统计学差异(P>0.05)。复合芬太尼后,各组细胞内钙荧光强度升高的速度和峰值较单独使用该静脉麻醉药无统计学差异(P>0.05)。结论　复合使用芬太尼不会加重异丙酚、咪唑安定、依托咪酯对心肌细胞钙内流的抑制作用     

粉防己碱对鼠脑缺血海马神经细胞的保护作用

采用全脑缺血再灌注模型,应用Fura-2荧光探针检测海马神经细胞游离钙（［Ca2+］i）水平,硫代巴比妥显色法检测海马匀浆中过氧化脂质（LPO）含量,同时电镜下观察海马CA1区神经细胞改变,以评价药物粉防己碱的作用。结果表明粉防己碱预处理后,能够显著抑制全脑缺血20min再灌注60min海马组织［Ca2+］i及LPO含量的升高,减轻神经细胞病理损伤。提示粉防己碱有一定程度的脑保护作用。     

电针“心俞-神门”对急性心肌缺血模型大鼠心肌与海马组织Glu、Asp和NR1表达的影响

目的观察电针“心俞-神门”配穴对急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)模型大鼠心肌和海马组织谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚基NMDAR1(NR1)的影响,探讨俞原配穴的协同效应,及其对AMI致脑损伤保护的作用机制。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针“神门”组(神门组)、电针“心俞”组(心俞组)和电针“心俞+神门”组(心神组),每组12只。除假手术组外,其他4组大鼠选用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI模型。干预组每天电针治疗1次,20 min/次,共治疗1周,假手术组和模型组不作干预治疗。观察分析心电图ST段变化;ELISA法检测各组大鼠心肌和海马组织中Glu、Asp浓度;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌和海马组织中NR1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心电图ST段明显抬高(P<0.01),心肌、海马Glu、Asp浓度和NR1 mRNA表达均显著上升(P<0.01);与模型组比较,3组电针组治疗后ST段明显降低(P<0.01),心神组心肌和海马Glu、Asp浓度、NR1 mRNA表达均明显下降(P<0.01),神门组、心俞组心肌和海马NR1 mRNA表达及心肌Asp、海马Glu浓度均显著下降(P<0.01);与神门组比较,心神组心肌Asp浓度和海马Glu、Asp浓度及心肌和海马的NR1 mRNA表达均明显下降(P<0.05或P<0.01);与心俞组比较,心神组心肌和海马Asp浓度、NR1 mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。Pearson相关分析显示,电针治疗后心肌、海马组织中Glu浓度与NR1 mRNA表达呈正相关。结论电针俞原配穴“心俞-神门”能够改善AMI模型大鼠心肌缺血状态,降低心肌组织和海马组织的兴奋性氨基酸Glu、Asp和NR1水平,可能是其发挥保护心肌缺血致脑损伤的作用机制之一。     

Lead Can Inhibit NMDA-,K~ -,QA/KA-Induced Increases in Intracellular Free Ca~(2 ) in Cultured Rat Hippocampal Neurons

Objective To examine the effects of Pb2 on N-methyl-D-aspartate (NMDA)-, K - and quisqualate(QA)/kainite(KA)-induced increases in intracellular free calcium concentration ([Ca2 ],) in cultured fetal rat hippocampal neurons in order to explain the cognitive and learning deficits produced by this heavy metal. Methods Laser scanning confocal microscopy was used. Results The results clearly demonstrated that adding Pb2 before or after NMDA/glycine stimulation selectively inhibited the stimulated increases in [Ca2 ], in a concentration-dependent manner. In contrast, Pb2 treatment did not markedly affect increases in [Ca2 ], induced by an admixture of QA and KA. The minimal inhibitory effect of Pb2 occurred at 1μmol/L, and more than seventy percent abolition of the NMDA-stimulated increase in [Ca2 ], was observed at 100 μmol/L Pb2 . Evaluation of Pb2 -induced increase in [Ca2 ], response to elevating extracellular concentrations of NMDA, glycine or calcium revealed that Pb2 was a noncompetitive antagon     

脑梗塞患者ET与红细胞膜Na~ -K~ ,Ca~(2 )-Mg~(2 )ATP酶的关系及其对血液粘度的影响

目的 :探讨脑梗塞患者 (CI)血浆内皮素 (ET)水平与红细胞膜Na -K 、Ca2 -Mg2 ATPase活力的关系及其对血液粘度的影响。方法 :测定 49例CI和 2 9例健康人的ET、Na -K ATPase、Ca2 -Mg2 ATPase以及血液粘度等指标。结果 :CI组 :ET水平与Na -K ATPase、Ca2 -Mg2 ATPase活力呈明显负相关 (P均 <0 .0 5 ) ;与 ηb、ηp、ηre、HCT、K值、EAT、TK呈明显正相关。多元逐步回归统计分析 :ηb与ET的关系最为密切 (P <0 .0 1)。 结论 :①ET、Na -K ,Ca2 -Mg2 ATP酶活力的变化能引起血液粘度改变。其中ET主要是通过收缩血管 ,改变红细胞膜Na -k 泵、Ca2 泵的活性 ,导致红细胞变形能力下降。②临床上采用保护血管张力的药物、稀释血液等综合治疗 ,能有效地预防和治疗脑动脉粥样硬化和CI。     

Differential Responses of Thrombin-Induced Aggregation,ATP Release and [Ca~(2+)] i Mobilization in Heterogeneous Washed Rabbit Platelets by Density

In this experiment, the rabbit platelets could be seperated into three heterogeneous subpopulations by continuous gradient density of percall, i.e.,high density platelets(HD, 20%～30%), intermediate density platelets (MD, 40%～50%) and low density platelets(LD, 10%～15%). The size of platelets in three subpopulations with density were also significantly different in area(HD: 725.21±24.93, MD: 442.58±18.01 and LD: 307.34±15.60). Thrombin(15unit/ml)-induced aggregation was HD: 77.74%±8.43%(P<0.01 vs MD and LD), MD: 69.36±4.26% and LD: 67.24±3.08% respectively. The secretion of adenosine triphosphate(ATP)was measured simultaneously during aggregation, the results indicated that HD with a larger amount of ATP release(4.67±0.92μmol/L/10~8 platelets, P<0.01 vs MD and LD), ATP release in LD was the lowest (2.65±0.63μmol/L/10~8 platelets),the level of ATP in MD was between other two groups (3.44±0.96μmol/L/10~1 platelets), We also measured the cytosolie free calcium concentration [Ca~(2+)]_i mobilized by thrombin in single washed platelet using digital imaging flourescent microscope and computer assitant image analysing system. The results showed that [Ca~(2+)]_i was increased by thrombin dose-dependently from the basic level (67.14±8.51 nmol/L), however, [Ca~(2+)]_i level increased by thrombin in HD was much higher than that in LD(P<0.001),and also indicated that the time of peak value of [Ca~(2+)]_i in HD (10 sec)was appeared earlier than that of in LD(30sec)after the administration of thrombin.