全长人雌激素受体cDNA的克隆及酵母表达载体的构建

目的 建立环境雌激素基因重组酵母测评系统,将全长人雌激素受体cDNA在酵母中克隆并表达。方法 用EcoRI和SacI从pSG5/HEG0质粒上切下hER cDNA,定向插入pUC18克隆载体中,构建成重组质粒pUC－hER;再用EcoRI和BamHI切下hER cDNA,将其连接到pGAD424酵母表达载体上。结果 构建成功重组酵母表达载体pGAD-hER ,序列分析表明插入处接头和读框完全正确。结论 本文构建成功全长人雌激素受体cDNA的酵母表达载体pGAD-hER,为进一步建立环境雌激素基因重组酵母测评系统奠定了基础。     

重组酵母细胞快速筛选环境雌激素系统的建立

目的建立环境雌激素的体外快速筛选方法.方法通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)插入Lac Z(β-半乳糖苷酶)报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下.观察了不同浓度的β-雌二醇(1×10-8、1×10-6、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10、100nmol/L)作用4和8 h对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,以及3种重组酵母细胞细胞壁破碎法--冰冻法、超声波破碎法、氯仿化学裂解法对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,观察了不同浓度的苯甲酸雌二醇(200、1 000、5 000、25 000、125 000 nmol/L)、β-雌二醇(0.000 1、0.001、0.01、0.1、10、100、1000nmol/L)和双酚A(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10nmol/L)对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响.结果经PCR鉴定,雌激素调控的Lac Z基因重组酵母细胞构建成功.重组酵母细胞暴露于β-雌二醇4和8 h,时间-剂量-效应关系无明显变化;超声波破碎法对酵母细胞破碎效果最好,呈"S"型剂量-效应曲线;用超声波破碎法对3种受试物试验发现,β-雌二醇活力最强,双酚A次之,苯甲酸雌二醇活力最低.结论经雌激素受体介导的环境雌激素酵母评价系统成功建立且比较稳定.     

老年性阴道炎家庭治疗方法

老年性阴道炎是绝经后的老年妇女常见病、多发病,因卵巢功能衰退,雌激素水平降低,阴道壁萎缩,上皮细胞内糖原含量减少,阴道内的PH值上升,局部抵抗力低,致病菌容易入侵繁殖引起炎症性反应;外阴瘙痒或灼热感、阴道壁呈老年性改变、阴道粒膜充血,小出血点或溃疡,致使病人感到极大痛苦。 乙烯雌酚合剂能够提高阴道局部雌激素水平,使上皮细胞内糖原含量增高,最终使阴道内PH值达到正常水平,达到抗炎,灭菌治疗的效应。现将家庭使用乙烯雌酚的方法简介如下:     

卵黄油延缓衰老作用的动物实验研究

目的　探讨卵黄油的延缓衰老功能。　方法　经口给予小鼠 0 .2 5、0 .5 0、1.5 0 g/ kg· bw剂量的卵黄油 3 0 d后 ,测定血清 MDA含量和 SOD活力 ;记录在含 0 .0 7%、0 .13 %和 0 .2 6%浓度受试物的玉米粉培养基上生长的果蝇生存时间 ,计算平均寿命和平均最高寿命。　结果　与对照组比较 ,受试物高剂量组小鼠血清 MDA含量显著降低 ,SOD活力显著增强 ;雌、雄果蝇的平均寿命和平均最高寿命均显著延长。　结论　卵黄油对动物具有延缓衰老作用     

自来水及水源水有机提取物类雌激素活性研究

为了检测自来水及水源水有机提取物的类雌激素活性 ,应用环境雌激素基因重组酵母、细胞增殖和子宫增重等三项短期生物学实验进行测定。结果发现 :水样有机提取物在相当于原水量 50ml时两项体外实验均检出雌激素活性 ,原水量 2 50ml时细胞增殖效应达到最大 ,以后随原水量增大细胞增殖效应逐步减弱。原水量 12 50ml时酵母菌β -半乳糖苷酶活性最强 ,以后随原水量增大 β -半乳糖苷酶活性逐步减弱。水厂水源水有机提取物低、中剂量组受试小鼠子宫湿重增加 ,与对照组比较有统计学意义 ,高剂量组湿重减少。提示水源水有机提取物具有类雌激素活性。采用这三项实验组成的生物学检测程序具有一定的灵敏度 ,且较快速、方便。     

大豆异黄酮和玉米赤霉烯酮对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的 通过观察大豆异黄酮(genistein,GS)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞(PEO4)增殖的影响探讨其雌激素效应。方法 雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4在达克尔培养基(DMEM,含小牛血清10％)中采用开放式单层贴壁培养,于加受试物5d前将细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红高糖DMEM(含活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清5％)中培养,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照和2种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝法、^3H—TdR掺人法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析。结果 与溶剂对照组相比较,96μmol/L对PEO4处理24h,可明显抑制PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期阻滞在G2／M;随着培养时间延长至48h,32μmol/L GS也能明显抑制PEO4细胞增殖,在浓度低于8μmol/L时,GS有促进细胞增殖的趋势。ZEA对PEO4增殖的影响与雌二醇类似,96nmol/L ZEA对细胞处理24h可明显促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期由G0／Gl向S期推进,提高细胞分裂增殖指数。结论 ZEA具有较强的雌激素效应,在较低的浓度条件下(8nmol/L,92h)即可促进雌激素受体阳性细胞PEO4的增殖作用;GS对PEO4细胞的影响作用比较复杂,较低浓度的GS(＜10nmol／L)促进细胞的增殖作用,而在高浓度的处理条件下则抑制细胞的增殖作用。这些资料提示高剂量的GS有抗卵巢癌的作用,而ZEA具有雌激素样效应。     

一些化工原料的雌激素样效应

采用雌激素受体阳性乳腺癌细胞株T47D在DMEM培养基 (含 1 0 %小牛血清 )中开放式单层贴壁培养的方法 ,探讨几种常见化工原料壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)、邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)的雌激素效应。于开始实验前将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含 5 %CDT -FBS)中培养持续 5d ,其目的是耗尽内源性雌激素 ,实验设溶剂对照、雌激素阳性对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对T47D细胞增殖情况进行分析。结果显示NP、BisA和DBP对T47D细胞增殖的影响同雌激素类似 ,可促进T47D细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 G1 期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ,随着培养时间 ,延长至 96h ,0 8μmol LNP、32 μmol LBisA和 32 0 μmol LDBP均对T47D细胞有明显促进增殖效果。结果提示这几种化合物具有雌激素效应 ,且其作用效果存在时间 -效应和剂量 -效应关系。由于T47D细胞增殖为雌激素依赖性 ,由此可推测它们有可能通过雌激素受体而发挥其作用的     

废旧电器拆解地区水环境毒理学评价

目的 检测废旧电器拆解地野生鲫鱼肝脏酶学改变及水环境遗传毒性和雌激素活性.方法 以废旧电器拆解地LQ地区作为污染区,周围无电子拆解业的LY地区作为对照区,对两地区野生鲫鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、细胞色素P4501 A1活性及丙二醛(MDA)含量进行测定;同时,采用鼠伤寒沙门氏菌突变试验(Ames试验)和重组基因酵母试验,对两地区水样浓集物进行检测.结果 对照区和污染区鲫鱼肝脏P4501 A1酶活性分别为(2.75±1.18)和(9.76±3.03) nmol/g· min,污染区P4501 A1酶活性比对照区明显升高;污染区SOD活性[(23.34±4.12 )U/mg pro]明显低于对照区[(32.23±6.87) U/mg pro],GSH-Px活性和MDA含量在2个地区之间差异无统计学意义;污染区水样浓集物Ames试验结果阳性.重组基因酵母试验两地区水样浓集物各浓度均未显示出明显的雌激素活性.结论 废旧电器拆解地野生鲫鱼肝脏已发生酶学改变,水样浓集物呈现诱变性,未显示明显雌激素活性.     

同位素稀释-固相萃取-超快速液相色谱/串联质谱联用法测定鳝鱼中9种雌激素

目的建立一种快速、灵敏的鳝鱼中己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、己烷雌酚、17α-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇、17α-炔雌醇和戊酸雌二醇等9种雌激素残留的固相萃取超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)检测方法。方法鳝鱼样品经乙腈提取后,用Waters OasisHLB小柱进行净化,在Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱(100mm×2.0mm,2.2μm)上,以含0.04%(V/V)氨水的甲醇水溶液为流动相进行梯度洗脱分离,采用电喷雾(ESI)负离子多反应监测(MRM)模式进行质谱分析,采用同位素稀释法定量。结果各待测物在0.5～50.0μg/L范围内具有良好的线性,相关系数>0.998,在鳝鱼中的回收率为81.0%～110.0%,相对标准偏差(RSDs)在1.92%～8.24%之间,最低定量检出限(信噪比大于10)在0.07～0.4μg/kg范围。同时研究了这9种雌激素的二级质谱特征,阐释了其二级质谱裂解途径。结论建立的方法简便、快速、干扰少、特异性强,能准确测定包括差向异构体17α-雌二醇和17β-雌二醇在内的9种目标物,适用于鳝鱼中痕量雌激素残留的监测,也可用于其它鱼类中痕量雌激素残留的确证检测。     

柴油机废气颗粒物诱导哺乳动物细胞DNA损伤实验研究

以国产柴油机排气口废气采集物为受试物,用噻唑蓝(MTT)染色的方法检验受试物各浓度作用12 h、24 h、36 h的细胞相对存活率;单细胞凝胶电泳技术检测作用2 h、4 h、8 h受试物致细胞的DNA损伤。随着染毒时间的延长和染毒剂量的增加,细胞存活率下降;柴油机废气颗粒物引起细胞的拖尾率、尾矩和细胞尾部DNA含量增加。柴油机废气颗粒物的各浓度组在不同时间诱导的细胞拖尾率和尾部DNA含量均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。提示柴油机废气颗粒物可以降低细胞的相对存活率,并不同程度地致NIH/3T3细胞的DNA损伤。