三氯乙烯对裸鼠皮肤中NO含量的影响及银杏叶提取物和维生素E的作用

目的 研究三氯乙烯(TCE)刺激对BALB/c裸鼠皮肤一氧化氮(NO)含量的影响,并观察银杏叶提取物(GbE)和维生素E(VE)的保护作用.方法 将132只BALB/c裸鼠随机分成空白对照组、溶剂对照组(橄榄油)、TCE组(20%TCE、40%TCE、80%TCE和100%TCE)、GbE保护组(0.1%GbE、1%GbE和10%GbE)和VE保护组(5%VE、10%VE和20%VE),每组11只,其中5只用于急性刺激试验,6只用于累积性刺激试验,观察皮肤刺激反应,并检测背部皮肤组织中NO的含量.结果 (1)各浓度TCE处理后裸鼠背部皮肤均产生不同程度的红斑和水肿,随着TCE浓度的升高以及染毒时间延长,皮肤的炎症反应程度逐渐加重.10%GbE组和20%VE组皮肤基本保持完好状态.(2)在急性刺激试验中,80%、100%TCE组NO含量分别为(69.895±9.605)和(77.273±9.290)μmol/mg蛋白.与空白对照组和溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各浓度GbE和VE预处理均能降低NO含量.与100%TCE组比较.差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).(3)在累积性刺激试验中,80%、100%TCE组NO含量分别为(60.362±9.817)和(68.027±9.354)μmol/mg蛋白,与空白对照和溶剂对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);1%GbE和10%GbE组以及10%VE和20%VE组NO含量明显降低,与100%TCE组比较.差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 TCE对BALB/c裸鼠皮肤产生刺激作用,并诱导皮肤中NO含量升高;GbE和VE对TCE所引起的皮肤损伤有一定的保护作用.     

三氯乙烯引起BALB/c裸鼠刺激性接触性皮炎作用机制的研究

目的 研究细胞凋亡在三氯乙烯(TCE)引起BALB/c裸鼠皮肤刺激性损伤中的作用.方法 将30只BALB/c裸鼠按随机的原则分成100%TCE、80%TCE、40%TCE、20%TCE、10%TCE、溶剂对照组(橄榄油),TCE背部皮肤染毒1d,应用原位末端标记法检测裸鼠皮肤组织的细胞凋亡,应用免疫组化S-P法检测皮肤上皮组织Caspase-3的表述.结果 免疫组化结果显示各染毒剂量组皮肤组织的凋亡指数和Caspase-3活力的差异有显著性,低剂量组凋亡指数和Caspase-3活力的综合评分分别为(1.84±0.74)和(1.16±0.38),高剂量组分别为(9.00±1.37)和(4.36±0.57),TCE浓度越高,细胞凋亡和Caspase-3的表达水平越高.结论 TCE染毒后短期可引起皮肤组织的细胞凋亡,细胞凋亡在皮肤组织损伤作用的机制中具有重要的意义.     

细胞凋亡在三氯乙烯致皮肤刺激性损伤中的作用

目的 研究细胞凋亡在三氯乙烯(TCE)引起BALB/c裸鼠皮肤损伤中的作用并探讨其机制.方法 将30只BALB/c裸鼠随机分为溶剂对照组、10%的TCE剂量组、20%TCE组、40%TCE组、80%TCE组、100%TCE组,应用TUNEL法检测TCE染毒的30只BALB/c裸鼠皮肤组织的细胞凋亡指数,应用免疫组化S-P法检测皮肤组织中easpase-8和cyt-c的表达.结果 电镜结果 显示高剂量组出现细胞调亡.40%、80%、100%TCE剂量组凋亡指数与对照组的差异有统计学意义(P<0.01);20%、40%、80%、100%TCE剂量组cyt c的表达水平分别为(2.60±0.54)、(3.42±0.56)、(5.81±1.30)、(6.00±0.70)明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),各组caspase-8表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 TCE引起的早期皮肤组织损伤与细胞凋亡有关,而细胞凋亡可能与线粒体损伤有关.     

三氯乙烯对裸鼠皮肤的刺激性损伤及维生素E的保护作用

目的研究有机溶剂三氯乙烯(TCE)对BALB/c裸鼠皮肤组织的氧化损伤以及维生素E的保护作用。方法将BALB/c裸鼠随机分成100%TCE、80%TCE、40%TCE、20%TCE、10%TCE、溶剂对照组(橄榄油)、阳性对照组(5%SLS)、空白组和5%、10%、20%维生素E保护组,背部皮肤染毒1 d,观察皮肤损伤反应,取染毒皮肤进行实验,比较各组MDA含量、SOD活性。结果各染毒剂量组皮肤组织的MDA含量、SOD活性的差异有统计学意义,TCE浓度越高,氧化应激水平越高,但维生素E保护组氧化应激水平不高。结论TCE可通过氧化应激对皮肤组织造成损伤,维生素E在一定浓度下对皮肤组织有保护作用。     

三氯乙烯急性刺激对BALB/c裸鼠皮肤组织病理学和细胞超微结构的影响

目的通过整体动物试验,研究三氯乙烯(TCE)急性刺激对皮肤组织病理学和细胞超微结构的影响,探讨TCE所致皮肤损害的发生机制。方法用体积百分比为20%、40%、80%和100%的TCE涂抹BALB/c裸鼠皮肤4 h,并用橄榄油和蒸馏水作溶剂和空白对照,处理结束时用生理盐水除去残留受试物,1 h后肉眼观察局部皮肤反应,处死动物取染毒部位皮肤,制成切片,光学显微镜和透射电子显微镜(TEM)进行组织病理学和细胞超微结构的观察。结果视觉观察发现TCE涂抹BALB/c裸鼠可引起皮肤红斑和水肿,高剂量组还出现起疱和表皮坏死。组织病理学检查发现TCE处理组动物皮肤出现不同程度的角化过度、细胞间水肿和以中性粒细胞为主的炎性细胞浸润,高剂量组还出现角化不全、胞裂外排和棘层松解等改变;TEM观察显示TCE刺激的皮肤角质形成细胞(KC)胞膜皱缩,胞浆水肿,细胞器拥挤且结构异常,线粒体发生不同程度肿胀甚至空泡样变,核内染色质浓缩靠边聚集等改变。结论结果表明20%TCE对BALB/c裸鼠皮肤具有刺激作用,可引起皮肤组织病理学和细胞超微结构的改变。 更多还原     

三氯乙烯引起裸鼠刺激性接触性皮炎细胞凋亡的信号传导途径

目的研究有机溶剂三氯乙烯（TCE）引起BALB／c裸鼠皮肤组织发生细胞凋亡的程度以及凋亡相关蛋白caspase-9与凋亡的关系。方法应用原位末端标记（TUNEL）法检测三氯乙烯染毒的50只BALB／c裸鼠皮肤组织的细胞凋亡,应用免疫组化S-P法检测皮肤组织中caspase-9的表达,并利用抗氧化剂维生素E研究三氯乙烯的损害作用。结果各染毒剂量组皮肤组织的凋亡指数和caspase-9活性的差异有统计学意义,TCE浓度越高,细胞凋亡和caspase-9的表达水平越高,维生素E保护组低剂量下无保护作用,高剂量组有保护作用。结论TCE引起的早期皮肤组织损伤与细胞凋亡有关,caspase-9在凋亡过程中发挥了重要的作用,以线粒体损伤为主要途径的细胞凋亡在三氯乙烯致皮肤组织损伤的过程中具有重要的意义。     

急性三氯异氰尿酸中毒1例报告

目的探讨工业有机溶剂三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）对体外培养人皮肤角质形成细胞（keratinocyte,KC）的凋亡诱导作用及抗氧化物质维生素E（vitamine E,Vit E）对其保护作用。方法TCE组以不同浓度TCE（0．125、0．50、2．0mmol／L）作用于体外培养的人KC;Vit E保护组分别采用不同浓度TCE和150μmoL／L Vit E共同作用于KC。利用透射电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡水平,并测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数（PI）。结果透射电子显微镜观察可见TCE组KC出现凋亡改变,而Vit E保护组细胞凋亡改变不明显;流式细胞仪定量检测可见TCE组细胞凋亡率较对照组高,而增殖指数降低;VitE保护组细胞凋亡率比TCE作用组低,而增殖指数升高,且有统计学意义。结论TCE对体外培养人KC具有凋亡诱导作用,VitE对其具有保护作用。     

银杏叶提取物对三氯乙烯所致BALB/c裸鼠皮肤氧化损伤的保护作用

目的研究银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对有机溶剂三氯乙烯（TCE）所致BALB／c裸鼠皮肤组织氧化损伤的保护作用。方法将BALB／c裸鼠随机分成空白对照组、橄榄油溶剂对照组、100％TCE处理组和0．1％、1％、10％GBE保护组,分别染毒1d和14d,取染毒背部皮肤进行MDA含量、SOD活性测定。结果用GBE保护后,皮肤组织中的MDA含量随GBE水平的增加呈明显下降趋势,皮肤组织匀浆中的SOD活性随GBE剂量的增加呈上升趋势。结论银杏叶提取物可能通过降低皮肤的氧化应激水平,对TCE所致的皮肤损伤发挥保护作用,从而有效保护三氯乙烯所致BALB／c裸鼠皮肤氧化损伤。     

三氯乙烯对人角质形成细胞NO合成及细胞活力的影响

目的 研究三氯乙烯(TCE)对人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成以及细胞活力的影响,探讨三氯乙烯引起皮肤细胞毒性的机制.方法 体外培养的人角质形成细胞以0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒4 h,另以诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)100 μmol/L预处理细胞30 min后再行TCE处理,分别于染毒后12 h、24 h、48 h、72 h时检测细胞上清中NO的含量,MTT法观察细胞活力.结果 低剂量的TCE不引起NO含量改变(与溶剂对照比较,P>0.05),0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒组NO含量分别在染毒后的24 h、48 h和72 h开始升高(P<0.05),对应的细胞活力则相应下降(P<0.05);AG预处理的0.5、1.0和2.0 mmol/L TCE染毒组在处理48 h后NO含量开始下降(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05),且回复到正常溶剂对照水平(P>0.05),其所对应的细胞活力逐步回升(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05).结论 TCE以剂量和时间依赖方式诱导人KC产生NO,而过量的NO可能介导了TCE的KC细胞毒性.     

三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究

目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.     

组织蛋白酶L切割补体C3介导三氯乙烯致敏小鼠肾小球内皮细胞损伤

目的:观察组织蛋白酶L（CTSL）阻断前后三氯乙烯（TCE）致敏小鼠肾小球中补体片段3（C3）和内皮细胞损伤相关蛋白的表达情况,探讨CTSL在TCE致敏小鼠肾脏损伤中的作用。方法:于2018年6月,将41只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组（ n=5）、溶剂对照组（ n=5）、TCE...     

三氯乙烯染毒小鼠骨髓微核试验观察

目的 检测三氯乙烯对受试动物致突变作用。方法 以不同剂量的三氯乙烯染毒实验动物,经口灌胃给予受试物,用30h给受试物法,即两次给受试物间隙24h,第2日给受试物后6h处死动物,制片,观察并计数嗜多染红细胞的微核率,并与阳性对照组和阴性对照组进行比较分析。结果 与阴性对照组相比,各剂量组的微核率差异无显著性(P>0.05)结论 三氯乙烯小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果阴性。     

三氯乙烯的遗传毒性实验研究

目的 检测三氯乙烯的遗传毒性作用。方法 以不同剂量的三氯乙烯用染毒柜对雌、雄昆明小鼠分别进行染毒，染毒后雌雄合笼进行自然交配．观测子代鼠的生长发育状况及脏器情况，并与空白对照组进行比较分析。结果 染毒组子鼠体重低于对照组，存在发育迟缓和缺肢畸形．结论 三氯乙烯可导致昆明小鼠子代发育迟缓和缺肢畸形，表明其具有遗传毒性作用。     

三氯乙烯染毒对豚鼠肝功能与凋亡基因表达的影响

目的探讨使用三氯乙烯(TCE)染毒对豚鼠肝功能和肝细胞凋亡基因(BAX、BAD、Bc1-2)表达的影响。方法将24只豚鼠随机分为3组,采用豚鼠最大值法(GPMT),设立TCE实验组、阴性对照组、阳性对照组,用皮内注射的方式分别注射TCE、橄榄油、2,4-二硝基氯苯(DNCB),实验结束后观察动物皮肤改变,应用自动生化分析仪检测动物肝功能指标,用荧光定量PCR检测肝细胞凋亡基因表达水平。结果 TCE实验组和阳性对照组动物出现明显皮肤损害。TCE实验组动物血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力明显高于阴性对照组(P0.05或P0.01)。肝细胞BAX、BAD的mRNA表达水平比阴性对照组显著升高,Bc1-2表达水平下降(P0.05或P0.01)。结论三氯乙烯可诱导豚鼠产生明显的皮肤变态反应,引起实验动物肝功能指标改变和肝细胞凋亡基因表达水平明显改变。     

低剂量三氯乙烯诱导下谷胱甘肽转移酶Ω-1的表达变化

目的分析低剂量三氯乙烯(TCE)诱导的细胞兴奋效应时,谷胱甘肽转移酶Ω-1(GSTO-1)的表达变化。方法利用前期的双向电泳和质谱结果,参照前期兴奋效应的剂量设计,提取染毒细胞的mRNA和总蛋白,进一步使用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白水平上验证GSTO-1的表达变化。结果 Western blotting分析发现,0.1mmol/LTCE剂量组能诱导GSTO-1蛋白表达是对照组的2倍,但随着剂量的增加,蛋白表达改变不明显(与对照组相比,P<0.05)。RT-PCR结果提示:低剂量TCE能诱导GSTO-1基因表达增加,随着剂量的增加,表达反而有所减少。结论低剂量TCE能诱导GSTO-1基因及蛋白表达增加。     

三氯乙烯致敏豚鼠体内循环免疫复合物的变化

目的检测循环免疫复合物(CIC)在三氯乙烯(TCE)致敏豚鼠体内含量的变化,探讨其可能的作用。方法选用体重250～300 g的白色雌性豚鼠,随机分成空白对照组、溶剂对照组、TCE处理组。根据豚鼠最大值试验(GPMT)方法处理豚鼠。分别在实验结束后24 h、72 h采血,检测血清中IgA/C3-CIC、IgG/C3-CIC和IgM/C3-CIC的浓度。结果 TCE处理组致敏率为65.38%;与溶剂对照组相比,TCE致敏组和TCE未致敏组的血清中IgA/C3-CIC、IgG/C3-CIC和IgM/C3-CIC的浓度均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TCE处理组豚鼠血清中循环免疫复合物含量降低,可能提示其体液免疫发生改变。     

IL-6和IL-8在三氯乙烯致敏豚鼠血清中的变化

目的通过豚鼠致敏最大值试验(guinea pig maximization test,GPMT)方法建立豚鼠致敏模型,检测并比较TCE致敏豚鼠与未致敏豚鼠血清中IL-6和IL-8的水平,探讨IL-6和IL-8在三氯乙烯(TCE)过敏性皮炎中的作用。方法将豚鼠随机分为空白对照组,溶剂(橄榄油)对照组,DNCB阳性对照组和TCE处理组。采用GPMT法建立豚鼠致敏模型。根据致敏结果及末次激发后采血的不同时点将TCE处理组分为TCE未致敏24h组,TCE致敏24h组,TCE未致敏72h组,TCE致敏72h组。用ELISA试剂盒测定血清中IL-6和IL-8的含量。结果DNCB组致敏率为100%,TCE组致敏率为62.1%。溶剂对照组与空白对照组差异均无统计学意义。与溶剂对照组相比,TCE未致敏24h组IL-6水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TCE未致敏72h组与TCE未致敏24h组相比,IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与溶剂对照组相比,TCE未致敏72组IL-8水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清中细胞因子IL-6和IL-8水平在TCE诱导的致敏组和未致敏组豚鼠间...     

应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2，4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹，25μl／耳，连续染毒3d，第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液（0．3ml／只）。第5天取小鼠耳部淋巴结称重，然后制成单细胞悬液，应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较，其中抗菌凝胶组、1％、5％三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义，10％三氯乙酸差异则存在统计学意义（P〈0．05）。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力，但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差，需要进一步优化实验方法。