异丙酚在人肝微粒体中酶促动力学研究

目的 研究异丙酚在人肝微粒体中的代谢。方法 采用高效液相方法测定孵育液中异丙酚的浓度。研究异丙酚的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint)。同时观察不同种类的CYP酶特异性抑制剂对异丙酚代谢的影响。结果 异丙酚在人肝微粒体中Km和Vmax分别为777.43μuM和172.413μM?h ?1?mg ?1?protein,Clint为0.22h?1?mg?1?protein。CYP2B6特异性抑制剂氯吡格雷能够显著抑制异丙酚的代谢,而CYP2C9和CYP2C19特异性抑制剂对异丙酚代谢无显著影响CYP2B6抑制剂能够减少异丙酚的代谢。结论 CYP2B6主要参与异丙酚的代谢, CYP2B6酶抑制剂可能会抑制异丙酚的代谢,造成药物药效或毒性的增加。     

吴茱萸次碱在人肝微粒体中对细胞色素P450酶的抑制作用

目的研究吴茱萸次碱(WZY)在人肝微粒体中对细胞色素P450酶的抑制作用。方法对照组和抑制组酶活性均用探针药测定,探针药物及其代谢产物用HPLC进行检测。用代谢产物与母药比值来表达酶的活性。结果加入50μmol·L-1吴茱萸次碱组CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1和CYP2D6的活性显著降低,CYP3A4和CYP2C9活性无显著变化。结论吴茱萸次碱对CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1和CYP2D6的活性有显著抑制作用,而对CYP2C9和CYP3A4的活性无显著影响。     

单株抗人肝脏微粒体蛋白及细胞色素P450单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗正常人肝脏微粒体(HLM)及细胞色素P450蛋白的单克隆抗体.方法:采用人肝脏微粒体蛋白作为免疫原免疫Balb/C小鼠,按常规方法融合、克隆,经间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞株,通过单抗亚类、Western blot对抗体进行初步鉴定.结果:成功地制备了一株抗肝微粒体蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为MAb 10C7.用鼠单抗亚类快速鉴定纸条鉴定10C7为IgG2b.Western blot分析显示,MAb 10C7可特异识别相对分子量为46kD的人肝脏微粒体蛋白.结论:MAb 10C7抗正常人肝脏微粒或细胞色素P450蛋白的特异性强,对相关蛋白质的功能研究有较好的应用前景.     

双环醇在大鼠和人肝微粒体的代谢

目的研究参与双环醇代谢的主要药物代谢酶及代谢动力学参数，分离鉴定双环醇代谢产物。方法双环醇与大鼠和人肝微粒体进行温孵，以高效液相色谱、质谱、核磁共振技术检测并分离鉴定双环醇及其代谢产物。结果双环醇在地塞米松诱导大鼠肝微粒体中的代谢速率显著高于正常大鼠肝微粒体，酮康唑可显著抑制双环醇的代谢。双环醇主要代谢产物为:4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯。结论双环醇在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物为4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯，细胞色素P450 3A主要参与双环醇代谢。     

瓜蒌皮注射液对人肝微粒体CYP450酶4种亚型的影响

目的研究瓜蒌皮注射液对人肝细胞色素P450(CYP450)酶4种亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的体外抑制作用。方法瓜蒌皮注射液8个不同浓度(2%、1%、0.2%、0.05%、0.01%、0.005%、0.002%、0.000 5%)的工作液分别与4种CYP450酶亚型的探针底物混合,即非那西丁(CYP1A2)、安非他酮(CYP2B6)、双氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6),用维拉帕米作为内标,在人肝微粒体中孵育,采用高效液相色谱法检测4种探针底物的剩余浓度,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果瓜蒌皮注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的IC_(50)值均大于临床常用量。结论正常用量下,瓜蒌皮注射液对人CYP450酶的4亚型无明显影响。     

羟氯喹在人肝微粒体CYP酶中的代谢研究

目的：探讨羟氯喹在人肝微粒体中的主要代谢酶及其代谢特点和参数。方法：建立高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）测定孵育液中羟氯喹的方法,观察9种CYP酶特异性抑制剂对羟氯喹代谢的影响,计算羟氯喹的酶促动力学参数如米氏常数（Km）、最大反应速度（Vmax）和药物的内在清除率（CLint）。结果：9种酶抑制剂中孟鲁司特（CYP2CB抑制剂）、酮康唑（CYP3A4抑制剂）、噻氯匹定（CYP2B6抑制剂）能够显著抑制羟氯喹的代谢（P ＜ 0.05）。羟氯喹在人肝微粒体中Vmax为233.6 ng·mL-1·h-1·mgprotein-1,Km为14.5 ng·mL-1,CLint为16.2 h-1·mgprotein-1。结论：羟氯喹主要通过CYP2C8、CYP3A4和CYP2B6代谢,药物在体内清除速率慢,药物相互作用和蓄积是发生不良反应的重要因素。     

我国成人肝微粒体的制备和几种细胞色素P450单加氧酶的活性

7例人肝标本均取自我国成年男性,其中5例来自非疾病死亡者,1例为肝血管瘤手术切除的正常肝组织,1例取自交通事故死亡者。该7例人肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b5含量分别为0.36±0.08和0.23±0.05nmol·mg~(-1)蛋白,氨基比林和乙基吗啡N-脱甲基酶活性分别为1.07±0.23和1.82±0.31nmol·mg~(-1)·min~(-1),7-乙氧基香豆素O—脱乙基酶、硝苯吡啶氧化酶和(-)-吡喹酮羟化酶活性分别为0.30±0.10,0.43±0.18和0.69±0.43nmol.mg~(-1)·min~(-1)。     

丹参注射液对人肝微粒体酶CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6体外抑制作用的研究

目的 评价丹参注射液在体外对人肝微粒体酶CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6活性的影响。方法 将丹参注射液与CYP450酶3种亚型(CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6)的特异性探针底物甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬与大鼠肝微粒体进行孵育,采用LC-MS/MS法测定对应3种代谢产物4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、右啡烷的浓度,求算出IC₅₀。结果 丹参注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6的IC₅₀值均>50 μg/mL。结论 丹参注射液对人肝微粒体酶CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6没有抑制作用。     

我国成人肝微粒体的制备和几种细胞色素P450单加氧酶的活性

7例人肝标本均取自我国成年男性,其中5例来自非疾病死亡者,1例为肝血管瘤手术切除的正常肝组织,1例取自交通事故死亡者。该7例人肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b5含量分别为0.36±0.08和0.23±0.05nmol·mg^-1蛋白,氨基比林和乙基吗啡N-脱甲基酶活性分别为1.07±0.23和1.82±0.31nmol·mg^-1·min^-1,7-乙氧基香豆素O—脱乙基酶、硝苯吡啶氧化酶和(-)-吡喹酮羟化酶活性分别为0.30±0.10,0.43±0.18和0.69±0.43nmol.mg^-1·min^-1。     

抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与初步鉴定

目的 制备抗人钠碘转运体(NIS)单克隆抗体。方法 以人NIS蛋白质的二个片段(第2膜外段和第14f段)为抗原免疫小鼠，运用杂交瘤技术，制备鼠抗人NIS单克隆抗体(rhNIS MAb)，采用小鼠Ig亚类测定试剂条测定单抗的亚类，并通过ELISA、Western-blot、免疫组化技术等鉴定其特异性。结果 运用杂交瘤技术成功地制备出能稳定分泌抗人NIS单克隆抗体的细胞系。Western-blot分析表明：此单抗所识别的靶分子的相对分子量主要在97KD，免疫组化染色显示：甲状腺滤泡细胞基底膜上有棕黄色着色。结论 成功地制备出抗人NIS单克隆抗体，为NIS抗原-抗体的研究提供了新的工具，NIS单克隆抗体不仅可以应用于甲状腺、乳腺等领域的基础研究，而且可以用于临床，为甲状腺疾病的诊断和治疗提供切实保障。     

HPLC测定大鼠肝微粒体P450活性方法学研究进展

近年来，越来越多的研究者意识到使用肝微粒体进行细胞色素P450活性测定的重要性。本文综述了应用高效液相色谱进行大鼠肝微粒体P450活性测定的方法学研究进展，内容包括肝微粒体的制备方法，细胞色素P450代谢酶系的特异性底物及其代谢产物和使用高效液相色谱进行细胞色素P450活性测定的应用条件。     

Effects of two novel sugar drug candidates on CYP450 isoforms in different sexed Chinese human liver microsome in vitro

The sex-based differences between the effects of two novel sugar-based drug candidates,a sulfated polymannuroguluronate(SPMG-911)and an acidic oligosaccharide sugar chain compound(AOSC-971),on the enzymes CYP 1A2,CYP2E1 and CYP3A4 of Chinese human liver microsome were investigated.The results showed that neither SPMG-911 nor AOSC-971 have any effect on CYP3A4,AOSC-971 induced the CYP 2E1 in men but have no effect on CYP1A2,SPMG-911 inhibit the CYP1A2 also in men but have no effect on CYP2E1.The results are useful for their safety evaluation,as well as for the prediction of inter-drug interactions associated with the two drugs.     

水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢研究

目的 研究水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性,确定水黄皮素的代谢酶表型.方法 将水黄皮素与大鼠肝微粒体于37℃孵育,应用UPLC-MS/MS法检测孵育液中水黄皮素的含量,考察水黄皮素的代谢稳定性.将水黄皮素与各细胞色素P450(CYP)酶中的各同工酶CYP2E1、2C19、1A2、2D6、2C9和3A4的特异性抑制剂共孵育,确定其代谢酶表型.结果 在大鼠肝微粒体中,水黄皮素的t1/2=1.97 h、Cl =0.70 mL·h-1 ·mg-1,CYP1 A2是其主要代谢酶.结论 水黄皮素在大鼠肝微粒体中是由多个CYP同工酶介导代谢的,其中,CYP1 A2酶的介导作用最强.     

抗哇巴因单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗哇巴因单克隆抗体。方法以半抗原哇巴因与蛋白质载体卵清蛋白(OVA)的耦联物为抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗哇巴因的单克隆抗体的细胞株(OUA1,OUA2)。结果两株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞;所分泌抗体为小鼠IgG1亚类;小鼠腹水效价测定分别为5×106,8×106;和地高辛交叉反应率分别为1.342%和2.323%;ELISA相加试验表明,两株单克隆抗体可能针对同一抗原决定簇。结论成功制备出小分子物质哇巴因的单克隆抗体。     

Preparation and functional identification of a monoclonal antibody against the recombinant soluble human NKp30 receptor

NKp30 is an important activating receptor of human natural killer (NK) cells that participates in NK cell activation and cytotoxicity against tumor and infected cells. To study the function of NKp30, anti-human NKp30 monoclonal antibody was prepared. The human NKp30 ectodomain (rhNKp30) was expressed in Escherichia coli as inclusion bodies and refolded using the dilution method. The refolded rhNKp30 was purified by immobilized metal affinity chromatography. The activity of soluble rhNKp30 was confirmed by flow cytometry and NK cytotoxicity assays. Four hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies against rhNKp30 were obtained. One of the monoclonal antibodies, designated as “3G5”, was highly specific and could be used in western blotting, immunoprecipitation, ELISA, and flow cytometry assays. The preparation of soluble rhNKp30 and a monoclonal antibody against NKp30 may provide useful tools for further functional studies of human NKp30.     

大豆苷元在人肝微粒体中的单羟化代谢机制大豆苷元在人肝微粒体中的单羟化代谢机制

目的探讨大豆苷元在人肝微粒中羟基化代谢所涉及的肝细胞色素P450(CYP)同工酶，为研究其在人体内的代谢提供基础。方法通过分析大豆苷元在肝微粒体中和重组CYP酶中形成的单羟化代谢物的酶促动力学,分析其酶学模型，然后用不同CYP同工酶选择性抑制剂或底物进行抑制实验，初步筛选出介导大豆苷元单羟化代谢所涉及的CYP同工酶。结果代谢物的形成动力学符合米氏方程单酶模型。CYP1A2选择性抑制剂呋喃茶碱和CYP1A2单克隆抗体均能明显抑制3种单羟化代谢物的形成。而其他CYP选择性的抑制剂对3种代谢物的形成没有或较小产生抑制作用。用重组酶实验得出相同结果。结论体外肝微粒体研究表明，大豆苷元的单羟基代谢主要由CYP1A2所介导。     

高效液相色谱-电化学检测器法测定人肝微粒体中雌二醇的代谢产物(英文)

目的:建立雌二醇在人肝微粒体中代谢产物的测定方法,研究低浓度雌二醇在人肝微粒体中的代谢机制。方法:有机溶剂提取、蒸发、重溶的方法处理样品,高效液相色谱法分离组分,电化学检测器测定含量。结果:流动相为醋酸缓冲液-乙腈(50:50,v/v,pH4.5,电压为 0.7V vs Ag/AgCl时,在C18柱上分离较好。最低检测量为100pg。结论:本法可用于测定底物浓度在1-100μmol/L时,人肝微粒体中的代谢产物。