市售川产水豆豉分离株中高产蛋白酶与β-葡萄糖苷酶菌株的菌属鉴定与产酶能力评价

目的 筛选并鉴定72株川产水豆豉分离株中高产蛋白酶及β-葡萄糖苷酶的菌株,为深入研究水豆豉的营养价值及开发其发酵菌株提供实验依据。 方法 采用酪蛋白法和对硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(pNPG)法分别测定菌株产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶的能力,选出优势菌株,通过形态学、生化特征、16S rRNA和基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。绘制菌株生长曲线和产酶曲线并测得其遗传稳定性。 结果 选择产蛋白酶能力前10名菌株中β-葡萄糖苷酶活力最高者(0.084 U/L)作为优势菌株,表型及分子生物学法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株生长曲线、产酶曲线符合枯草芽孢杆菌特性,遗传稳定性结果显示其产酶能力能稳定遗传至第9代并于第10代开始下降。 结论 从72株川产水豆豉分离株中筛选出的高产蛋白酶和β-葡萄糖苷酶菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌。     

一株具有抗稻瘟霉活性的海洋细菌32-11-2-2的筛选和分离鉴定

目的:从中国东海微生物样品中分离筛选活性细菌菌株,并对活性菌株32-11-2-2进行鉴定.方法:采用无限稀释和平板划线法分离微生物样品,利用稻瘟霉模型进行活性筛选;并对其中的活性菌株32-11-2-2的形态、培养特征以及生理生化特征进行研究,使用16S rDNA序列分析的方法对菌株32-11-2-2进行了分类鉴定.结果:分离得到421株细菌,包括活性菌株54株,其中活性菌株32-11-2-2是一株弱嗜盐菌,具有陆地芽孢杆菌的形态特点,能产生胞外淀粉酶、过氧化氢酶,液化明胶、石蕊牛奶反应阳性,16S rDNA序列分析该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)同源性达到98%以上.结论:活性菌株32-11-2-2是一株适应了海洋环境的枯草芽孢杆菌.     

应用固定化芽孢杆菌CPU－931105再生腺苷三磷酸

应用固定化芽孢杆菌ＣＰＵ－９３１１０５再生腺苷三磷酸张宏兴，王，王丁刚，吴梧桐，彭海燕．药物生物技术，１９９５，２（１）：２０～２３筛选了含乙酰激酶较高活力的菌株，芽孢杆菌ＣＰＵ－９３１１０５，并将其固定化，用于从ＡＤＰ再生ＡＴＰ。采用明胶－戊二醛共...     

沙漠枯草芽孢杆菌 PJS 产生的环脂肽类抗生素研究

目的 分离鉴定枯草芽孢杆菌PJS发酵液中的环脂肽类抗生素PJS-0。方法 采用溶剂萃取、薄层色谱（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）等分离方法 对菌株PJS发酵产物的活性组分PJS-0进行分离;并通过紫外（UV）、质谱（MS）和核磁共振波谱（NMR）联合分析对其结构进行鉴定。结果 从塔克拉玛干沙漠来源植物内生枯草芽孢杆菌PJS的发酵液中分离得到一个环脂肽类抗生素：PJS-0,经结构鉴定为Mojavensin A。结论 本文首次从陆生芽孢杆菌中分离得到Mojavensin A,并首次用ESI^＋-MS／MS对其氨基酸序列进行鉴定。     

苯丙氨酸脱氨酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

目的 筛选一株苯丙氨酸脱氨酶高产菌株.方法 从肥沃菜园土样中分离得一株苯丙氨酸脱氨酶产生菌,通过形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析,对菌株进行鉴定,并对其酶学性质初步研究.结果 初步鉴定该菌为蜡样芽孢杆菌(Bacillus Cereus),所产苯丙氨酸脱氨酶的最适反应pH5.8,最适反应温度40℃,60℃以下热稳定性较好,此条件下酶活达1 218 U/mg细胞.结论 所获得的蜡样芽孢杆菌NJU110具有一定的苯丙氨酸脱氨酶生产能力,并为该菌株的菌种改良及高效基因工程菌的构建奠定了基础.     

延边地区CGT酶产生菌的筛选研究

从延边地区部分土壤标本中分离29株芽抱杆菌,筛选出产生环糊精葡萄糖基转移酶并能制备β-环糊精的德新4号菌株.对4号菌和其它芽抱杆菌从生化、形态学方面进行了比较.     

鲍曼不动杆菌SHV-12型超广谱β内酰胺酶基因研究

目的：分析自临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶耐药基因序列，并确定其所产ESBLs亚型。方法：从住院病人的送检标本中分离的60株鲍曼不动杆菌中，经药敏试验、ESBLs表型确证试验和SHV型β内酰胺酶耐药基因的聚合酶链反应(PCR)检测，筛选出1株具有多重耐药特性、ESBLs表型和SHV基因型均阳性的分离株(HZ02株)，对其耐药基因进行序列分析。结果：HZ02株基因片段长825个核苷酸，与Nuesch-Inderbinen等从肠杆菌中发现的SHV—12型ESBLs编码基因序列(GenBank注册号：X98105)完全相同。结论：HZ02株鲍曼不动杆菌可产生SHV—12型ESBLs，从而证实了我国临床分离的鲍曼不动杆菌中存在产SHV—12亚型ESBLs菌株。其序列已在美国核酸数据库(GenBank)登录(注册号：AY29163)。     

噬菌体在鲍曼不动杆菌耐药过程中的作用

目的：通过对临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性检测及电镜观察,了解鲍曼不动杆菌结构与耐药性的关系。方法：以临床住院患者的痰、腹腔、盆腔引流物等为材料分离鉴定细菌,K—B法药敏试验筛选耐药菌株,电镜观察耐药菌株超微结构。结果：临床分离的鲍曼不动杆菌广泛耐药,在鲍曼不动杆菌耐药菌株表面存在温和噬菌体。结论：温和噬菌体与鲍曼不动杆菌耐药性存在相关性。     

常温纤维素降解菌的分离与鉴定

目的分离培养常温下能降解纤维素的细菌。方法采集腐烂植物样本6份、表层土壤样本6份和污染水体样本2份;在22℃条件下,采用复合纤维素培养基筛选,羧甲基纤维素钠刚果红平板分离,富集培养基扩增培养;重复多次操作,测定纤维素酶活性后获得常温下具有纤维素酶活性的菌株;提取细菌基因组DNA,对16S rDNA进行测序,并与Genebank对比,鉴定其种属。结果分离出3株常温下具有纤维素酶活性的细菌,其纤维素酶活性分别为0.028、0.57和1.2μg/min。经鉴定,3株细菌与类芽孢杆菌属、暂定种金黄色杆菌和金黄杆菌的匹配度分别为99%、97%和97%。结论从腐烂的树叶、腐烂树叶下的表层土壤和污染水体中均能分离出常温下具有纤维素酶活性的菌株。     

产ESBLs革兰阴性杆菌的检测及耐药性分析

目的：分析革兰阴性杆菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的现状和耐药性，指导临床合理使用抗生素。方法：采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）表型筛选和确认试验检测产ESBLs菌株，并采用K—B法对临床常用抗生素进行体外药敏试验。结果：67株革兰阴性杆菌中共检测到ESBLs阳性的菌株19株，阳性率为28．4％。结论：临床分离的革兰阴性杆菌中产ESBLs的菌株分离率较高，而且产酶株多重耐药，碳氢霉烯类为首选抗生素。     

常温纤维素降解菌的分离与鉴定

目的 分离培养常温下能降解纤维素的细菌.方法 采集腐烂植物样本6份、表层土壤样本6份和污染水体样本2份;在22 ℃条件下,采用复合纤维素培养基筛选,羧甲基纤维素钠刚果红平板分离,富集培养基扩增培养;重复多次操作,测定纤维素酶活性后获得常温下具有纤维素酶活性的菌株;提取细菌基因组DNA,对16S rDNA进行测序,并与Genebank对比,鉴定其种属.结果 分离出3株常温下具有纤维素酶活性的细菌,其纤维素酶活性分别为0.028、0.57和1.2 μg/min.经鉴定,3株细菌与类芽孢杆菌属、暂定种金黄色杆菌和金黄杆菌的匹配度分别为99%、97%和97%.结论 从腐烂的树叶、腐烂树叶下的表层土壤和污染水体中均能分离出常温下具有纤维素酶活性的菌株.     

广东省结核病流行菌株研究

目的：从分子流行病学的角度探讨广东省结核分支杆菌菌株流行的分布。方法：构建广东省74株临床分离的以RFLP为基础的结核分支杆菌的IS6110 DNA指纹图谱技术，确诊结核分支杆菌菌株的流行分布。结果：24．3％（18／74）的结核菌株的IS6110 DNA指纹相似值在1－0．65之间，鉴定结果为它们均是“北京家族”结核分支杆菌菌株。结论：广东省结核菌株流行主要存在着遗传关系接近，在基因水平上相关程度较高的“北京家族”结核分支杆菌菌株，且该家族菌株正以一定的比例在我省流行。     

从痰标本中检出人苍白杆菌1例

人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）在我们日常临床细菌室的分离菌株极少见。2000年7月我们从送检的痰标本中分离出一株人苍白杆菌，现报告如下。     

器官移植术后感染产超广谱β内酰胺酶细菌的耐药性分析

目的探讨器官移植术后细菌感染产超广谱β内酰胺酶的病原菌分布情况及其耐药特性。方法对84例阳性标本按NCCL标准筛选后，进行纸片扩散法确定试验，并选用19种抗生素作敏感试验。结果从分离鉴定出的84株革兰阴性杆菌，超广谱β内酰胺酶的检出率为28．57％(24／84)。产超广谱β内酰胺酶的菌株对19种常用的抗菌药物的耐药性明显高于非产超广谱β内酰胺酶菌株。结论对分离鉴定出来的革兰阴性杆菌应及时进行超广谱β内酰胺酶检测，其结果对指导临床合理、有效地使用抗生素，控制器官移植术后的细菌感染十分重要。     

学生午餐中蜡样芽孢杆菌污染状况毒力基因及耐药性分析

目的 了解学生午餐中蜡样芽孢杆菌的污染情况，携带毒力基因特征以及对抗生素的耐药性。方法 2021年5—9月，按照《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》(GB 4789.14—2014)方法进行分离鉴定。采用荧光定量PCR方法对学生午餐中检测出的20株蜡样芽孢杆菌进行12种毒力基因检测，采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验。结果 蜡样芽孢杆菌阳性检出率为24.39%,采集的凉拌菜、盒饭、热菜、熟制米面制品中均有检出。检测的20株蜡样芽孢杆菌中毒力基因携带率为100.00%,90.00%的菌株同时携带2种以上毒力基因，nheB携带率最高为90.00%,其次为nheC和cytK分别为65.00%和40.00%。蜡样芽孢杆菌对氯霉素、亚胺培南、环丙沙星、四环素、万古霉素、庆大霉素敏感率为100.00%,红霉素敏感率为55.00%、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感率为35.00%,对克林霉素100.00%中介，对氨苄西林、青霉素100.00%耐药。结论 学生午餐中存在蜡样芽孢杆菌污染情况，且毒力基因携带率高，存在引发食源性疾病风险。氯霉素、亚胺培南、环丙沙星、四环素、万古霉素、庆大霉素建议...     

溶藻菌N25的筛选及溶藻效果观察

目的筛选高效溶藻菌,初步观察其对铜绿微囊藻的溶藻效果。方法从处理生活污水的活性污泥中分离菌株,将其接种至微囊藻培养液中,通过观察培养液颜色和藻细胞数量的变化,初步筛选出溶藻菌。重复上述过程3次,并用溶藻率来初步评价其溶藻效果,获得较为高效的溶藻菌。用PCR的方法,对高效菌株的16S rDNA进行测序并与GeneBank对比,鉴定其种属。运用透射电子显微镜观察藻类在溶藻菌作用下48 h内发生的形态学变化,证实溶藻效果。结果从活性污泥中分离得到一株高效溶藻菌,命名为N25-2(以下简称为N25)。经过16S rDNA鉴定,该菌与芽孢杆菌(Bacillus SP.)或纺缍形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)的匹配度均为99%。当培养液中藻的数量达到1×106个/mL,细菌的数量达到1×106 cfu/mL时,在48 h内,该菌的溶藻率达到72%以上。透射电子显微镜观察发现,经过N25处理后,微囊藻出现空泡增加,多面体深染,藻胆体增加,质壁分离和内部结构破坏等形态学改变。结论 N25具有较好的溶藻效果,能诱导微囊藻出现多种形态学改变,其溶藻机制可能是细菌分泌物导致藻类细胞死亡所致,但...     

一株产长春新碱内生真菌的初步研究

目的 通过长春花叶内生真菌的分离，筛选产生长春新碱的菌株。方法 从长春花叶中分离内生真菌，对其发酵提取物进行TLC和HPLC分析。结果 从长春花叶中分离筛选到一株无孢菌群菌株：97CY3。它能产生长春新碱，HPLC测定其长春新碱含量约为0.205μg／L。结论 长春花内生真菌中，有的菌株可产生与宿主所产相同的抗癌物质长春新碱。     

承德市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及其毒力基因检测

目的 了解承德市餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的污染状况及其毒力基因携带情况，为食源性致病菌防控提供科学依据。方法 2019—2020年在街头摊点、小吃店、超市、饮品店、饭店、快餐店采集的熟制米面制品、寿司、饮料、甜品4类183份餐饮食品，按照国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》(GB 4789.14—2014)第一法平板计数法进行蜡样芽孢杆菌计数，并采用PCR法对分离鉴定的19株蜡样芽孢杆菌进行毒力基因检测。结果 餐饮食品蜡样芽孢杆菌的检出率为10.4%,寿司和熟制米面制品蜡样芽孢杆菌的检出率分别为25.0%和18.0%。不同流通环节中街头摊点和小吃店蜡样芽孢杆菌的检出率分别为18.2%和28.2%,超市、饮品店、饭店、快餐店未检出蜡样芽孢杆菌。19株蜡样芽孢杆菌检出携带毒力基因菌株14株，其中6株携带呕吐型肠毒素cer和ces检出率分别为21.1%和15.8%。8株携带腹泻型肠毒素HblA、nheA、nheC检出率分别为10.5%、26.3%、31.6%。结论 承德市餐饮食品存在蜡样芽孢杆菌污染情况，有一定的生物安全风险，有关部门应加强食品安全监管。     

一株高产淀粉酶枯草芽孢杆菌的筛选、鉴定及产酶条件的优化

目的：筛选出α-淀粉酶高产菌株,对其发酵特性及分类鉴定进行研究,为丰富产淀粉酶菌种资源和进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。方法：通过初筛、复筛获得高酶活菌株XW86,利用传统的形态观察、系统生理生化反应并结合16S rDNA的序列分析,经Blast序列比对构建其系统进化树,确定其分类定位。通过单因素选择实验以及进一步的正交实验和多因素交互实验,进行产酶条件优化。结果：XW86与已报道的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis strain QD517）亲缘关系最近,二者的16S rDNA序列相似性为99%,生理生化反应谱与16S rDNA序列分析一致鉴定为枯草芽孢杆菌。XW86最适产酶条件为：在LB基础培养基中添加0.75%吐温、0.5%淀粉,初始pH 6.5,35℃培养120 h。液体发酵得到的粗酶液酶活可高达2 200 U/dL,比优化前提高2.8倍。结论：初步鉴定XW86为枯草芽孢杆菌,产酶因素的最佳组合对其淀粉酶活性有很大的优化空间。该野生型菌株可为淀粉酶发酵工业新备选菌株的开发应用提供资源,也为进一步克隆获得产淀粉酶基因的研究奠定基础。     

红树内生细菌的分离及皮肤病菌拮抗菌株的筛选

目的从红树健康植株体分离内生细菌对热带常见致皮肤病真菌进行拮抗菌株筛选。方法通过表面消毒组织分离法从红树植物秋茄(Kandelia candel)、白骨壤(Auicennia marina)、无瓣海桑(Sonneratia apetala)的540块组织中分离到内生细菌菌株90株。以致皮肤病真菌须癣毛癣菌(Trichophy mentagrophytes)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、犬小孢子菌(Microsporum canis)和石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)为指示菌,采用对峙培养法进行筛选。结果大多数的内生细菌菌株表现一定的拮抗性,对4种病原菌都有拮抗作用的菌株有12株,占总测试菌株的13.33%。其中AC2、SR10、SR17菌株对白色念珠菌(C.albicans)有较强的拮抗作用,而AC2菌株的作用最强,抑制率达72.38%,与其他菌株有极显著性差异。AC2初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。结论从3种红树中共分离获得90株内生细菌。大多数的内细菌菌株表现对致皮肤病真菌一定的拮抗性,以AC2菌株的作用最好,具有应用前景。