脐血CD34^＋／CD19^—细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ３４）用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的ＣＤ３４＾＋细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５±０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显（Ｐ＜０．０５），每μｌ     

脐血造血祖细胞培养及细胞周期的研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）和红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和成人骨髓及外周血做比较。结果显示，脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于骨髓而超过外周血水平；脐血ＢＦＵ－Ｅ对红细胞生成素和爆，式促进活素表现出更高的敏感性；脐血Ｓ期、Ｇ＿２＋Ｍ期及Ｓ＋Ｇ＿２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义。     

单个CD_（34）~＋CD_（38）~＋和CD_（34）~＋CD_（38）~－

为深入探讨细胞亚群的不均一性及单个细胞的增殖分化特性，利用ＦＡＣＳＶａｎｔａｇｅ自动细胞分选系统（ＡＣＤＵ）分选出单个亚群细胞：和，在９６孔扳无血清培养体系中，经ＳＣＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ和Ｅｐｏ．刺激，１４～１８天后扩增形成原代集落。单个细胞形成原代集落的比例为３８．Ｏ％±９．０％，集落组成细胞趋于分化成熟，再接种培养，仅８．５％±２．５％可形成次级集落，且绝大部分为粉巨噬系细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）。５４．０％±１２．Ｏ％的单个细胞可形成原代集落，组成细胞形态均一，大多为原始幼稚细胞，７５．０％±１１．０％的原代集落再接种可形成次级集落，且产率高达２８０．Ｏ±２１．５／原代集落，并可向红、粒、巨噬、巨核等系分化。表明细胞群的不均一性，其亚群显示造血祖细胞性能，而细胞的性能则接近于造血干细胞。     

人脐血造血干,祖细胞体外培养的实验研究

采用体外细胞培养的方法，检测了脐血、骨髓、外周血ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ。结果表明脐血中ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ数量高于成人外周血，同骨髓相比，ＣＦＵ－ＧＭ数量无显著差异，ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓。同时观察到脐血中ＣＦＵ－ＧＭ大集落比例明显高于骨髓；ＣＦＵ－ＧＭ集落产率时间曲线较骨髓延迟３～４天；Ｓ期ＧＭ－ＣＦＣ所占比例明显低于骨髓，可能提示脐血造血细胞中早期造血细胞比例高于骨髓。实验中还发现脐血红系集落生长同骨髓十分相似，二者均含ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵＥ集落，而外周血中只含ＢＦＵ－Ｅ集落。我们统计了２７份脐血血量及所含有核细胞数。根据骨髓移植的有核细胞数标准（２×１０￣８／ｋｇ），一份脐血的有核细胞数很难达到此要求，但已达到目前国外小儿异体脐血移植成功病例的有核细胞数值。     

脐血造血干／祖细胞集落产率的研究

对３１例脐血及３１例正常成人骨髓细胞进行体外培养，分别检测其ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ），粒、红、巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭ），粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）及初始造血祖细胞——粘附于基质的原始细胞集落形成单位（ｓＣＦＵ－Ｂｌ），对比分析其造血细胞的层次结构。发现脐血晚期祖细胞含量接近骨髓，早期祖细胞含量则高于骨髓。经推算２１天时ｓＣＦＵ－Ｂｌ含量可达骨髓的１０倍左右。提示脐血长期重建造血的能力优于骨髓，一份脐血重建成人造血理论上是可能的。     

不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究

目的：探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用以及脐血扩增后Ｔ淋巴细胞和ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞变化情况。方法：在脐血有核细胞体外培养体系中分别加入不同组合的细胞因子，观察细胞数、ＣＤ３４＋细胞、ＣＦＵ－ＧＭ、Ｔ４（ＣＤ４＋ＣＤ８－ＣＤ３＋）细胞、Ｔ８（ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ３＋）细胞以及ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞的变化。结果：脐血有核细胞在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的作用下扩增效果最佳。结论：脐血有核细胞在各种造血生长因子的协同作用下可以在体外扩增。脐血扩增后Ｔ４、Ｔ８细胞减少，可能会降低脐血移植急性ＧＶＨＤ发生，但ＨＬＡ－ＡＢ和ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞数急剧上升，增加了免疫排斥的可能性。     

脐血造血祖细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究

采用甲基纤维素半固体体外培养法对脐带血造血祖细胞进行研究。人脐带血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）含量显著高于成人外周血，也高于骨髓（ＣＦＵ－ＧＭ，Ｐ＜０．０５；ＢＦＵ－Ｅ，Ｐ＜０．０１）。脐血造血祖细胞的出现晚于骨髓，但存活时间较长。在不外加促红细胞生成素时，脐血中有少量ＢＦＵ－Ｅ生成。将两份不同胎儿的脐血细胞混合后培养并与单个胎儿脐血细胞培养相比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。采用单克隆抗体技术检测脐血中ＯＫＴ＿３，ＯＫＴ＿４，ＯＫＴ＿８阳性率，与成人相比，ＯＫＴ＿３￣＋降低，而ＯＫＴ＿４￣＋，ＯＫＴ＿８￣＋和ＯＫＴ＿４￣＋／ＯＫＴ＿８￣＋与成人相似。     

巨细胞病毒对人骨髓粒-巨噬系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对人骨髓粒巨噬系祖细胞集落（ＣＦＵＧＭ）是否有直接抑制作用。方法采用造血祖细胞体外培养技术,研究病毒株ＨＣＭＶＡＤ１６９对ＣＦＵＧＭ生长的影响,用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测ＣＦＵＧＭ的细胞内ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结果高浓度ＨＣＭＶＡＤ１６９（２×１０６ｐｆｕ／ｍｌ和２×１０５ｐｆｕ／ｍｌ）在体外能明显抑制ＣＦＵＧＭ的生长（Ｐ＜０．０１）,而低浓度（２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ）ＨＣＭＶＡＤ１６９则无此作用,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ的抑制作用因其浓度的不同而有差异;经ＩＳＰＣＲ检测发现在ＣＦＵＧＭ的细胞核中存在ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结论ＣＦＵＧＭ是ＨＣＭＶＡＤ１６９的宿主细胞之一,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ生长的抑制作用与其对ＣＦＵＧＭ的直接感染有关。     

紫外线照射对恶性肿瘤患者粒—单造血祖细胞集落形成和细胞活？…

目的 研究短波紫外线照射对恶性肿瘤患者粒－单造血祖细胞集落形成和细胞活力的影响。方法 应用０．５０、１００,３００、４００,８００ｍＪ／ｃｍ＾２的ＵＶＣ照射应用干细胞生长因子动员后白细胞外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）,观察７ｄ后粒－单系造血祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）以及于ＵＶＣ照射后１,３,５,７ｄ观察细胞活力。结果 ５０,１００,２００,４００,８００ｍＪ／ｃｍ＾２ＵＶＣ照射后ＣＦＵ－ＧＭ集落个     

造血生长因子对脐血CD34^＋细胞的体外扩增作用

为探讨造血生长因子不同组合方式对脐血ＣＤ３４＋细胞的扩增作用、扩增细胞性能改变及合理的扩增时机，利用吸附单克隆抗体——磁珠分离系统分选出９５％～９９％纯度的脐血ＣＤ３４＋细胞，在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ－６、粒－巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的不同组合扩增１～３周。结果表明，脐血ＣＤ３４＋细胞具有良好的扩增效应，细胞总数、集落形成细胞（ＣＦＣｓ）和ＣＤ３４＋细胞可分别扩增５００．０±８２．５倍、９４．０±２８．６倍和２４．０±３．８倍；ＳＣＦ是扩增最重要的生长因子，ＳＣＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ组合的扩增效率最高；ＣＦＣｓ和ＣＤ３４＋细胞在１～２周维持在较高水平，以后即快速衰减；此外，扩增也加速了细胞的分化，至第３周时９３％ＣＦＣｓ为ＣＦＵ－ＧＭ，极少部分形成ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＥＭＭ。因此，合理组合生长因子，把握适宜扩增时机，将有助于扩增细胞在质和量上满足移植和基因治疗等的要求。