姜黄素对神经病理性疼痛大鼠脊髓11β羟基固醇脱氢酶1表达的影响

目的 探讨皮质醇和11β羟基固醇脱氢酶1(11βHSD1)在神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏中的作用,并揭示姜黄素缓解大鼠神经病理性疼痛的作用机制.方法 雄性SD大鼠随机分成4组:假手术(Sham)组、坐骨神经慢性压榨损伤模型(CCI)组、CCI+溶剂(SC)组、CCI+姜黄素100 mg/kg(Cur100)组.于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14 d测定鼠爪热痛阈(PTWL)和机械痛阈(PMWT),术后3、7和14 d取血,同时取大鼠术侧L4、L5脊髓背角和背根节,用ELISA法测血清皮质醇浓度,用免疫组化法和Western印迹法分析脊髓背角和背根节11βHSD1表达的动态变化.结果 与Sham组相比,CCI组大鼠术后1~14 d PTWL和PMWT明显降低(P<0.05),血清皮质醇浓度明显升高(P<0.05),术侧脊髓背角和背根节内11βHSD1阳性神经元的表达显著增多(P<0.05).Cur100大鼠PMWT和PTWL显著提高(P<0.05),同时组大鼠血清皮质醇浓度显著降低(P<0.05),脊髓背角和背根节11βHSD1阳性神经元细胞的表达也明显降低(P<0.05).结论 神经病理性疼痛所致应激引起血清皮质醇浓度升高、脊髓背角和背根节11βHSD1阳性神经元细胞表达增加,姜黄素能减轻CCI大鼠机械性痛觉过敏和热痛觉过敏,降低血清皮质醇浓度及脊髓背角和背根节11βHSD1阳性神经元细胞表达.皮质醇及脊髓背角和背根节的11βHSD1阳性神经元细胞可能与神经病理性疼痛的发病和维持有关.     

脊髓糖皮质激素受体在神经病理性疼痛中的作用

目的观察脊髓背角糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)在慢性病理性神经痛中的作用。方法成年SD大鼠分为假手术组、坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)组、CCI+生理盐水组、CCI+RU38486治疗组。测定各组大鼠不同时间点热缩足反射潜伏期(TWL);CCI组于术后7、14 d处死大鼠,取L4～L6脊髓冰冻切片,应用免疫组织化学方法观察GR表达变化;大鼠蛛网膜下腔埋管,于CCI术后1～14 d鞘内注射生理盐水、GR拮抗剂RU38486,测定其对TWL的影响。结果 CCI大鼠术后1 d损伤侧下肢TWL即显著降低,到第14天热疼敏仍持续存在;术后7、14 d损伤侧L4～L6节段脊髓背角GR表达显著增加(P<0.05);术后1～14 d鞘内给予GR拮抗剂RU38486可明显减轻CCI所致的热疼敏。结论脊髓背角糖皮质激素受体的激活可促进坐骨神经慢性压迫损伤所致的神经痛的发生和维持。     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角Sirt1与miR-34b表达的变化

目的研究Sirt1与miR-34b在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角中表达变化的临床意义。方法将14只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）和坐骨神经慢性压迫性损伤组（CCI组）,每组7只。于模型建立前1d及术后第7、14天,测定大鼠机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。术后第14天取大鼠L4~5节段脊髓进行病理学检查,HE染色后观察脊髓背角运动神经元的数量变化。real-timePCR检测脊髓背角内Sirt1与miR-34b的表达,Westernblot测定大鼠脊髓背角内Sirt1、脑源性神经营养因子（BDNF）和环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的表达。结果经MWT和TWL验证,大鼠CCI神经病理性疼痛模型建立成功。HE染色显示,与Sham组比较,CCI组大鼠在手术后7、14d脊髓背角神经元数量显著减少（均P＜0.05）。real-timePCR结果显示,与Sham组相比,CCI组Sirt1表达降低,miR-34b表达升高（均P＜0.05）。Westernblot显示Sirt1与CREB表达降低,pCREB与BDNF表达增加。结论Sirt1与miR-34b的表达变化可能参与坐骨神经慢性压迫性损伤导致的神经病理性疼痛的形成和维持。     

鞘内注射γ-氨基丁酸转运体-1抑制剂NO-711对神经病理痛大鼠脊髓星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的观察脊髓水平GABA转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(CCI)大鼠机械和热痛阈及星形胶质细胞GFAP表达的影响,探讨NO-711抗伤害性的可能机制。方法雄性SD大鼠72只,随机分为4组(n=18):即Sham+NS组;Sham+NO组;CCI+NS组;CCI+NO组。各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,在术前测定基础MWT和TWL及GFAP的表达。CCI手术后5 d,鞘内注射100μg的NO-711,测定给药前、给药后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h大鼠MWT和TWL及GFAP的表达。结果Sham组从术后1 d开始直到本实验观察的术后21 d,MWT和TWL均无明显降低;CCI加生理盐水组大鼠在各个时间点上与给药前相比,MWT和TWL及GFAP的表达无明显改变(P>0.05);CCI加NO-711组大鼠在给药后MWT和TWL明显增加及GFAP的表达明显降低,在给药后1 h时作用最明显,与给药前和盐水组相比P<0.01,并一直持续到给药后4 h,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平。结论鞘内注射NO-711通过抑制星形胶质细胞GFAP表达,可明显减轻慢性坐骨神经松结扎大鼠机械痛敏和热痛敏。     

GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在慢性收缩性损伤（CCI）所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1：24只SD大鼠,随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=8）。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bennett法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天（基础值）及术后第1、3、5、7、14、21天（Naive组则在相对应的时间点）大鼠同侧（本实验为右侧）后足机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（PWL）。实验2：18只SD大鼠随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=6）。CCI组制备CCI模型,术后第7天处死大鼠,取同侧L4背根神经节;Naive组不做任何手术,直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经,术后第7天处死大鼠,直接取右侧L4背根神经节。采用Western blot法检测脊髓L4背根神经节GDNF的蛋白表达。结果实验1：与Sham组相比,CCI组大鼠从术后第3天开始至术后21天内各时间点MWT和PWL均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。实验2：与Sham组相比,CCI组在L4背根神经节的GDNF表达明显减少（P〈0.01）。结论CCI大鼠的L4背根神经节的GDNF表达减少,可能参与CCI所致神经病理性疼痛的发病机制。     

鞘内移植神经干细胞对慢性缩窄性损伤模型大鼠脊髓背角和背根神经节胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

目的神经病理性疼痛在临床中很常见,但治疗效果欠佳。文中应用鞘内移植神经干细胞(neural stem cells,NSC)治疗坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠,并观察脊髓背角和背根神经节(dorsal root gan-glion,DRG)胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的变化。方法成年SD大鼠72只,随机均分为A组(假手术+细胞培养液)、B组(CCI+细胞培养液)和C组(CCI+NSC),然后各组再随机分为:A1、B1和C1组(CCI后3 d鞘内移植组)和A2、B2和C2组(CCI后10 d鞘内移植组),每组12只。分别于术前1 d和术后1、3、7、14、21 d测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency,TWL)。术后7 d、14 d和21 d采用免疫组织化学染色和Real-time PCR技术观察DRG、脊髓背角中GDNF的表达变化。结果①与A组相比,B1、B2、C1、C2组术前1 d、术后1 d和21d MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05);术后3d MWT和TWL逐渐降低,至术后7d降低至最低点,在此期间各时间点痛阈与A1组比较,B1、B2、C1、C2组数值均有显著降低(P<0.01),之后缓慢升高,于术后21 d恢复至术前水平;与B组比较,C组术后7d、14dMWT和TWL明显上升(P<0.01)。②与B组比较,A组术后7d、14d和21d各组大鼠GDNF的表达呈低水平(P<0.05);术后7 d,C1组GDNF的表达量较B1组明显升高(P<0.05);术后14 d和21 d,C1、C2组GDNF的表达量高于B1、B2组(P<0.05)。结论鞘内移植NSC可通过提高脊髓背角和DRG中的GDNF表达量,从而对CCI模型引起的神经病理性疼痛起预防和治疗作用。     

小剂量氯胺酮抑制慢性神经痛大鼠脊髓背角P2X4受体表达

目的:观察小剂量氯胺酮腹腔注射对慢性坐骨神经收缩损伤（CCI）大鼠的镇痛效应及其对大鼠脊髓背角P2X4受体表达的影响,探讨其可能的镇痛机制。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组、CCI组及氯胺酮治疗组（n=8）。CCI组及氯胺酮治疗组大鼠均制备慢性坐骨神经痛CCI模型；术后3 d测定热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)确定痛觉过敏形成后,氯胺酮治疗组大鼠腹腔注射小剂量氯胺酮（10 mg·kg-1）,CCI组腹腔注射等量的生理盐水,给药至术后7 d。假手术组大鼠单纯坐骨神经暴露,不用肠线结扎,也不给药治疗。分别于术前1 d、术后1、3、7 d用热辐射法测定TWL；术后7 d用免疫组织化学法检测大鼠腰段脊髓P2X4受体的表达。结果:术前1 d,3组大鼠TWL无统计学差异；假手术组术后术侧TWL轻度下降,但与术前相比无统计学差异。与术前、CCI组及假手术组相比,氯胺酮治疗组术后3 d始TWL呈进行性下降,以术后7 d为甚(P<0.05)；术后7 d氯胺酮治疗组TWL较CCI组显著升高(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。与假手术组相比,CCI组及氯胺酮治疗组大鼠术侧脊髓背角P2X4受体表达显著增加(P<0.01)；氯胺酮治疗组P2X4受体表达明显少于CCI组(P<0.05)。结论:小剂量氯胺酮腹腔注射可部分缓解慢性神经痛大鼠的痛觉过敏症状,可能部分与其直接或者间接抑制脊髓背角P2X4受体表达有关。     

Expression of Rat Spnial Astrocyte GFAP with Neurotic Pathological Pain through GABA Transporter-1 Inhibitor NO711 with Intrathecal Injection

目的 观察脊髓水平GABA 转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(CCI)大鼠机械和热痛阈及星形胶质细胞GFAP表达的影响,探讨NO-711抗伤害性的可能机制.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为4组(n=18):即Sham+NS组;Sham+NO组;CCI+NS组;CCI+NO组.各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,在术前测定基础MWT和TWL及GFAP的表达.CCI手术后5 d,鞘内注射100 μg的NO-711,测定给药前、给药后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h大鼠MWT和TWL及GFAP的表达.结果 Sham组从术后1 d开始直到本实验观察的术后21 d,MWT和TWL均无明显降低;CCI加生理盐水组大鼠在各个时间点上与给药前相比,MWT和TWL及GFAP的表达无明显改变(P＞0.05);CCI加NO-711组大鼠在给药后MWT和TWL明显增加及GFAP的表达明显降低,在给药后1 h时作用最明显,与给药前和盐水组相比P＜0.01,并一直持续到给药后4 h,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平.结论 鞘内注射NO-711通过抑制星形胶质细胞GFAP表达,可明显减轻慢性坐骨神经松结扎大鼠机械痛敏和热痛敏.     

姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角c-fos表达的影响

[目的]观察姜黄素对神经病理性痛大鼠痛行为及脊髓背角原癌基因c-fos表达的影响。[方法]采用大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型。雄性SD大鼠108只,随机分为实验对照组、假手术组、溶剂对照组、姜黄素组。采用vonFrey纤维丝和热痛刺激仪测定大鼠热痛缩爪潜伏期(TWL)和机械性缩爪潜伏期(MWT),在术后3、7、14天处死(n=6),用免疫组织化学方法测定c-fos蛋白在脊髓背角神经元的动态变化。[结果]CCI大鼠术侧脊髓背角浅层内Fos阳性神经元明显增多,姜黄素可减轻神经病理痛大鼠的痛行为,也能够明显减少脊髓背角神经元中Fos表达。[结论]姜黄素能减轻神经病理性痛,其机制可能与降低Fos蛋白的合成有关。     

腹腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎大鼠痛觉敏化和脊髓Sirt1表达∕活性的影响

目的 观察腹腔注射SRT1720对慢性坐骨神经结扎大鼠痛觉敏化和脊髓Sirt1表达/活性的影响。 方法 将96只SD大鼠随机分为6组:空白对照组(N组)、假手术组(Sham组)、坐骨神经慢性压迫损伤组(CCI组)、CCI+生理盐水注射组(CCI+NS组)、CCI+低剂量SRT1720(SRT1720 20 mg/kg腹腔注射)、CCI+高剂量组(SRT1720 50 mg/kg腹腔注射)。CCI模型建立后,分别通过微量注射器进行腹腔内注射2.5 ml/kg NS、20 mg/kg SRT1720、50 mg/g SRT1720,连续7 d。各组分别在术前和术后第1、3、5、7、10、14天用von Frey细丝测定大鼠的机械性缩足反射阈值(MWT)和热辐射法测定大鼠的热缩足潜伏期(TWL),手术结束后提取大鼠脊髓测定Sirt1蛋白表达和去乙酰化酶活性。 结果 SRT720能抑制大鼠机械性缩足反射阈值和热缩足潜伏期,浓度越高,抑制越明显(P＜0.05);SRT720能增加脊髓背角Sirt1蛋白表达,浓度越高,增加越明显(P＜0.05);SRT720能增加脊髓背角Sirt1去乙酰化酶活性,浓度越高,增加越明显(P＜0.05)。 结论 腹腔注射SRT1720能抑制CCI大鼠的机械痛敏和热痛敏,其作用可能和增加脊髓Sirt1表达/活性有关。      

坐骨神经脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤模型大鼠脊髓背角胶质细胞活化水平的影响及其镇痛作用

目的：观察坐骨神经结扎处脉冲射频（PRF）对慢性坐骨神经压迫损伤（CCI）模型大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的影响,探讨坐骨神经PRF镇痛机制与脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的关系。方法：雄性SPF级SD大鼠40只随机分为CCI假造模PRF假治疗组（SS组）、CCI假造模PRF治疗组（SP组）、CCI造模PRF假治疗组（CS组）和CCI造模PRF治疗组（CP组）,每组10只。CCI造模成功后4 d行PRF治疗,在坐骨神经结扎处行标准PRF （120s、42℃）。于CCI造模前1d （D₀）及造模后1、3、5和7 d （D₁、D₃、D₅和D₇）测定大鼠患侧机械缩足反射阈（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。疼痛行为学测试完成后（D₇）取患侧L3~5脊髓背角,Western blotting法检测脊髓背角小胶质细胞特异性蛋白（Iba-1）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的蛋白表达水平。结果：与SS组比较,CCI造模后不同时间点CS组大鼠患侧出现足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学表现,MWT和TWL均明显下降（P<0.01）,脊髓背角Iba-1和GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CS组比较,CP组大鼠（D₅和D₇） PRF后足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学变化明显缓解,MWT和TWL值明显升高（P<0.01）,脊髓背角Iba-1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,GFAP蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：坐骨神经PRF能有效缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛（NP）,坐骨神经PRF可抑制脊髓背角小胶质细胞活化水平,其镇痛机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞活化有关。     

缪刺电针足三里穴、阳陵泉穴对CCI大鼠背根神经节P2X3受体表达的影响

目的观察缪刺电针和患侧电针足三里穴、阳陵泉穴对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型大鼠痛阈和背根神经节P2X3受体表达的影响。方法通过机械刺激法和热辐射法测定大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),采用Western blotting法观察大鼠造模侧L4-L6DRG上P2X3受体蛋白的表达。结果①与假模组比较,CCI术后各组大鼠在各时间点MWT和TWL明显降低(P均<0.001);电针7天后,与模型对照组相比,缪刺电针组和患侧电针组MWT和TWL升高(P均<0.05);缪刺电针组和患侧电针组MWT和TWL差异无统计学意义(P均>0.05);②CCI术后第14天,与假模组相比,各组大鼠P2X3受体蛋白表达上调(P均<0.05),与模型对照组相比,电针能够明显减少P2X3受体蛋白的表达(P均<0.001),缪刺电针组与患侧电针组相比,差异没有显著性(P>0.05)。结论缪刺电针和患侧电针足三里穴、阳陵泉穴,均可下调CCI大鼠DRG神经元中P2X3受体蛋白的表达,减轻CCI大鼠机械性痛觉过敏和热痛觉过敏。     

Effect of Pulsed Radiofrequency on Rat Sciatic Nerve Chronic Constriction Injury: A Preliminary Study

Background:

Pulsed radiofrequency (PRF) application to the dorsal root ganglia can reduce neuropathic pain (NP) in animal models, but the effect of PRF on damaged peripheral nerves has not been examined. We investigated the effect of PRF to the rat sciatic nerve (SN) on pain-related behavior and SN ultrastructure following chronic constriction injury (CCI).

Methods:

The analgesic effect was measured by hindpaw mechanical withdrawal threshold (MWT) and thermal withdrawal latency (TWL). Twenty rats with NP induced by ligating the common SN were then randomly divided into a PRF treatment group and a sham group. The contralateral SN served as a control. The MWT and TWL were determined again 2, 4, 6, 8, 10, 12, and 14 days after the PRF or sham treatment. On day 14, ipsilateral and contralateral common SNs were excised and examined by electron microscopy.

Results:

Ipsilateral MWT was significantly reduced and TWL significantly shorter compared to the contralateral side 14 days after CCI (both P = 0.000). In the PRF group, MWT was significantly higher and TWL significantly longer 14 days after the PRF treatment compared to before PRF treatment (both P = 0.000), while no such difference was observed in the sham group (P > 0.05). Electron microscopy revealed extensive demyelination and collagen fiber formation in the ipsilateral SN of sham-treated rats but sparse demyelination and some nerve fiber regrowth in the PRF treatment group.

Conclusions:

Hyperalgesia is relieved, and ultrastructural damage ameliorated after direct PRF treatment to the SN in the CCI rat model of NP.     

5-HT3受体在慢性神经病理性疼痛模型脊髓组织中的表达

目的观察慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓组织中5-HT,受体的表达变化。方法采用大鼠坐骨神经结扎（慢性压迫性损伤）制备慢性神经病理性疼痛模型。坐骨神经结扎造模后7天,采用测定热缩足反射潜伏期（TWL）和机械缩足反射阀值（MWT）2种行为学方法检测大鼠痛觉闽值变化,免疫组织化学染色法检测大鼠脊髓背角5-HT,受体表达,Westernblot方法检测大鼠脊髓背角中5-HT,受体蛋白水平。结果造模7天后：模型组大鼠的TWL和MWT均低于正常组和假手术组（P〈0．05）,模型组大鼠脊髓背角组织中5-HT,受体表达明显高于正常组和假手术组（P〈0．05）、5-HT,受体蛋白水平高于正常组和假手术组（P〈0．05）。结论在慢性神经病理性疼痛中,脊髓背角组织中5-HT,受体表达增加;脊髓背角组织中5-HT,受体可能参与了慢性神经病理性疼痛的痛觉信息传导过程。     

JNK信号转导通路在丹参酮ⅡA抗大鼠神经病理性疼痛中的作用

目的:观察氨基末端蛋白激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)通路在丹参酮ⅡA抗坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型大鼠中的作用。方法:30只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=10)和模型组(n=20)。模型组又分为生理盐水组和处理组(n=10)。模型组在手术当日及术后每日在大鼠鞘内注射生理盐水0.1m L和丹参酮ⅡA 20 mg·kg-1,连续注射14 d。检测各组大鼠在手术前及术后14 d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内p-JNK的表达。结果:与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,p-JNK的表达增多,差异均有统计学意义(P0.05);与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内p-JNK的表达下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内p-JNK的表达有关。     

坐骨神经周围注射可乐定对CCI大鼠痛域的影响

目的 观察损伤坐骨神经周围注射可乐定对慢性坐骨神经结扎模型(chronic constriction injury ，CCI)大鼠痛域影响，探讨α2-肾上腺素受体激动剂是否对已经形成的神经病理性疼痛疼痛产生作用。方法 雄性SD大鼠32只，随机分为4组，每组8只。分别为:Sham组：只分离皮肤、肌肉，不结扎坐骨神经; Sal组：形成CCI后注射生理盐水组; Clo组：形成CCI后注射可乐定组; Clo+Yo组：形成CCI后注射可乐定和育亨宾组。采用热辐射法和von Frey细丝法分别测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency ，TWL)和机械刺激缩足反射痛阈值(mechanical withdrawal threshold ，MWT)。结果 CCI大鼠在术后从7 d开始表现出明显的热痛敏和机械痛敏，损伤坐骨神经周围注射可乐定能明显减轻热痛敏和机械痛敏（р<0.01）。结论 外周神经周围注射α2－肾上腺素受体激动剂可以减轻已经形成的神经病理性疼痛痛域，α2－肾上腺素受体可能参与神经病理性疼痛的发展和转归。 【关键词】 可乐定 外周注射 CCI大鼠 神经病理性疼痛 热痛敏 机械痛敏