长期酒精作用对大鼠骨骼肌PI-3K表达的影响

目的:研究酒精长期作用下对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI-3K)调节亚基p85αmRNA及蛋白水平表达的影响,探讨酒精引起胰岛素抵抗的相关分子机制。方法:清洁级Wistar大鼠80只(雌雄各半),按体重随机分为对照组和低、中、高剂量组,分别给予蒸馏水以及10%、20%、33%酒精溶液,灌胃剂量为10ml/(kg·bw·d)。第19周末,断头处死大鼠,测定空腹血糖和血胰岛素,计算HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。分离骨骼肌,通过RT-PCR和Westernblot方法测定p85αmRNA和蛋白表达水平。结果:雄性大鼠高剂量组空腹血糖,低、中剂量组空腹胰岛素水平升高,各酒精剂量组HOMA-IR指数均升高。p85αmRNA及蛋白表达水平表现为随着酒精剂量的增加先升高后降低;雌性大鼠高剂量组空腹血糖升高、空腹血胰岛素下降,p85αmRNA及蛋白的表达在中、高剂量组降低。各剂量组HOMA-IR指数与对照组比较差异无显著性。结论:长期摄入过量酒精可以造成骨骼肌组织p85α表达的改变,这可能是酒精降低胰岛素敏感性,引起胰岛素抵抗的分子机制。     

长期酒精摄入对雄性大鼠胰岛素敏感性及肝脏IR、IRS-1、IRS-2 mRNA表达的影响

目的从基因表达水平探讨长期酒精摄入影响肝脏胰岛素敏感性的分子机制。方法清洁级Wistar雄性大鼠40只,随机分为对照组和低、中、高剂量酒精组,每天摄入酒精剂量分别为0、0·8、1·6和2·4g/kg bw。给予酒精19周后,测定空腹血糖、血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。提取肝脏总RNA,通过RT-PCR测定胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA表达水平。结果与对照组相比,高剂量组血糖升高(P<0·05);各剂量组血胰岛素浓度均升高,低、中剂量组升高有显著性差异(P<0·05);各剂量组HOMA-IR均显著高于对照组(P<0·05)。各剂量组IR mRNA表达均降低;IRS-1及IRS-2mRNA表达在低、中剂量组升高,高剂量组降低。结论长期过量酒精摄入可以引起雄性大鼠胰岛素抵抗,肝脏IR、IRS-1、IRS-2mRNA表达降低是酒精影响胰岛素敏感性的分子机制之一。     

长期酒精摄入引起大鼠胰岛素抵抗及其分子机制

目的研究酒精摄入与胰岛素敏感性之间的关系并深入探讨其相关的分子机制。方法清洁级Wistar大鼠80只(雌雄各半),按体重随机分为对照组和低、中、高剂量共4组,每天摄入酒精剂量分别为0、0.8、1.6、2.4g/(kg·bw)。第19w末,断头处死大鼠,测定空腹血糖和血胰岛素,计算HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。提取肝组织,通过Western blot方法测定磷脂酰肌醇3激酶p85亚单位(p85subunit of phosphoinositide3-kinase,PI-3Kp85),葡萄糖转运体2(Glucose transporter-2)蛋白表达水平。结果与对照组相比,雄性大鼠高剂量组空腹血糖升高,低、中剂量组空腹胰岛素水平升高,各酒精剂量组HOMA-IR指数均升高PI3-K、GLUT-2蛋白在高剂量组表达降低;与对照组比较,雌性大鼠高剂量组空腹血糖升高、空腹血胰岛素下降。各剂量组HOMA-IR指数与对照组比较差异无显著性,PI3-K、GLUT-2蛋白在中,高酒精剂量组的表达均降低。结论长期酒精摄入可以引起胰岛素抵抗,肝脏PI-3K(p85),Glu-4蛋白表达水平的降低,可能是酒精胰岛素抵抗的分子机制之一。     

酒精联合高脂饮食对大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的研究酒精和高脂饮食对雄性大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)P85αmRNA及蛋白水平表达的影响。方法酒精灌胃和高脂饮食方法建立动物模型。测定空腹血糖和血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。通过RT-PCR和Western blotting方法测定P85αmRNA及蛋白水平。结果与普通对照组相比,高脂对照组HOMA-IR指数升高;与高脂对照组相比,各剂量酒精和高脂饮食组血糖升高,胰岛素抵抗指数在低中剂量组升高,各剂量酒精联合高脂饮食组脂肪组织PI-3KP85αmRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论高脂饮食导致胰岛素抵抗;与单独高脂饮食相比,酒精联合高脂饮食加剧胰岛素抵抗程度。磷脂酰肌醇3激酶P85α mRNA及蛋白水平改变。     

酒精对大鼠胰岛素受体及底物-1基因表达影响

目的 研究慢性酒精摄入对雄性大鼠脂肪组织胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)mRNA表达的影响,探讨酒精与胰岛素敏感性的关系及相关分子机制.方法 清洁级雄性Wistar大鼠40只,按体重随机分为对照组和低、中、高酒精剂量组,每天分别给予0,0.8,1.6和2.4g/(kg·bw)的酒精灌胃.第19周末,断头处死大鼠,测定空腹血糖和血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).提取脂肪组织总RNA,通过半定量聚合酶链式反应方法测定IR、IRS-1mRNA表达水平.结果 与对照组相比,中、高剂量组空腹血糖(葡萄糖)浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);低、中剂量组胰岛素浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);各剂量组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的升高差异均有统计学意义(P<0.05).低、中、高酒精剂量组IR、IRS-1mRNA表达水平分别为(0.588±0.039),(0.504±0.070);(2.678±0.031),(1.178±0.177);(0.761±0.137),(0.515±0.037).与对照组相比,各酒精剂量组IR、IRS-1mRNA表达水平均增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢性酒精摄入可以引起雄性大鼠胰岛素抵抗,酒精造成脂肪组织IR、IRS-1mRNA表达的改变可能是引起胰岛素抵抗的分子机制之一.     

明日叶查尔酮对糖尿病大鼠肝细胞PI3K和AktmRNA表达的影响

目的研究明日叶查尔酮(ashitabe chalcone,AC)对糖尿病大鼠肝细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidy I inositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶(serine-threonine kinases,Akt)mRNA表达的影响。方法高脂饲料喂养加链尿佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均喂饲高脂饲料,分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮0、30和10mg/kg BW。另设一个正常对照组为正常大鼠喂饲普通饲料,实验周期4周。用放射免疫分析法检测血清胰岛素水平,葡萄糖氧化酶法测血糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测肝细胞PI3K和Akt mRNA表达水平,蛋白印迹法测肝细胞Akt磷酸化水平。结果高剂量AC组空腹血糖和血清胰岛素水平显著低于糖尿病对照组,而PI3K mRNA、Akt mRNA和磷酸化Akt蛋白表达水平均显著高于糖尿病对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论明日叶查尔酮可上调糖尿病大鼠PI3K和Akt mRNA的表达水平,改善胰岛素抵抗。     

不同年龄大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶表达水平的研究

目的：探讨大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶（P13K）的表达随增龄的变化。方法：35只健康sD大鼠按月龄分为五组,分别为1月龄组7只,6月龄组7只,12月龄组7只,18月龄组7只,24月龄组7只。提取胰腺组织蛋白后用Western-Blot方法检测胰岛素受体和P13K的蛋白水平,应用免疫组化方法检测胰岛素受体的分布。结果：（1）胰腺组织内胰岛索受体集中分布在胰岛细胞表面,腺泡细胞也有表达。（2）1月龄组及18月龄组大鼠胰腺组织中的胰岛素受体蛋白表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。1月龄组P13K蛋白质表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。结论：进入老年期,大鼠胰腺组织中胰岛素受体及P13K的表达升高。     

补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1基因表达的影响

目的研究补铬对糖尿病大鼠骨骼肌代谢相关基因表达的影响。方法对前期研究分离到的与补铬有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RTPCR检测。用激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果经过克隆、测序、同源性比较,差显片段Cr5的碱基序列与IRS1同源性为100%。糖尿病对照组IRS1mRNA表达量(0791±0038)低于正常对照组(0892±0053,P<005),糖尿病补铬组IRS1mRNA的表达量(0822±0066)与糖尿病对照组相比有所恢复,但尚未恢复到正常水平(P>005)。结论补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS1mRNA表达有上调趋势,Cr5将作为候选基因有待于进一步研究。     

长期摄入酒精对大鼠血糖和胰岛素的影响

为探讨长期摄入酒精对大鼠血糖，胰岛素及糖耐量（GTT）的影响，以不同学的酒精溶液对大鼠灌胃60天，结果显示：大鼠摄入30％，50％酒精60天后，与对照组比较，空腹血糖明显升高，1h,2h,3h糖耐量异常（P＜0．05），并且雌雄大鼠之间也存在明显差异，随着剂量的增加，各组血胰岛素水平逐渐降低，50％酒精摄入组与对照组存在着明显差异（P＜0．05），结果提示：长期饮酒可导致大鼠空腹血糖升高，糖耐量异常，提示长期饮酒有可能导致糖尿病，并且胰岛素水平降低可能是导致糖尿病的机制之一。     

长期酒精摄入对大鼠胰岛素分泌功能的影响

目的:研究长期酒精摄入对大鼠血糖、血清胰岛素及胰岛素基因表达影响。方法:清洁级Wistar大鼠80只,雌雄各半,随机分为对照组和低、中、高剂量组,摄入酒精剂量分别为0、0.8、1.6和2.4g/(kgbw?d)。给予酒精18w后,进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),第19w末,断头处死,测定空腹血糖和血胰岛素水平,计算Homa-β功能指数(HBCI)。提取胰腺总RNA,半定量RT-PCR测定胰岛素mRNA表达水平。结果:雌性大鼠高剂量组空腹血糖升高、空腹血清胰岛素下降,中、高剂量组HBCI及胰岛素基因表达均降低;雄性大鼠OGTT高剂量组0和1.5h血糖升高,空腹血糖高剂量组升高,低、中剂量组空腹血胰岛素升高,随着剂量增加,HBCI及胰岛素基因表达先升高后降低。结论:长期高剂量酒精摄入可导致胰岛素mRNA基因表达改变,胰岛β细胞功能受损。     

酒精对大鼠胰岛素敏感性和骨骼肌胰岛素受体底物mRNA表达的影响

目的　从基因表达水平探讨摄入不同剂量酒精影响胰岛素敏感性的分子机制。方法清洁级Wistar大鼠 80只 ,雌雄各半 ,随机分为对照组和低、中、高剂量组 ,摄入酒精剂量分别为每日 0、0 6、1 8和 3 0ml/kg。给予酒精 13周后 ,测定空腹血糖和血胰岛素 ,计算HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA IR)。提取骨骼肌组织总RNA ,通过逆转录 聚合酶链反应测定胰岛素受体底物 1(IRS 1)mRNA表达水平。结果　雌性大鼠 3 0ml/kg组空腹血糖为 (8 36± 0 5 7)mmol/L ,空腹血胰岛素为(15 2 5±3 32 )mIU/L ,0 6ml/kg组HOMA IR为 1 775 3± 0 1381,IRS 1mRNA表达水平为 0 76 6 1± 0 0 76 9;0 8ml/kgHOMA IR为 2 2 0 2 2± 0 2 710 ,IRS 1mRNA表达水平为 0 5 0 18± 0 0 4 92 ;3 0ml/kg组HOMA IR(1 85 0 1± 0 16 2 8)与对照组 (1 982 6± 0 12 4 6 )相比 ,差异无统计学意义 ,IRS 1mRNA表达水平为0 4 181± 0 0 4 91。雄性大鼠 3 0ml/kg组空腹血糖为 (8 12± 0 72 )mmol/L ,空腹血胰岛素为 (18 6 5±4 2 4 )mIU/L ,仅 0 8ml/kg组HOMA I为 (1 8785± 0 2 5 0 2 ) ,IRS 1mRNA表达水平为 0 82 4 9± 0 0 6 4 7。结论　适量酒精摄入可以增强胰岛素敏感性 ,从而降低 2型糖尿病的发病危险。而长期过量酒精摄入可以降低     

酒精对NIT-1细胞葡萄糖激酶基因表达的影响

目的观察酒精对NIT-1细胞葡萄糖刺激后胰岛素分泌功能及葡萄糖激酶(Glucokinase)基因表达的影响。方法体外培养NIT-1细胞,使用不同浓度的酒精(0,50,100,200,400mmol／L)作用不同时间后(6,12．24h),用放射免疫法测定NIT-1细胞分泌胰岛素的量,用噻唑蓝(MTT)法检测NIT-1细胞代谢活性,用RT—PCR方法检测葡萄糖激酶基因mRNA的表达。结果酒精对NIT-1细胞代谢活性的抑制与酒精剂量和作用时间有关。酒精作用6h,NIT-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加;作用12,24h,葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低。酒精作用6h．各剂量组葡萄糖激酶mRNA表达升高;酒精作用12,24h,各剂量组葡萄糖激酶mRNA表达均降低。结论酒精对NIT-1细胞葡萄糖刺激后胰岛素分泌及葡萄糖激酶mRNA表达的影响与作用时间、剂量有关。而葡萄糖激酶mRNA表达水平的改变可能是酒精影响NIT-1细胞胰岛素分泌的重要机制之一。     

铅对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶影响

目的观察慢性铅暴露对小鼠大脑皮层神经元磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)表达的影响。方法昆明系小鼠出生第1 d通过饮水饲以不同浓度醋酸铅(1.2,2.4,4.8,7.2,9.6 mmol/L)制备染铅模型,对照组饲以等量自来水;6周后用石墨炉原子吸收光谱法测血铅脑铅浓度;用蛋白印迹(Western blot)法观察各组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks的表达状况。结果慢性染铅组小鼠大脑皮层神经元PI3Ks表达水平呈下降趋势,各染铅组PI3Ks表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(P<0.05);PI3Ks表达与血铅浓度呈负相关(r=-0.82,P<0.01)。结论慢性染铅可使大脑皮层神经元细胞PI3Ks表达水平下降;这可能是铅导致学习记忆功能损伤的原因之一。     

CD151对脐静脉内皮细胞PI3K表达及细胞增殖的影响

目的研究CD151对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及PI3K表达的影响,以进一步研究其生物学作用及其在血管生成中的作用机制。方法通过构建p-AAV-CD151质粒并转染HUVEC,采用MTT法测定HUVEC增殖的变化,W estern B lot检测CD151及PI3K表达。结果p-AAV-CD151转染组CD151表达明显增加,p-AAV-CD151转染组与正常对照组、p-AAV-GFP转染组比较表达差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测正常对照组、p-AAV-GFP转染组、p-AAV-CD151转染组的OD值分别为0.1663±0.0095、0.169±0.0085、0.2457±0.0044,p-AAV-CD151转染组较p-AAV-GFP转染组和正常对照组细胞增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。p-AAV-CD151转染组PI3K表达明显增加,p-AAV-CD151转染组与正常对照组、p-AAV-GFP转染组比较表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD151具有促进内皮细胞增殖的作用,CD151可能通过上调PI3K表达,促进内皮细胞增殖达到促进血管新生的作用。     

Lifelong ethanol consumption and brain regional GABAA receptor subunit mRNA expression in alcohol-preferring rats

Brain regional γ-aminobutyric acid type A (GABA_A) receptor subunit mRNA expression was studied in ethanol-preferring AA (Alko, Alcohol) rats after moderate ethanol drinking for up to 2 years of age. In situ hybridization with oligonucleotide probes specific for 13 different subunits was used with coronal cryostat sections of the brains. Selective alterations were observed by ethanol exposure and/or aging in signals for several subunits. Most interestingly, the putative highly ethanol-sensitive 4 and β3 subunit mRNAs were significantly decreased in several brain regions. The age-related alterations in 4 subunit expression were parallel to those caused by lifelong ethanol drinking, whereas aging had no significant effect on β3 subunit expression. The results suggest that prolonged ethanol consumption leading to blood concentrations of about 10 mM may downregulate the mRNA expression of selected GABA_A receptor subunits and that aging might have partly similar effects.     

多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者的子宫内膜胰岛素受体底物1的表达

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)患者其子宫内膜胰岛素受体底物(insulin receptor substrate IRS)1表达。方法:所有研究对象于月经周期第1天刮取子宫内膜,其中P-COS患者51例,合并胰岛素抵抗者28例,非胰岛素抵抗者23例,对照组非PCOS妇女19例,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜IRS-1的表达。结果:PCOS IR组、PCOS非IR组和对照组IRS-1表达的灰度值分别为(131.94±18.39)、(78.16±6.87)和(74.76±4.78),PCOS IR组与PCOS非IR组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),PCOS非IR组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PCOS合并IR患者子宫内膜组织的IRS-1表达降低,可能是子宫内膜发生胰岛素抵抗机制之一。     

补镁对2型糖尿病大鼠胰岛素受体表达水平的影响

目的观察补镁对2型糖尿病大鼠胰岛素受体(insulin receptor,IR)表达水平的影响。方法将高脂饲料喂养加链脲佐菌素注射方法诱发的2型糖尿病大鼠随机分为4个组,高、中、低剂量组在高脂饲料中分别加入氧化镁2000、1000、200mg/kg(以镁离子计),糖尿病对照组只喂饲高脂饲料,正常对照组喂饲普通饲料。动物自由进食,连续4周,用葡萄糖氧化酶法测定空腹尾尖血的血糖含量,腹主动脉取血用放免法测定血清胰岛素含量,用免疫组化法测定胰腺和骨骼肌组织IR表达水平。结果经Image-Pro Plus图像分析,高剂量组的胰腺和骨骼肌组织中IR表达水平分别为0.341±0.001和0.346±0.002,均较糖尿病对照组升高,而血糖水平则较糖尿病对照组降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论镁补充可以提高2型糖尿病大鼠胰腺和骨骼肌组织中IR的表达水平,降低空腹血糖水平。