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1.
CTLA4Ig诱导免疫耐受的体外研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 观察CTLA4Ig在诱导人外周血T细胞免疫耐受中的作用。方法 以结核菌素刺激人外周血淋巴细胞,观察不同剂量CTLA4Ig对外周血淋巴细胞增殖反应的影响;观察CTLA4Ig和CsA(环孢霉素A)对再次结核菌素刺激和非相关第三者APC细胞刺激淋巴细胞增殖反应的影响,IL-2的变化,以及外源性IL-2对免疫耐受诱导的影响。结果 CTLA4Ig抑制淋巴细胞增殖呈剂量依赖关系,20μg/ml时抑制作用最强;CTLA4Ig能诱导免疫耐受并与CsA有协同作用;外源性IL-2能抑制免疫耐受的诱导。结论 CTLA4Ig能抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的分泌释放,CTLA4Ig和CsA联合应用能更彻底抑制淋巴细胞增殖和IL-2的分泌释放,并诱导免疫耐受;外源性IL-2能逆转免疫耐受。 相似文献
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CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究 总被引:3,自引:2,他引:1
目的 探索重组腺病毒载体(Recombinant adenovirus,rAdv)介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体,转染猪树突状细胞(Dendritic Cell,DC),以猪表皮细胞匀浆液为刺激原,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响;同时,以CTLA4Ig转染小鼠DC细胞,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力(P<0.01)和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性,IL-2分泌亦受到明显抑制(P<0.05);转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低(P<0.05)。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染转皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。 相似文献
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CTLA4Ig诱导小鼠心脏移植免疫耐受的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究利用CTLA4Ig阻断B7/CD2 8相结合 ,诱导同种异体小鼠移植心脏免疫耐受。方法 建立同种异体小鼠移植心脏模型 ,研究组腹腔注射CTLA4Ig ,观察小鼠移植的心脏存活天数和病理改变。结果 研究组移植的心脏存活时间为 (81 0± 5 1 2 )d ,对照组为 (7 8± 1 3 )d ,两组差异有显著性 (P <0 0 5 )。组织学改变 :对照组可见大量淋巴细胞、单核细胞浸润 ,组织充血水肿 ,心肌变性、坏死 ,出血 ,病理分级为Ⅳ级。研究组术后 7d病理改变较轻 ,表现为局灶性血管周围和心肌间质炎症细胞浸润、局灶性心肌损伤 ,病理分级为Ⅰ~Ⅱ级。术后 3 0d研究组可见部分心肌变性、水肿、纤维增生 ,炎细胞浸润 ,血管管壁增厚、水肿、炎细胞外渗 ,病理分级为Ⅱ~Ⅲ级。结论 利用CTLA4Ig阻断B7/CD2 8相结合可诱导同种异体小鼠心脏移植免疫耐受。 相似文献
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腺病毒介导CTLA4Ig转染正常人肝细胞株的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的研究腺病毒介导CTLA4Ig基因转染正常人肝细胞株L02后,CTLA4Ig在L02细胞内的表达、生物学活性以及对L02细胞生物学特性的影响。方法重组腺病毒载体Ad-CTLA4Ig-EGFP转染体外培养的正常人肝细胞株L02,观察绿色荧光在细胞内的表达情况。以免疫细胞化学、Western blot、ELISA等方法检测CTLA4Ig在L02细胞内、外的表达情况;通过绘制细胞生长曲线、检测尿素合成能力观察转染前后L02细胞的生物学特性;转染后的L02细胞与大鼠脾脏细胞共培养,通过检测脾脏细胞增殖情况评价表达CTLA4Ig的L02细胞在体外的免疫耐受活性;收集共培养体系中的大鼠脾脏细胞,再分别与正常L02细胞、HeLa细胞共培养,检测脾细胞增殖情况以评价转染后L02细胞免疫耐受的特异性。结果转染后的L02细胞可在细胞质内大量表达CTLA4Ig蛋白,并分泌至培养上清中;转染后L02细胞生长速度无明显改变(P>0.05),单个细胞尿素合成能明显升高[(0.56±0.01)pmol/d,P<0.01];转染后的L02细胞在体外可显著抑制大鼠脾脏细胞的增殖(抑制率约为36.8%,P<0.05),被抑制后的大鼠脾脏细胞在... 相似文献
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腺病毒介导CTLA4Ig基因在体外培养细胞中的表达 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA4Ig在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性。方法 以肾小管上皮细胞(PK-15),血管内皮细胞(ECV-304)为靶细胞,观察感染强度为100,200,400时CTLA4Ig重组腺病毒转梁靶细胞后不同时相细胞存活百分率;以免疫组化以及Westerb blot分别检测CTLA4Ig在细胞以及上清中的表达。结果 转染后2d,4d,转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异;转染后24h,CTLA4Ig在PK-15和ECV-304中的阳性率表达率分别为93.7%和90.2%;Westerb blot检测到两种细胞上清中均有CTLA4Ig表达。结论 重组腺病毒对非包装靶细胞毒性很小,能够介导CTLA4Ig基因对靶细胞的高效转染,并使其表达分泌型CTLA4Ig,具备了以基因治疗诱导免疫耐受的潜能,为介导CTLA4Ig基因转染移植物和抗原提呈细胞提供了一种安全有效的载体。 相似文献
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雷公藤单体T_4对类风湿关节炎患者及正常人外周血单个核细胞增殖的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
观察雷公藤单体T_4对正常人及类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响。将PBMC与不同剂量的T_4(10、20、30和40ng/ml)在PHA刺激或不刺激下共同孵育72h,用MTT比色法测定发现,T_4可显著抑制正常人经PHA刺激或不刺激的PBMC增殖;对经PHA刺激的RA患者的PBMC增殖亦有抑制作用,刺激的RA患者的PBMC增殖具有双向调节作用。提示T_4通过抑制PBMC增殖可能用于RA的治疗。其对RA患者PBMC增殖的双向作用的意义尚需进一步探讨。 相似文献
7.
CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究 总被引:5,自引:3,他引:5
目的 探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法 供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果 CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。 相似文献
8.
目的:通过CTLA4-Ig阻断B7/CD28的结合防止CD+4T激活,探讨其治疗哮喘的可行性。方法:分别用6只BALB/C小鼠作为正常,哮喘,治疗组,于气道激发后24h进行外周血,支气管肺泡灌洗液89BALF)细胞计数及分类,细胞因子测定和病理切片。结果 :哮喘组BALF细胞数增加,炎性细胞比例上升,全身及局部IL-4水平增高,病理示气道民性炎症性改变,治疗组可减轻上述改变,两组比较差别有显著性。结论:CTLA4-Ig可引起抗原特异性免疫耐受,抑制哮喘反应。 相似文献
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目的:探讨CTLA4Ig基因能否在移植小肠局部转染表达。方法:移植前经肠系膜上动脉给供肠灌注脂质体包裹的CTLA4I异cDNA重组质粒,应用免疫组织学及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达。结果:免疫组织学及RT-PCR结果显示在移植后48h移植小肠中有大量CTLA4Ig转基因产物的表达。结论:经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA重组质粒可有效转染移植小肠。 相似文献
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SLE患者外周血单个核细胞凋亡的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡率异常是否与其自身抗体产生高低有关。方法 采用碘化丙锭(PI)染色法,在流式细胞仪下宣检测20例SLE患者及10名正常人PBMC体外凋亡情况,同时观察了SLE患者自身抗体的表达及与凋亡率的关系。结果 SLE患者PBMC体外培养0、24、48、72h后凋亡率较正常人明显增高(P〈0.05),且活动期SLE高于非活动期(P〈0.05)。SLE患者自身 相似文献
11.
CTLA4Ig表达质粒的基因枪转染皮肤及细胞的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 利用基因枪技术提高CTLA4Ig的cDNA的转染效率。方法 设基因枪局部转染组,注射器局部注射组和肌肉注射组,并构建pCTLA4Ig-IRES2-EGFP表达载体,将质粒注射入皮肤,观察三种方法转移CTLA4Ig目的DNA的存留时间。同时,体外培养ECV,293细胞,用基因枪或逆转录病毒载体转染上述质粒,观察质粒的转染及表达情况。结果 基因枪转移基因至细胞,皮肤的效率明显好于其他方法,但对细胞,基因枪的初始压力不能太高,否则,细胞容易死亡。结论 基因枪转染CTLA4Ig质粒效率较高。 相似文献
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目的:用AdEasy腺病毒载体系统构建CTLA4Ig重组腺病毒,以感染树突状细胞使其递呈抗原至T淋巴细胞功能受阻.方法:双酶切、凝胶回收方法从质粒pCDM8-CTLA4Ig提取目的基因CTLA4Ig,构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CTLA4Ig;经酶切线性化后的pAdTrack-CTLA4Ig与AdEasy-1进行同源重组,经酶切线性化转染入HEK293细胞进行包装.结果:卡那霉素抗性筛选和PacⅠ酶切确证重组腺病毒质粒pAd-CTLA4Ig,PacⅠ酶切产生30 kb和4.5 kb 2个片断为同源重组.重组腺病毒质粒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并制备出高滴度重组腺病毒(病毒滴度为1.6×109).结论:成功构建了携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为利用CTLA4Ig基因转染树突状细胞的基因治疗奠定了基础. 相似文献
13.
共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组腺病毒的构建与鉴定 总被引:9,自引:3,他引:6
目的 构建共刺激阻断剂CTLA4Ig基因重组的腺病毒载体。方法 将CTLA4Ig cDNA插入腺病毒表达质粒;将重组质粒与病毒基因组质粒共转染293细胞,产生重组腺病毒;采用dot-ELISA和PCR法筛选并获得CTLA4Ig阳性表达的重组腺病毒。结果 同源重组后,以dot-ELISA法筛选到2个293细胞的CTLA4Ig蛋白阳性表达空斑,PCR证实为含CTLA4Ig基因和腺病毒基因的重组体AdvCTLA4Ig。结论 本研究构建了CTLA4Ig基因重组的复制缺陷型腺病毒AdvCTLA4Ig,为进行器官移植基因治疗研究提供了工具。 相似文献
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The role of CTLA4- Ig in a mouse model against allergic asthma 总被引:2,自引:0,他引:2
Objective To investigate CTLA4- Ig’s potential role in therapy for allergic asthma by blocking B7/CD28 interactions with cytotoxic T lymphocyte antigen 4- Ig (CTLA4- Ig).Methods We divided BALB/C mice into the three groups: Sham/Sham (control), ovalbumin (OVA)/OVA and mCTLA4- Ig. Blood, bronchoalveolar lavage, histology and determination of cytokines were performed 24 hours after airway challenge.Results In the OVA/OVA group, the number of cells, the percentage of inflamed cells and the level of IL- 4 in BALF were increased. Airways in our murine model for allergic asthma underwent pathological changes, which were significantly reduced after treatment with mCTLA4- Ig.Conclusion Blockage of co- stimulation with mCTLA4- Ig can inhibit allergy- specific response of T cells, and asthmatic response as well. 相似文献
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目的在实验室水平制备并鉴定人CTLA4Ig融合蛋白.方法将人CTLA4Ig cDNA片段构入重组腺病毒载体中,用该表达载体感染293细胞并在其中表达人CTLA4Ig,再应用SPA亲合层析柱自细胞培养上清中纯化出该融合蛋白,以WESTERN印迹验证后,观察了所制备CTLA4Ig对混合淋巴细胞反应的影响.结果经亲合层析柱洗下的蛋白为分子量为53.0kd的单一组分,经WESTERN印迹证实为CTLA4Ig,并发现所制备CTLA4Ig能呈剂量依赖性抑制混合淋巴细胞反应.结论本法成功制备了具有生物学活性的重组人CTLA4Ig融合蛋白. 相似文献
16.
目的 研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法 建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果 Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论 Ad CTLA4Ig可延长大鼠异基因原位移植气管的存活时间 相似文献
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目的 :研究CTLA4Ig基因在小肠局部转染表达及其表达产物对小肠移植物存活的作用。方法 :移植前经肠系膜上动脉供给肠灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA ,应用免疫组织学及RT PCR观察移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达。结果 :免疫组织学及RT PCR结果显示在移植后 2 8天内移植小肠中有CTLA4Ig转基因产物的表达 ,18例移植小肠中的 11例在受体内的存活时间超过 90天。结论 :经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA可有效转染移植小肠 ,转染的移植小肠在受体内可长时间存活 相似文献
18.
重组腺病毒介导的CTLA4Ig基因在哺乳动物体内表达的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 了解CTLA4Ig腺病毒在不同哺乳动物体内的转染能力及表达情况。方法 用所构建的CTLA4Ig腺病毒通过静脉或腹腔注射到Balb/c小鼠,Wistar大鼠,兔,小香猪,羊体内,应用蛋白质斑点印记检测CTLA4Ig在以上动物血清中的表达情况,同时还观察各动物脏器的病理改变及动物的生存情况。结果 重组腺病毒转染7d后大鼠,小鼠血清出现CTLA4Ig持续表达2周。各动物未见异常死亡,各脏器未见明显病理改变。结论 CTLA4Ig重组腺病毒能够有效转染Balb/c小鼠,Wistar大鼠。 相似文献