淋系血液肿瘤患者BAFF和APRIL表达及意义

目的研究B细胞激活因子（BAFF）和增殖诱导配体（APRIL）在淋系血液肿瘤的表达情况及其临床意义。方法应用双抗夹心ELISA方法检测20例淋系血液肿瘤、17例髓系血液肿瘤患者和对照组25名健康献血员的血清BAFF和APRIL水平,并进行相关分析。结果①淋系血液肿瘤组的血清BAFF和APRIL分别为3．66±1．92ng／ml和38．29±24．99ng／ml,均明显高于对照组的2．90±0．52ng／ml和17．97±4．96ng／ml（分别为q=3．50,P〈O．05和q=4．85,P〈0．01）,也高于髓系血液肿瘤纽的2．96±0．93ng／ml扣18．43±8．39ng／ml（分别为q=3．22,P〈0．05和q=5．19,P〈0．01）。②髓系血液肿瘤组的BAFF扣APRIL水平则与对照组无明显差异（分别为q=0．21和q=0．10,均为P〉0．05）。③淋系血液肿瘤组血清BAFF和APRIL水平呈正相关（r=0．5484,t=2．7838,P〈0．01）。而髓系血液肿瘸组扣对照组血清BAFF和APRIL水平均无相关关系（分别为r=0．0963和-0．2170,均为P〉0．05）。结论淋系血液肿瘤患者的BAFF和APRIL均高表达,可能是B细胞相关疾病发生机制的重要原因之一。     

不同原因血小板减少症BAFF和APRIL表达及意义

目的 研究B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)在不同原因血小板减少症患者中的表达情况及其临床意义.方法 应用双抗夹心ELISA方法检测130例患者(其中ITP组35例、淋系血液肿瘤20例、髓系血液肿瘤17例、其他血液病20例和实体肿瘤组38例)以及26名对照组的血清BAFF和APRIL水平,并进行相关分析.结果 ①ITP组的血清BAFF和APRIL分别为3.92±1.88 ng/ml和33.92±25.49 ng/ml,均明显高于对照组的2.90±0.52 ng/ml和17.97±4.96 ng/ml(分别为q'=3.12和q'=3.33,均为P＜0.01).②ITP组血清BAFF和APRIL水平呈正相关关系(r=0.352 7,t=2.1651,P＜0.05).③淋系血液肿瘤组的血清BAFF和APRIL分别为3.65±1.92 ng/ml和38.29±24.99ng/ml也均明显高于对照组(分别为q'=2.99,P＜0.05和q'=4.74,P＜0.01).④淋系血液肿瘤组的血清BAFF和A-PRIL水平呈正相关关系(r=0.548 4,t=2.783 8,P＜0.01).⑤髓系血液肿瘤、其他血液病和实体肿瘤三组患者的血清BAFF和APRIL与对照组比较差异均无统计学显著性意义(均为P＞0.05),并且该三组的BAFF与APRIL均无相关关系(均为P＞0.05).结论 ITP患者和淋系血液肿瘤患者的血清BAFF和APRIL均高表达,BAFF和APRIL可能是ITP等B细胞相关疾病发生机制的重要原因之一.     

多发性骨髓瘤患者血清APRIL表达水平的初步研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者血清增殖诱导配体(APRIL)蛋白水平,并分析它们和临床指标的相关性,初步探讨APRIL对MM发病和预后的意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MM患者(19例)血清APRIL水平,以健康志愿者(23例)作为对照;同时将患者血清APRIL水平与乳酸脱氢酶(LDH)、β2微球蛋白(β2M)、轻链和免疫球蛋白(Ig)进行相关性分析。结果MM患者血清APRIL水平明显低于健康对照组(P<0.01);MM患者血清APRIL的表达水平与血清β2M、轻链及Ig含量呈负相关(r=-0.381、-0.473、-0.407,P值均<0.05)。结论MM患者血清APRIL水平与健康对照组存在显着性差异,提示APRIL可能与MM的发病及预后有关。     

血清APRIL表达水平与非霍奇金氏病相关性的初步研究

目的研究非霍奇金氏病（NHL）患者血清增殖诱导配体（APRIL）蛋白水平，并探讨其与血清乳酸脱氢酶（LDH）的关系。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测LDH升高患者组（10例）和LDH正常NHL患者组（12例）血清APRIL水平，以健康志愿者（23例）作为对照；同时将血清APRIL水平与患者血清乳酸脱氢酶（LDH）进行相关性分析。结果NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异（P〉0．05），但LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组（P〈0．05）；NHL患者组和LDH升高患者组血清APRIL水平与LDH正相关（r=0．923,0．799，P〈0．05）。结论NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异，LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组，提示APRIL可能与NHL的预后及恶性程度有关。     

自身免疫病患者增殖诱导配体基因mRNA表达水平的研究

目的建立检测增殖诱导配体(a proliferation-induc ing ligand,APR IL)mRNA的SYBR G reenⅠ实时定量PCR方法,了解系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)等自身免疫病患者外周血单个核细胞(PBMC)中APR IL的表达水平及其与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系。方法构建克隆载体pGEM-T Easy-APR IL作为定量模板,定量检测58例自身免疫病(SLE、RA)确诊病人和20例健康献血者的外周血APR IL mRNA表达量,以APR IL mRNA和内参GAPDH mRNA表达量的比值作为APR IL表达水平的指标。结果自身免疫病患者的APR IL mRNA表达范围3.95~192.0,均值为29.68±4.5。20例正常对照者APR IL mRNA的表达范围3.1~18.7,均值为10.56±2.0。自身免疫病患者APR IL mRNA的表达水平高于正常对照组;久治不愈或疗效差者APR IL mRNA表达水平显著高于初发患者及治疗后缓解患者,但后两组差异无显著性意义。结论自身免疫性疾病(SLE、RA)患者的APR IL mRNA表达水平升高,疗效差、久治不愈患者表达水平更高。     

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞刺激因子的水平研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)蛋白水平,并探讨其与尿蛋白的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿蛋白阳性组(17例)和尿蛋白阴性SLE患者组(20例)血清Blys水平,以健康志愿者(30例)作为对照.结果 SLE患者血清Blys水平明显高于健康对照组(P＜0.05),但尿蛋白阳性组血清Blys水平与尿蛋白阴性组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLE患者Blys水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

儿童急性特发性血小板减少性紫癜患者B淋巴细胞刺激因子和增殖诱导配体表达及意义

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BLyS)和增殖诱导配体(April)在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)免疫发病机制中的可能作用.方法 急性ITP患儿30例,同龄正常对照儿童30名.采用RT-PCR及实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测BLyS和April及其受体BR3、BCMA、TACI,细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15 mRNA表达;流式细胞术检测血小板表面自身抗体PAIgG表达的相对平均荧光强度(MFI).结果 ①急性ITP患儿单核-巨噬细胞(MC)BLyS mRNA[(8.30±2.31)×10-1]和April mRNA[(7.51±1.93)×10-3]表达明显高于同龄正常对照组[分别为(3.95±1.44)×10-1和(3.08±0.82)×10-3](P<0.01);②BLyS和April受体BR3、BCMA和TACI基因转录水平亦明显增高(P<0.01);③急性ITP患儿抗体类型转换相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15mRNA表达水平明显高于同龄正常对照组(P<0.01);④ITP患儿BLys和April表达调控因子IFN-α、IL-10 mRNA表达水平显著增高(P<0.01);⑤急性ITP患儿PAIgG表达的相对MFI值(67.4±28.1)高于正常对照组(19.5±8.5)(P<0.01),与BLyS和April及其受体(BR3、BCMA和TACI)mRNA的表达呈正相关(r值分别为0.56、0.53、0.62、0.70、0.45,P值均<0.01),激素治疗后明显下降,与BLys和April及其受体表达变化相一致.结论 急性ITP患儿BLyS和April过表达可能是导致ITP免疫功能紊乱的因素之一.     

甲氨蝶呤治疗对急性淋巴细胞白血病患者BAF的影响

目的 探讨对急性淋巴细胞白血病(ALL)应用甲氨蝶呤治疗的效果.方法 将100例ALL患者随机分成实验组与对照组各50例,对照组采取常规化疗治疗方式,实验组应用化疗联合甲氨蝶呤治疗,比较各组经3个月治疗的疗效、血清B淋巴细胞刺激因子(BAF)与增殖诱导配体(APRIL)水平变化与不良反应发生情况.结果 实验组92.00...     

APRIL shRNA表达载体的构建与筛选

目的 构建并筛选有效的、编码短发夹RNA(shRNA)的增殖诱导配体(APRIL)基因特异性真核表达裁体.方法 分别设计、合成4对寡核苷酸单链,经退火、连接得到APRIL-shRNA双链,定向克隆至带有H1启动子、绿色荧先蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和Neo基因的pGCsi-H1/Neo/GFP质粒裁体中,柏建4条含APRIL基因shRNA的pGCsi-H1/Neo/GFP-APRIL-shRNA真核表达裁体,转染高表达APRIL的结直肠癌细胞株SW480.G418筛选,荧光显微镜下现察转染效率,FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达.结果 测序证实pGCsiH1/Neo/GFP-APRIL-shRNA(APRIL shRNA)构建成功,无碱基突变,4种不同shRNA质粒转染细胞后APRIL mRNA和蛋白表达差别有统计学显著性意义(P＜0.01).结论 成功地构建APRIL shRNA真核表达裁体,敲低效率85%以上,可用于后续的实验研究.     

B淋巴细胞刺激因子及其受体BAFF-R在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(Blys)及其受体BAFF-R在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况及临床意义.方法 应用流式细胞仪技术,检测90例SLE患者PB-MCs中Blys及其受体BAFF-R的表达,并与45例健康志愿者检测结果 进行比较.分析Blys及BAFF-R的表达与SLE病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系.结果 ①SEE患者PBMCs中Blys及BAFF-R的表述百分率比健康对照组高(均P<0.001).其中,活动期和稳定期SLE患者Blys和BAFF-R的表达率均高于健康对照组(P<0.001或0.01);活动期和稳定期比较,Blys的表达较高(P<0.05),而BAFF-R的表达无统计学差异.②SLE患者PBMCs中Blys的表达水平与SLE疾病活动指数评分呈正相关(r=0.728,P<0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM里正相关(r=0.691,P<0.001和r=0.453,P<0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.510,P<0.001和r=-0.312,P<0.05).③抗dsDNA抗体(+)组患者PBMCs中Blys的表达较 dsDNA抗体(-)组高(P<0.01).Clq抗体(+)组患者PBMCs中的表达也较C1q抗体(-)组高(P<0.01).结论 Blys及BAFF-R在SLE外周血单个核细胞中的表达率升高.Blys的表达在一定程度上反映病情的活动,并与自身抗体的产生相关.Blys及其特异性受体BAFF-R可能参与SLE的发病.     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的探讨T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞在系统性红斑狼疮fSLE忡的作用。方法利用流式细胞仪对29例活动期、24例非活动期SLE患者及50例健康对照者的外周血中的CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD3-CD16＋CD56＋（NK）及CD19＋（B）淋巴细胞进行检测。结果活动期组与非活动期组及健康对照组比较：CD4＋T淋巴细胞、CD4＋／CD8＋比值及NK细胞明显降低（P〈0．05）,B淋巴细胞明显增高（P〈0．05）,CD3＋T和CD8＋T淋巴细胞无统计学意义（P〉0．05）。非活动期组与健康对照组比较．T淋巴细胞各亚群、NK细胞及B淋巴细胞均无统计学意义（P〉0．05）。结论检测外周血淋巴细胞亚群．对判断病情及指导临床治疗具有重要意义。     

类风湿性关节炎患者外周血HFLC检测的临床意义

目的探讨外周血高荧光强度淋巴细胞(HFLC)与类风湿性关节炎(RA)发作的关系。方法选取2013年3月至2014年7月在武警后勤学院附属医院就诊的RA患者91例,含活动期患者(ARA)39例,静止期患者(SRA)52例,并选择同期114例该院查体患者作为健康对照组(HC),采用Sysmex XE-5000检测外周血HFLC的两参数绝对计数(HFLC#)和占白细胞百分比(HFLC%),采用SIMENS BNII全自动免疫散射比浊仪检测C反应蛋白(CRP)、血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、类风湿因子(RF)、抗链O(ASO)、补体(C3、C4)。结果 HC组[0.00(0.00~1.00)×109/L]和SRA组[0.00(0.00~1.00)×109/L]间HFLC差异无统计学意义(P0.05),但均明显低于ARA组[1.00(0.00~2.00)×109/L](P0.05)。ARA组HFLC%[0.10%(0.00%~0.22%)]明显高于HC组[0.00%(0.00%~0.14%)](P0.05)。ARA组中HFLC#与IgE、CRP为正相关(P0.05),HFLC%与RF正相关(P0.05)。HFLC#与HFLC%的ROC曲线下面积分别为0.637(P0.05)、0.632(P0.05),当HFLC%界值为0.14%时,灵敏度为46.15%,特异度为78.85%。结论 HFLC%与HFLC#可以反映RA的发作,虽然其诊断效能不高,但是由于这些参数获取经济、便捷,可以为RA发作的诊断提供新的观察指标,为指导下一步的检查和治疗提供帮助。     

Pro- and antioxidant blood system in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus

AIM: To estimate the levels of prooxidants (malonic dialdehyde-MDA and nitric oxide-NO), Zn, activity of antioxidant enzymes (superoxide dismutase--SOD and glutathione peroxidase--GPO) in the blood of patients with rheumatoid arthritis (RA) and systemic lupus erythematosus (SLE). MATERIAL AND METHODS: Pro- and antioxidant system was assessed in 45 RA patients and 32 SLE patients by content of MDA estimated by reaction with thiobarbituric acid, NO (Boehringer Manheim kits, Germany), Zn (Unicam SP 190/191, Great Britain), activity of SOD and GPO (kits Ransod, Ransel; Randox, Great Britain). RA activity was evaluated by DAS index, SLE--by SLEDAI. RESULTS: MDA and NO concentrations were found elevated while SOD and GPO activity low in RA and SLE. The level of Zn was subnormal in RA. The activity of RA and SLE did not influence the above indices significantly. CONCLUSION: RA and SLE patients have high levels of prooxidants (MDA and NO) whereas their antioxidant enzymes (SOD and GPO) activity was low. This may promote oxidant stress.     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞G蛋白—cAMP信号机制的研究

目的 研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞（PBL）增殖反应与cAMP的关系以及G蛋白介导机制，方法 淋巴细胞增殖法，cAMP放兔测定及G蛋白功能分析。结果 SLE患者PBL增殖反应增强与其cAMP水平的降低有关，百日咳毒素（PT）可部分升高cAMP水平。结论 PT敏感的Gi蛋白-cAMP信号机制参与了SLE患者PBL的异常增殖反应。