釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达

目的　观察釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达 ,为进一步研究釉蛋白的生物学功能提供基础。方法　采用原位杂交方法 ,检测出生后 1、3、7、10、14d龄大鼠第一磨牙牙胚中釉蛋白mRNA的表达。结果　大鼠出生后 1～ 10d在成釉细胞和成牙本质细胞中均检测到釉蛋白mRNA的表达。在成釉细胞中的表达随细胞的分化、基质分泌具有规律性 ,1d已有微弱表达 ,3d表达增强 ,7d达到最强 ,10d减弱 ,14d为阴性。釉蛋白mRNA在成牙本质细胞中的表达 1d很微弱 ,14d阴性 ,3～ 10d为持续的中等强度的表达。结论　釉蛋白在成釉细胞中的转录表达从前成釉细胞一直持续到成熟期 ,至牙冠硬组织发育完全时中止。成牙本质细胞也表达釉蛋白基因 ,提示釉蛋白可能参与早期罩牙本质的形成     

Shh及其受体Ptc1、Ptc2在鼠帽状期磨牙的基因表达

目的 观察信号分子Sonic Hedgehog(Shh)及其受体Ptcl、Ptc2在小鼠下颌第一磨牙帽状期的基因表达，以探讨Shh信号路径在牙胚形态发育早期的作用。方法 制备昆明小鼠磨牙形态发育早期标本(E10．5～E15．5)，常规HE染色观察组织形态。免疫组化SP法对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)进行定位研究。原位杂交法分析Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 E14．5，内、外釉上皮，星网状层及牙乳头细胞PCNA阳性，大部分釉结细胞PCNA阴性，少量釉结细胞PCNA阳性。Shh、Ptcl、Ptc2 mRNA在内、外釉上皮、星网状层及釉结中均有表达。结论 在帽状期，信号分子Shh可能经自分泌或旁分泌途径作用于釉结以外的上皮和间充质，促进其增殖。     

转录因子Msx2在犬恒牙牙根发育过程中的表达

目的：观察转录因子Msx2在犬恒牙牙根发育过程中的表达及时空变化，初步探讨其对牙根形态形成的调控作用。方法：本研究采用原位杂交技术，对犬恒牙牙根不同发育时期Msx2mRNA的表达进行观察。结果：在牙根发育启动期、生长期及成熟期，转录因子Msx2具有不同的时空表达方式。结论：Msx2作为牙齿发育过程中重要的转录因子，可能参与牙根形态发育的调控作用。     

牙源性钙化囊肿的血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原及PCNA的免疫组织化学研究

为了解牙源钙化囊肿的囊肿型和肿瘤型内血管和细胞增殖活性之间的关系，本研究应用血管内皮细胞的标志性抗原VIII因子及增殖细胞核抗原（PCNA），对11例牙源性钙化囊肿进行了免疫组织化学研究，并以6例造釉细胞癌作对照。结果显示：囊肿型牙源性钙化囊肿的部分标本中，囊壁上皮下有VIII因子染色阳性的密集的新生小血管，囊壁上皮中PCNA染色阳性细胞也较多，显示囊壁上皮增殖活动较强的组织依，部分囊壁上皮下血管较少，PCNA染色阳性细胞也较少，显示囊壁上皮增殖较慢，相对稳定的组织学像。而在肿瘤型牙源性钙化囊肿中，肿瘤间质中VIII因子杂色阳性血管密度明显增加，并且血管管腔增大，PCNA染色见肿瘤的上皮团片中阳性细胞也明显增多，反映了肿瘤增殖活跃，生长较快。表明肿瘤内血管的增生与肿瘤的增殖有密切关系。     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.     

p21WAF1、细胞周期蛋白E mRNA及p27KIP1蛋白在成釉细胞瘤中的表达

目的研究细胞周期蛋白E(cyclin E)、周期素依赖激酶抑制因子p21WAF1 mRNA和p27KIP1蛋白在人成釉细胞瘤(AB)中的表达,探讨其临床生物学意义.方法用原位杂交法分别检测了54例AB中cyclin E和 p21WAF1 mRNA,免疫组化SP法检测p27KIP1蛋白的表达.结果 cyclin E mRNA在AB浆核中有较强的表达,阳性率为66.7%(36/54),伴随AB的复发与恶变,cyclin E mRNA阳性率有所增加,原发AB、复发AB、恶性AB组间差异有统计学意义(P<0.05).牙源性角化囊肿(OKC)中cyclin E阳性率为50.0%(8/16).p21WAF1 mRNA在AB浆核中表达强度减弱且有较多的丢失,阳性率为22.6%(12/53),伴随AB复发与恶变阳性率表达下降.OKC p21WAF1阳性率为37.5%(6/16).p27KIP1蛋白在AB细胞核中大部分丢失,AB阳性率为16.7%(9/54),OKC 中p27KIP1阳性率为6.3%(1/16).AB中,cyclin E与p21WAF1 、p27KIP1均呈中度负相关(rk=-0.440, rk=-0.519, P=0.001).结论 AB的发生、浸润与细胞的增殖活性相关,且受cyclin E的高表达及p21WAF1 、 p27KIP1的低表达等多种因子共同调控.     

尖鼠牙齿发育中Shh与Bmp4基因的表达

目的观察生长因子Shh与Bmp4在尖鼠前磨牙乳恒牙发育中的基因表达情况。方法尖鼠胚胎于4％多聚甲醛中固定、脱水、包埋，制作8μm的石蜡切片，HE染色。通过美国国立图书馆Genbank数据库设计引物，克隆尖鼠Shh和Bmp4基因。制作^35S放射性同位素标记探针进行原位杂交。结果观察到尖鼠上颌前磨牙不同时期的发育情况，E16天可见尖鼠乳前磨牙，之后恒牙开始发育，乳牙逐渐降解，至E21幼鼠出生时乳牙已完全降解，恒牙发育至钟状晚期。克隆出尖鼠Shh基因片段长210bp，Bmp4，基因片段长626bp。它们在尖鼠乳前磨牙及恒前磨牙中均有表达，与小白鼠牙齿发育过程中的表达相似。结论生长因子Shh和Bmp4对牙齿发育而言是非常重要的两个因子，其作用相对保守。     

同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达

目的 观察同源盒基因Msx—1、Msx-2和Dlx-2 mRNA在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达。方法 取胎龄E11～E18和新生P1～P3小鼠的头或下颌，制备5μm连续冠状切片。体外转录合成地高辛标记的Msx—1、Msx-2和Dlx-2 RNA探针。原位杂交后观察Msx—1、Msx—2和Dlx—2在小鼠下颌第一磨牙中的表达。结果 在牙胚发育过程中，Msx—1转录信号始终只在间质细胞中观察到，在上皮细胞中呈阴性。Msx-2和Dlx-2在牙源性上皮和间质中均表达，在磨牙发育起始期二者表达相似，但在随后的牙胚发育过程中，它们出现不同的表达特征。结论 牙胚发育过程中，Msx—1、Msx-2和Dlx-2有不同的表达特征，可能共同参与调控上皮和间质问的相互作用。     

大鼠牙胚组织发育过程中釉原蛋白mRNA的表达

目的：观察釉原蛋白（Ａｍ）基因在大鼠牙胚组织发育过程中的表达。方法：采用原位杂交的方法,检测大鼠孕期１７、１８、１９ｄ和出生后１、３、５、７、９ｄ牙胚中成釉细胞ＡｍｍＲＮＡ的表达。结果：从出生后１ｄ至出生后９ｄ大鼠第一磨牙牙胚中均检测到ＡｍｍＲＮＡ的表达,其中出生后第５ｄ表达最高,成釉细胞分泌完成后Ａｍ的表达下降。成牙本质细胞在发育的任何时期均未见到Ａｍ的表达。结论：釉原蛋白基因的转录只发生在牙胚发育的早期,前成釉细胞极化阶段和成釉细胞分泌阶段;发育成熟的釉基质中没有釉原蛋白。成牙本质细胞不表达釉原蛋白基因。     

转化生长因子β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中表达的研究

目的 探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）mRNA在鼠磨牙形态发生过程中的表达及其意义。方法 制备鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交法分析TGF-β1mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 TGF-β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中以时间和空间上特异的模式来表达。TGF-β1 mRNA在成釉细胞层和牙乳头细胞中很丰富,TGF-β1在成牙本质细胞和成釉细胞层的表达随这些细胞的分化程度而增高。结论 TGF-β1在牙形成过程中通过旁分泌和自分泌机制发挥重要作用。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙胚表达的原位杂交研究

目的 :探讨牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)mRNA在牙齿发育过程中的作用。方法 :采用原位杂交技术 ,观测小鼠牙齿发育各阶段标本中DSPPmRNA的表达。结果 :DSPP在成牙本质细胞的表达始于钟状中期 ,并贯穿以后的各个时期 ;此阶段 ,它还在前成釉细胞及成釉细胞中具有一过性表达。结论 :DSPP在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性 ;它可能在牙齿的形成中具有重要作用     

转化生长因子β2 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中表达的研究

目的：探讨转化生长因子β2（transforminggrowthfactor-β2，TGFβ2）mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法：制备小鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交分析TGFβ2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果：TGFβ2mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间一空间特异性模式表达。结论：TGFβ2mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮一间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

CSF-1, RANKL and OPG regulate osteoclastogenesis during murine tooth eruption

During tooth eruption, osteoclast-mediated bone resorption predominates in alveolar bone along the occlusal surface rather than in bone basal to the tooth. CSF-1, RANKL and OPG, regulatory molecules essential for osteoclastogenesis, are expressed during eruption. However, it is unclear if these cytokines exhibit an expression pattern that correlates with sites of osteoclastogenesis in vivo. To address this issue, mouse mandibles, isolated from 1 to 14 days postnatal, were analysed for osteoclast activity using tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining as well as colony-stimulating factor-1 (CSF-1), receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) mRNA expression using in situ hybridisation. Results showed that CSF-1, RANKL and OPG are expressed in a distinct temporal and spatial manner. In the occlusal region, osteoclast activity was maximal at day 5 and correlated with a relative high expression of CSF-1 and RANKL compared to OPG. In basal bone at this time point, osteoclast activity decreased despite persistent CSF-1 expression and was associated with increased expression of OPG compared to RANKL. By day 8, osteoclastogenesis declined and correlated with upregulation of OPG at the occlusal and basal regions, with this effect continuing throughout eruption. These findings suggest that the spatiotemporal pattern and relative abundance of CSF-1, RANKL and OPG during eruption are key determinants of site-specific osteoclast activity in bone surrounding the tooth. Targeting these cytokines to specific regions in alveolar bone may provide a mechanism for regulating osteoclastogenesis in dental disorders associated with altered tooth eruption.     

用Western Blot和原位杂交法研究Shh在小鼠牙胚钟状晚期的表达

目的 从形态学和半定量分析两方面研究Shh(Sonic Hedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达，探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用。方法 取出生后1、2、3、5和7d(P1,P2,P3,P5,P7)的Bal b/c纯系小鼠牙胚，用Western印迹方法检测Shh的表达量；原位杂交检测Shh在出生后1d和3d天乳鼠牙胚中的表达部位与强度。结果 钟状晚期Shh特异表达于成釉细胞层，其强度随出生天数增加而减弱；随着成釉细胞发育成熟，44500Shh表达量逐渐降低，P1的吸光光度值为P7的5.5倍，P1，P2与P3可检测出活性Shh-N片段。结论 Shh在钟状晚期特异地表达于成釉细胞层，其表达量与成釉细胞的功能状态有关。