Shh在鼠磨牙牙胚发育晚期的基因表达

目的：观察信号分子Sonic hedgehog(Shh)在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育晚期的基因表达，探讨其在成釉细胞、成牙本质细胞分化中的作用。方法：制备昆明小鼠磨牙牙胚发育晚期(E16．5—P1．5)标本，用原位杂交法分析Shh mRNA在牙胚中的表达和分布。结果：Shh mRNA在牙胚发育晚期的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达，在成牙本质细胞层表达较弱。结论：在牙胚发育晚期，Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径，参与了成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

Shh及其受体Ptc1、Ptc2在鼠帽状期磨牙的基因表达

目的 观察信号分子Sonic Hedgehog(Shh)及其受体Ptcl、Ptc2在小鼠下颌第一磨牙帽状期的基因表达，以探讨Shh信号路径在牙胚形态发育早期的作用。方法 制备昆明小鼠磨牙形态发育早期标本(E10．5～E15．5)，常规HE染色观察组织形态。免疫组化SP法对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)进行定位研究。原位杂交法分析Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 E14．5，内、外釉上皮，星网状层及牙乳头细胞PCNA阳性，大部分釉结细胞PCNA阴性，少量釉结细胞PCNA阳性。Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在内、外釉上皮、星网状层及釉结中均有表达。结论 在帽状期，信号分子Shh可能经自分泌或旁分泌途径作用于釉结以外的上皮和间充质，促进其增殖。     

Versican在ICR胎鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的表达

目的:检测Versican 核心蛋白及其mRNA在胎鼠磨牙牙胚发育早期的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用.方法:制备胎鼠磨牙牙胚各发育阶段标本,用免疫组化和原位杂交方法分析Versican核心蛋白及其mRNA在牙胚组织中的表达与分布.结果: Versican核心蛋白及其mRNA在胎鼠磨牙牙胚不同发育阶段表达各异,在细胞增生活跃区如增生的牙板、内外釉上皮细胞、颈环以及牙乳头等区域表达明显,而在已分化细胞如成牙本质细胞、成釉细胞等区域无表达,在星网状细胞所在区域也未检测到.结论: Versican核心蛋白及其 mRNA在牙胚发生过程中呈时间-空间特异性模式表达.它可能与上皮-间充质相互作用以及相关细胞的增殖和分化有关.     

用Western Blot和原位杂交法研究Shh在小鼠牙胚钟状晚期的表达

目的 从形态学和半定量分析两方面研究Shh(Sonic Hedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达，探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用。方法 取出生后1、2、3、5和7d(P1,P2,P3,P5,P7)的Bal b/c纯系小鼠牙胚，用Western印迹方法检测Shh的表达量；原位杂交检测Shh在出生后1d和3d天乳鼠牙胚中的表达部位与强度。结果 钟状晚期Shh特异表达于成釉细胞层，其强度随出生天数增加而减弱；随着成釉细胞发育成熟，44500Shh表达量逐渐降低，P1的吸光光度值为P7的5.5倍，P1，P2与P3可检测出活性Shh-N片段。结论 Shh在钟状晚期特异地表达于成釉细胞层，其表达量与成釉细胞的功能状态有关。     

转化生长因子β2 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中表达的研究

目的：探讨转化生长因子β2（transforminggrowthfactor-β2，TGFβ2）mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法：制备小鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交分析TGFβ2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果：TGFβ2mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间一空间特异性模式表达。结论：TGFβ2mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮一间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

Shh、Ptch1及Ptch2基因在小鼠磨牙发育过程中的表达

目的通过原位杂交的方法研究Sonic Hedgehog（Shh）、Patched1（Ptch1）及Patched2（Ptch2）在小鼠下颌磨牙发育过程中的表达，以探讨该信号通路在牙胚发育中的作用。方法制备小鼠下颌第一磨牙发育各期标本，原位杂交检测Shh、Ptch1及Ptch2的表达部位及强度。结果Shh在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期表达于成釉细胞；Ptch1在帽状期表达于牙囊、外釉上皮及星网状层，钟状早期表达于牙囊、外釉上皮及牙乳头，钟状晚期表达于成牙本质细胞及牙乳头；Ptch2在帽状期表达于釉结，钟状早期表达于内釉上皮，钟状晚期无表达。结论Shh信号系统在牙胚发育各期有各自的表达特点，提示可能在牙胚形态的调控，成釉细胞、成牙本质细胞分化的诱导中起重要作用。     

Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达研究

目的:检测Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达分布及变化规律,进一步揭示Pik3cb对牙形态发生的影响。方法:制备原位杂交探针,及小鼠牙胚发育标志时间点的牙胚冰冻切片,通过原位杂交方法进一步显示Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时期的表达情况。结果:蕾状期Pik3cb明显表达于牙板上皮,帽状期开始大量表达于釉上皮与牙乳头,进入钟状期表达部位趋于集中,尤以内釉上皮及后续新形成硬组织周围的高柱状成釉细胞处最为明显。结论:Pik3cb在牙源性上皮及成釉细胞表达,并可能通过PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路与成釉细胞瘤行为相关。     

上游刺激因子1在小鼠牙齿发育过程中表达的原位杂交研究

目的：检测小鼠牙齿发育中上游刺激因子1mRNA的表达及时空分布模式。方法：制备E13,16,19,P1,5,8,11,21d小鼠第一磨牙石蜡切片,用我们前期实验制备的USF1cDNA探针,原位杂交方法检测USF1mRNA的表达和分布。结果：原位杂交染色从钟状晚期小鼠牙胚中开始检测到阳性信号,持续至P11d,阳性信号主要定位于成牙本质细胞与成釉细胞;而蕾状期,帽状期,钟状期牙胚中未检测到阳性信号,并且在牙齿萌出后（P21d）,牙齿中USF1mRNA阳性信号再次消失。结论：牙胚中有USF1mRNA表达,主要位于分泌期的成牙本质细胞和成釉细胞,表达模式具有显著的时空特异性。     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

转化生长因子β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中表达的研究

目的 探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）mRNA在鼠磨牙形态发生过程中的表达及其意义。方法 制备鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交法分析TGF-β1mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 TGF-β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中以时间和空间上特异的模式来表达。TGF-β1 mRNA在成釉细胞层和牙乳头细胞中很丰富,TGF-β1在成牙本质细胞和成釉细胞层的表达随这些细胞的分化程度而增高。结论 TGF-β1在牙形成过程中通过旁分泌和自分泌机制发挥重要作用。     

阻遏蛋白β-TrCP在小鼠牙胚不同发育时期的表达与意义

目的观察Sonic hedgehog（shh）信号转导通路的阻遏蛋白β- TrCP在小鼠牙胚发育不同时期的表达情况，探讨β- TrCP在晚期牙胚发育中的作用与意义。方法取不同发育时期的鼠胚、乳鼠鼠头标本，用标记生物素链亲和素LsAB法观察β- TrCP蛋白在不同发育时期牙胚组织的表达情况。结果β- TrCP在胚胎10.5、13.5、14.5、16.5、18.5 d的小鼠牙胚上皮层与间充质层，以及出生后0、3、6 d的小鼠成釉细胞与成牙本质细胞胞浆呈特征性表达。结论β- TrCP在正常发育小鼠牙胚及成釉细胞与成牙本质细胞特征性表达，提示β- TrCP在牙胚发育中维持/限定shh信号通路的正常信号转导具有重要意义。     

c-myc基因在牙齿发育中对细胞凋亡的调控研究

观察牙齿发育过程中ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ转录和蛋白表达凋亡的发生情况,探讨ｃ－ｍｙｃ基因在牙齿发育中对细胞凋亡的可能作用。方法利用原位末端标记法、原位杂交及免疫组织化学技术分别对ＳＤ大鼠牙胚发育不同时期ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ、蛋白的表达及细胞凋亡情况进行检测。结果在牙齿发育的各期成釉器及间充质细胞中均有ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ,     

牙齿发育中c-myc mRNA转录及蛋白表达的意义

目的：观察牙胚发育过程中ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ转录及蛋白表达的变化,探讨ｃ－ｍｙｃ基因在牙齿发育中的作用。方法：利用原位杂交技术、免疫组织化学技术检测ＳＤ大鼠牙胚发育不同ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ转录及蛋白的表达情况。结果：ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ及蛋白的表达在蕾状和帽状期明显,钟状期减弱,而牙体组织形成期成釉细胞、成本本质细胞及间充质牙乳头细胞表达又增强。ｃ－ｍｙｃ蛋白表达和分布与ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ转录基     

Temporal and spatial expression of Pax9 and Sonic hedgehog during development of normal mouse palates and cleft palates in TGF-beta3 null embryos

Transforming growth factor-beta (TGF-beta3) gene disruption causes cleft secondary palate. Pax9 and Sonic hedgehog (Shh) genes are involved in the patterning of vertebrate embryonic tissues, including the facial skeleton. We investigated the expression of Pax9 and Shh genes during normal mouse palate development and in the developing cleft palates of TGF-beta3 null embryos. Whole mount in situ hybridization was conducted with use of Pax9 and Shh riboprobes for TGF-beta3 null, heterozygous and wild type mice at E12.5-E16.5. Histological analysis was processed by section in situ hybridization. In the wild type, Pax9 and Shh were expressed in the palate between E12.5-E15.5. Shh expression in the secondary palate was restricted to the rugae and the soft palate. Pax9 expression was predominantly in the palatal medial edge between E14.5 and E15.5. These patterns suggest that Shh and Pax9 may have different functions during palate development. In TGF-beta3 null mice, both genes expression patterns in the palate were different to those in wild type mice. In TGF-beta3 null mice, Pax9 expression was much reduced in the palatal medial edge at the critical time of palatal fusion (E14.5-E15.5). Shh expression in the palates of TGF-beta3 null mice was reduced throughout E12.5-E15.5, whilst Shh expression in heterozygous did not appear down regulated compared with the wild type. These results indicate that Pax9 and Shh expression are altered when the TGF-beta3 gene is deleted and suggest that Pax9 and Shh may be involved in the TGF-beta3 regulation of normal palatal fusion.     

尖鼠牙齿发育中Shh与Bmp4基因的表达

目的观察生长因子Shh与Bmp4在尖鼠前磨牙乳恒牙发育中的基因表达情况。方法尖鼠胚胎于4％多聚甲醛中固定、脱水、包埋，制作8μm的石蜡切片，HE染色。通过美国国立图书馆Genbank数据库设计引物，克隆尖鼠Shh和Bmp4基因。制作^35S放射性同位素标记探针进行原位杂交。结果观察到尖鼠上颌前磨牙不同时期的发育情况，E16天可见尖鼠乳前磨牙，之后恒牙开始发育，乳牙逐渐降解，至E21幼鼠出生时乳牙已完全降解，恒牙发育至钟状晚期。克隆出尖鼠Shh基因片段长210bp，Bmp4，基因片段长626bp。它们在尖鼠乳前磨牙及恒前磨牙中均有表达，与小白鼠牙齿发育过程中的表达相似。结论生长因子Shh和Bmp4对牙齿发育而言是非常重要的两个因子，其作用相对保守。