胃癌外泌体MiR-221靶向PTEN促进肿瘤相关成纤维细胞的形成

目的:探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制.方法:提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo),qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达,将1...     

外泌体与肿瘤侵袭转移相关研究进展

 外泌体(又称外泌小体,exosomes)是一种能由绝大多数细胞释放的、具有脂质双分子层和丰富内容物的微囊泡结构,直径约30～100 nm。1981年科学家首次发现肿瘤源性外泌体,近10年来发现外泌体中不仅包含功能性蛋白,还有功能性核酸物质,这些蛋白质、核酸等对肿瘤侵袭转移具有促进作用,成为肿瘤相关研究的热点。外泌体以其独特的方式包裹蛋白质和核酸物质,稳定有效地进行细胞间信号的传递和交换。更好地了解外泌体促进肿瘤侵袭转移的机制,将有助于明确肿瘤侵袭转移的关键环节,进而有针对性地研发有效的防治策略,改善肿瘤患者预后。     

肿瘤相关成纤维细胞来源外泌体ciRS-7经miR-7/IGF1R轴促进胰腺癌细胞糖酵解

目的：探讨肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）来源外泌体ciRS-7对胰腺癌细胞糖酵解代谢的影响。方法：采用超速离心法提取CAFs外泌体,并通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测外泌体中ciRS-7的表达及胰腺癌细胞糖酵解关键酶mRNA的表达;构建含ciRS-7 野生及突变序列的荧光素酶检测报告质粒,在胰腺癌细胞中验证ciRS-7与miR-7的关系;蛋白质印迹（Western blot）法检测IGF1R/AKT蛋白表达。结果：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中表达上调（P ＜0.05）;CAFs释放的外泌体促进胰腺癌细胞糖酵解和增殖（P ＜0.05）;敲降胰腺癌相关成纤维细胞ciRS-7的表达,其外泌体可抑制胰腺癌细胞糖酵解相关基因的表达（P ＜0.05）;ciRS-7在胰腺癌细胞中经miR-7/IGF1R/AKT通路促进癌细胞糖酵解（P ＜0.05）。结论：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中高表达,下调ciRS-7具有抑制胰腺癌细胞糖酵解的作用。     

肿瘤相关成纤维细胞促肿瘤转移和放射抵抗的相关研究进展

肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的主要细胞类型,其生物学特性具有来源、表型和功能异质性,通过产生和分泌各种趋化因子和促进上皮间充质转化,从而促肿瘤生成、增殖、侵袭和转移。CAFs可介导肿瘤干细胞支持肿瘤产生及增殖,促使肿瘤细胞放疗抵抗。CAFs还可通过旁分泌外泌体,增强肿瘤的生长和能诱导放疗抵抗。大分割放疗应用于CAFs,可诱导CAFs表达衰老表型发生变化,促肿瘤能力下降,为临床肿瘤的放疗带来新契机。     

癌相关成纤维细胞来源的外泌体miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌的外泌体(exos) miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 选取2021年5月至12月于衡水市人民医院接受手术的卵巢癌患者的癌组织和邻近的非癌组织(5对)。从卵巢癌组织和相邻的正常组织中分离出CAFs和正常成纤维细胞(NFs)。采用Western blot评估NFs和CAFs中α-SMA和vimentin的蛋白表达,利用外泌体提取试剂盒从NFs和CAFs培养基中获得NFs-/CAFs-exos。通过透射电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot评估NFs-/CAFs-exos的形状、粒径以及表面marker表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测CFAs、CAFs-exos和SKOV3中miR-625-3p和癌细胞侵袭抑制因子(SCAI)的表达。Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验确定miR-625-3p和SCAI的相互作用。最后,通过功能挽救实验确定SCAI对SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 West...     

骨肉瘤细胞外泌体调控JAK2/STAT3信号通路影响成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化

目的 探讨骨肉瘤外泌体对肿瘤相关成纤维细胞转化的影响及机制.方法 提取并鉴定骨肉瘤细胞U2-OS、MG-63,人成骨细胞hFoB1.19外泌体,将PBS、hFoB1.19、U2-OS、MG-63外泌体与人肺成纤维细胞MRC-5共孵育,CCK8法检测MRC-5增殖能力,Transwell小室法检测MRC-5迁移和侵袭能力...     

乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制

目的 探讨乳腺癌细胞外泌体对肿瘤相关成纤维细胞激活的诱导作用及机制。方法 (1)将乳腺上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231、PBS分别与成纤维细胞MRC-5共培养;另取上述细胞和PBS,在与MRC-5共培养的同时加入外泌体摄取抑制剂GW4869。检测共培养后MRC-5细胞的迁移能力,细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、 IL-8、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)、CXC基序趋化因子配体12(CXCL12)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的mRNA表达水平。(2)提取MCF10A、MCF-7和MDA-MB-231细胞的外泌体并鉴定,然后将上述细胞外泌体、PBS分别与MRC-5细胞共培养。检测MRC-5细胞的迁移能力,细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、 TGF-β、 CXCL12、COL1A1、COL3A1、COL4A1的mRNA表达水平,以及细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果 (1)相较于与PBS或MCF10A细胞共培...     

肿瘤来源外泌体调控癌细胞转移机制的研究进展

外泌体在细胞生理、病理过程中发挥重要调控作用,为细胞之间的信号传递搭建了桥梁,而且与癌细胞的远处转移调控密切相关。本文综述了外泌体特征、合成、分泌、成分、功能、生物发生以及肿瘤来源外泌体对肿瘤微环境、肿瘤细胞信号传递以及肿瘤血管生成等各个环节的调控功能及机制,并分析了外泌体在恶性肿瘤转移诊断和治疗方面的潜在价值和应用前景。     

巨噬细胞外泌体lncRNA HULC对肝癌细胞迁移、侵袭和转移的影响及其机制

目的：探讨巨噬细胞外泌体长链非编码RNA (lncRNA)肝癌高表达转录本（HULC）在肝细胞癌（HCC）转移中的作用,并阐明其作用机制。方法：分离小鼠骨髓单核细胞,采用佛波酯诱导分化为骨髓源巨噬细胞（BMDM）,并用白细胞介素4 (IL-4)将BMDM诱导分化为M2巨噬细胞,即肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。差速离心法收集M2巨噬细胞外泌体（TAM-exos）。在TAM中分别转染lncRNA HULC-siRNA或NC质粒后提取各组TAM分泌的外泌体（lncRNA HULC-siRNA-exos或NC-exos）。将HepG2细胞按照实验目的分为对照组和TAM-exos组;NC-exos组和lncRNA HULCsiRNA-exos组;lncRNA HULC-siRNA-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos+SKL2001组。给予相应处理后,Transwell小室实验检测HepG2细胞的迁移和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RTqPCR)法检测HepG2细胞中lncRNAHULC表达水平,Westernblotting法检测HepG2细胞中Wnt3A、β-连环蛋白（...     

香烟诱导支气管上皮细胞外泌体释放miR-34a靶向CASP2促进肺成纤维细胞增殖

目的：研究香烟模拟物（cigarette smoke extract, CES）通过调控16 HBE支气管上皮细胞中外泌体miR-34a的表达，从而影响MRC-5肺成纤维细胞的增殖。方法：从市售香烟中制备CES，后将6HBE细胞经过CES处理，收集上清中的外泌体miR-34a用于MRC-5细胞培养；使用RT-PCR检测外泌体miR-34a的表达水平；MRC-5细胞增殖能力通过细胞计数试剂盒CCK-8测定；通过Western blot检测CASP2的表达，利用双荧光素酶验证miR-34a与CASP2基因的靶向结合。结果：透射电镜下，16 HBE上清液中的外泌体呈球状，粒径在100 nm左右；经过CES处理后，外泌体miR-34a的表达显著增加。进一步研究表明，通过CES诱导的外泌体miR-34a能够促进MRC-5细胞的增殖；miR-34a与CASP2存在靶向结合关系；miR-34a mimic显著抑制了CASP2的表达。结论：在CES诱导的16HBE细胞中，外泌体miR-34a通过与CASP2基因的靶向结合，对成纤维细胞增殖起着关键作用。     

lncRNA-ATB促进结肠癌细胞侵袭与转移的机制研究

研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA（LncRNA-ATB）对人结肠癌细胞侵袭和转移的影响及其潜在机制。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应检测LncRNA-ATB在结肠癌细胞系及人正常结肠上皮细胞中的表达、LncRNA-ATB shRNA 沉默效果和pcDNA3.1-LncRNA-ATB 的过表达效果,以及LncRNA-ATB 和白介素11（IL-11）mRNA 的表达;细胞侵袭和转移实验检测LncRNA-ATB 对结肠癌细胞侵袭和转移能力的影响;RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测LncRNA与IL-11 mRNA的结合能力;酶联免疫吸附法检测结肠癌细胞上清中IL-11蛋白的表达。结果LncRNA-ATB在结肠癌细胞系中的表达较人正常上皮细胞增高;LncRNA-ATB-shRNA可有效沉默HT29 细胞中LncRNA-ATB 的表达,pcDNA3.1-LncRNA-ATB 可有效上调SW620细胞中LncRNA-ATB的表达;LncRNA-ATB可促进结肠癌细胞的侵袭和转移能力。LncRNAATB可与IL-11 mRNA结合并调控其表达,增强其mRNA稳定性,促进其分泌。结论LncRNA-ATB可通过介导炎症因子IL-11 的分泌,在结肠癌细胞的侵袭和转移过程中发挥重要作用。     

NCOA5通过调控上皮间质转化促进卵巢癌细胞的侵袭转移能力

目的 研究核受体共激活因子5 (NCOA5)对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的作用及分子机制。方法 常规培养卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和正常卵巢上皮细胞系IOSE80,Western blot检测各细胞中NCOA5蛋白的表达水平。选取高表达NCOA5的卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780,各分为si-NC组、si-NCOA5组,并分别转染NC siRNA和NCOA5 siRNA。Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Western blot检测各组细胞上皮间质转（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达水平。结果 Western blot结果显示NCOA5在卵巢癌细胞中的表达显著上调(P<0.05)。在SKOV-3和A2780细胞中干扰NCOA5的表达均显著抑制卵巢癌细胞侵袭和转移能力 (P<0.05),并促进EMT相关蛋白E-cadherin的表达,抑制细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达(P<0.05)。结论 NCOA5促进卵巢癌侵袭转移能力,具有作为卵巢癌新型预后生物标志物和治疗分子靶点的潜力。     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

环状RNA circACTN4促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的研究

目的 探讨环状RNAcircACTN4(hsa_circ_0050900)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法 利用环状RNA芯片分析4对乳腺癌组织和癌旁组织的circRNA表达谱,并用实时荧光定量PCR验证circACTN4的相对表达水平;用circACTN4过表达质粒及对照质粒分别转染乳腺癌...     

miR-375通过抑制KLF4促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-375在前列腺癌(PCa)细胞中的表达、作用及机制.方法 培养细胞,转染质粒,Transwell分析PCa细胞的迁移和侵袭;qPCR分析miR-375、KLF4 mRNA在PCa细胞中的表达;Western blot分析KLF4蛋白在PCa细胞中的表达;生物信息学分析miR-375的靶基因,双荧光素酶实验验证.结果 miR-375在PCa中高表达,抑制miR-375的表达显著抑制PCa细胞的迁移和侵袭;通过生物信息学分析miR-375的潜在靶基因含有KLF4,双荧光素酶实验验证KLF4为miR-375的靶基因;KLF4在PCa细胞中表达显著降低,抑制miR-375的表达能够显著促进KLF4蛋白的表达;进一步研究表明抑制KLF4表达可逆转miR-375抑制物对PCa细胞的迁移侵袭的抑制作用.结论 miR-375抑制KLF4的表达促进PCa的迁移和侵袭,发挥癌基因的作用;其可以作为PCa的治疗靶点,为PCa的治疗提供新的方向.     

SHOX2体外增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭和干细胞特性

目的 探讨人矮小同源盒基因2（SHOX2）对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法 分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况,利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析,并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24,采用SHOX2 shRNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因,用Western blot检测SHOX2蛋白表达量,通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化,并用Western blot检测细胞上皮间充质转化（EMT）标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果 与癌旁膀胱组织相比,SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高（P=0.01）,在配对的膀胱癌组织中明显升高（P=0.001）,SHOX2基因表达与总生存率呈负相关（P=0.01）;GSEA显示SHOX2基因表达与EMT（P=0.002,P=0.03）及干细胞特性（P=0.006,P=0.008）呈正相关。在膀胱癌细胞 T24 中,两种不同的 SHOX2 shRNA 均能降低SHOX2的蛋白表达水平（shSHOX2-1,P=0.004;shSHOX2-2,P=0.03）,SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平（P=0.007）。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示,抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移（P<0.001,P=0.02）、侵袭（P=0.002,P=0.003）能力明显降低,而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移（P<0.001）、侵袭（P=0.004）能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示,抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P=0.007,P<0.001）;而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002,P<0.001）。此外,抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变,而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变;Western blot结果显示,抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.00）,Vimentin（P<0.001,P=0.01）、TβR- I（P=0.03,P=0.02）蛋白表达水平降低;而 SHOX2 过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin（P=0.04）、TβR-I（P=0.003）蛋白表达水平升高。结论 SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因：SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性,其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。     

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。     

LncRNA-ATB 在非小细胞肺癌细胞中的 作用及其机制探讨

目的 检测被转化因子激活的长链非编码RNA（LncRNA-ATB）在非小细胞肺癌（NSCLC） 细胞中的表达,及沉默LncRNA-ATB 对NSCLC 细胞侵袭和转移能力的影响。方法 采用实时荧光定量 聚合酶链反应（qRT-PCR）检测NSCLC 细胞和正常支气管上皮细胞（HBEC）中LncRNA-ATB 的表达 水平;采用细胞划痕实验和Transwell 实验检测沉默LncRNA-ATB 对NSCLC 细胞侵袭和转移的影响;采 用荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR 检测LncRNA-ATB 与microRNA-141（miR-141）的调控关系。 结果 LncRNA-ATB 在NSCLC 细胞中的表达高于HBEC 细胞（P <0.05）。沉默NSCLC 中LncRNAATB 表达后,细胞侵袭和转移能力降低。LncRNA-ATB 可竞争性结合miR-141,并下调其表达。结论 LncRNA-ATB 在NSCLC 中表达上调,并可通过竞争性结合miR-141,促进NSCLC 的侵袭和转移。     

miR-149促进鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间质转变

目的:探讨miR-149在鼻咽癌中的功能和机制.方法:Real-time PCR和2-△△Ct 计算方法验证miR-149在鼻咽癌细胞系中的表达,分别应用MTT实验、划痕实验和transwell迁移实验分析miR-149对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能的影响.Western印迹检测E-cadherin的变化.结果:相...