再生障碍性贫血患儿骨髓造血干/祖细胞缺陷与细胞免疫功能异常的关系

多数获得性再生障碍性贫血(再障)是由T淋巴细胞介导的以造血系统为靶器官的自身免疫性疾病。有关再障患儿造血干／祖细胞(HSC／HPC)质和量的改变及其与骨髓细胞免疫功能状态的关系尚未见报道。我们对26例特发性再障患儿的骨髓进行了HSC／HPC表型、HPC集落培养、淋巴细胞表型及骨髓干扰素γ(IFN-γ)测定,评价细胞免疫功能异常在特发性再障患儿骨髓衰竭中的作用。     

造血干祖细胞和细胞因子的检测及其临床意义

造血干细胞(HSC)是造血细胞的始祖细胞，具有自我更新的能力和向多系或单系造血祖细胞(HPC)定向分化的功能。HSC数量在正常机体内一生保持恒定，其生存依赖于周围的HPC、巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、内皮细胞等基质细胞及其分泌的众多细胞因子所构成的微环境。由此可见．     

外周血造血干/祖细胞动员与采集时动态快速监测造血祖细胞的意义

为了获得高效的外周血干/祖细胞采集,探索一种简便、快速的外周血干/祖细胞监测方法，采用Sysmex XE-2100血细胞分析仪的幼稚细胞信号（IMI）检测通道识别和计数外周血造血祖细胞（HPC）。对25例行异基因外周血造血干细胞移植动员的供和11例自体外周血干细胞动员的患的外周血造血干/祖细胞进行了动态观察。于动员过程中取外周血进行HPC，CD34^ 细胞和CFU-GM的检测，对采集物也进行上述检测。结果表明：在外周血标本中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM二间均呈良好的正相关性。所有检测病例外周血CD34^ 细胞与HPC同时上升，同时达高峰。供的峰值出现在动员的第5天，快速升高晚于白细胞。而患外周血干/祖细胞的快速升高早于白细胞。采集物中HPC与CD34^ 细胞和CFU-GM呈正相关性。采集当日外周血中HPC和CD34^ 细胞计数与采集所得CD34^ 细胞数量亦具有良好的线性相关。结论：造血祖细胞的监测是一种快速、简便又经济的监测外周血干细胞采集时机和预测成功采集的可靠指标。     

Sca-1+造血干/祖细胞重建致死剂量辐射小鼠造血功能的作用

背景:近年来,造血干细胞移植在国内外已广泛开展,移植的造血干细胞能否有效重建造血成为造血干细胞移植领域的研究热点问题之一.目的:观察Sca-1+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,Sca-1+HSC/HPC)对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用.方法:雌性C57BL/6受体鼠给予致死剂量60Coγ射线照射后分2组,对照组:输注无菌PBS;移植组:移植免疫磁性分选法分离纯化的同系雄性C57BL/6小鼠Sca-1+HSC/HPC;检测受体鼠生存时间;外周血白细胞、红细胞比容、血小板的变化;脾湿质量及脾集落数;PCR检测Y染色体(Sry基因)表达确定受体小鼠重建造血的细胞来源.结果与结论:移植组受体鼠30 d存活率、白细胞、红细胞比容、血小板、脾湿质量及脾集落数均明显高于对照组(P < 0.05);Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建造血的细胞来源于雄性供体.提示Sca-1+HSC/HPC移植后能重建造血衰竭小鼠造血功能.     

采用多功能流式细胞术分析分选造血干细胞和髓系定向分化祖细胞

目的 探讨富集纯化造血干细胞(HSC)和髓系定向分化祖细胞的新实验方案.方法 根据造血干细胞和定向分化祖细胞在发育过程中表达某些特异性分化抗原的特性,通过免疫磁珠分选技术结合四色和六色流式细胞术分析14只健康小鼠的骨髓造血干细胞、造血祖细胞及定向分化祖细胞系列的表达,并对其进行分选,以进一步通过集落细胞培养和传代试验对分选后细胞的活性进行检测.结果 经上述实验方案分析,14只健康小鼠骨髓造血祖细胞(HPC)的表达率约为HSC的10倍;但其牛成活性远不如造血干细胞,共同髓系祖细胞(CMP)的传代能力仅为HSC的1/2,且次级分化的粒系单核系祖细胞(GMP)和红系巨核系祖细胞(MEP)的生成活性更弱,其传代次数为零.结论 通过多色流式细胞术实验方案可以分析纯化HSC和髓系定向分化祖细胞的表达,并精确计数HSC和祖细胞.     

Sca-1^＋造血干/祖细胞重建致死剂量辐射小鼠造血功能的作用

背景：近年来,造血干细胞移植在国内外已广泛开展,移植的造血干细胞能否有效重建造血成为造血干细胞移植领域的研究热点问题之一。目的：观察Sca-1＋造血干/祖细胞（hematopoietic stem/progenitor cell,Sca-1＋HSC/HPC）对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。方法：雌性C57BL/6受体鼠给予致死剂量60Coγ射线照射后分2组,对照组：输注无菌PBS;移植组：移植免疫磁性分选法分离纯化的同系雄性C57BL/6小鼠Sca-1＋HSC/HPC;检测受体鼠生存时间;外周血白细胞、红细胞比容、血小板的变化;脾湿质量及脾集落数;PCR检测Y染色体（Sry基因）表达确定受体小鼠重建造血的细胞来源。结果与结论：移植组受体鼠30d存活率、白细胞、红细胞比容、血小板、脾湿质量及脾集落数均明显高于对照组（P〈0.05）;Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建造血的细胞来源于雄性供体。提示Sca-1＋HSC/HPC移植后能重建造血衰竭小鼠造血功能。     

三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的SIRT6/NF-κB信号轴

背景：SIRT6/NF-κB信号轴是细胞衰老的调控通路,但其在造血干/祖细胞（hematopoietic stem and progenitor cel ,HSC/HPC）衰老中的作用尚不清楚。目的：探讨SIRT6/NF-κB信号通路在三丁基过氧化氢体外诱导造血干/祖细胞衰老中的作用。方法：免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC。用100μmol/L三丁基过氧化氢体外诱导Sca-1＋HSC/HPC构建体外衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期、造血祖细胞混合集落培养确定三丁基过氧化氢诱导 Sca-1＋HSC/HPC 衰老的生物学作用。荧光定量 PCR 及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果与结论：与对照组比较,衰老组Sca-1＋ HSC/HPC β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数、G0/G1期细胞比例增高,形成造血祖细胞混合集落数量减少;SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。结果表明三丁基过氧化氢可能通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥诱导Sca-1＋HSC/HPC衰老作用。     

原代骨髓基质细胞层对逆转录病毒载体介导的造血干/祖细胞基因转导的支持效应

为探讨建立原代骨髓基质细胞层的方法并观察基质接触对造血干／祖细胞(HSC／HPC)基因转移的影响，采用Ficoll—Hypaque分离成人骨髓单个核细胞(MNC)，用基质细胞培养液培养，传代4次以建立原代骨髓基质细胞层。将经细胞因子预刺激的造血干／祖细胞接种到经辐照处理的基质细胞层上，进行逆转录病毒介导的多药耐药基因(mdr1)转导，以半固体集落培养和聚合酶锭反应法(PCR)检测长春新碱(VCR)抗性集落数和mdr1基因扩增片段以测定转导效率。结果表明：原代骨髓基质细胞培养传代4—6周形成混合贴壁细胞层，主要由成纤维细胞组成。集落法和PCR法检测显示基质接触能提高骨髓造血干／祖细胞基因转导效率2.1—3.3倍，对逆转录病毒介导的造血干／祖细胞基因转导具有明显的支持效应。结论：基质细胞接触联合细胞因子作用可提高逆转录病毒介导的造血干／祖细胞基因转导效率。     

骨髓基质细胞对血小板生成的影响

骨髓基质细胞(BMSCs)是起源于胚胎发育的间充质干细胞(MSCs),是骨髓细胞中除去造血干细胞(非黏附细胞) 之外的黏附细胞部分,对造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖、分化、发育、成熟、迁移、定居、释放、凋亡等生理活动具有特殊作用.现综述BMSCs对特殊的一类血液细胞--血小板生成的影响.     

趋化因子GROβ动员造血干/祖细胞的研究进展

粒细胞集落刺激因子是造血干/祖细胞动员的金标准,但仍有部分患者或供体动员失败.趋化因子GROβ为快速的造血干/祖细胞动员剂,能动员较多的早期造血干细胞,其动员的移植物不仅能快速造血重建,还能进一步提高归巢和植入.本文就趋化因子GROβ对造血干/祖细胞的动员作用、动员特点及动员机制进行综述.     

人参总皂甙协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞扩增与分化的作用

为探讨人参总皂甙(total saponins of panax ginseng,TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)扩增与分化的作用,收集人脐血、骨髓细胞并采用StemsepTM干细胞分选系统分离纯化CD34+HSC/HPC,用不同剂量TSPG加入不同组合的造血生长因子进行培养,检测细胞总数、CD34+细胞和CD33+细胞比例及集落形成细胞总数(CFC)、粒系祖细胞(CFU-GM)数量变化.结果显示10-70μg/ml TSPG均可不同程度地提高脐血细胞总数、CFC数和CD34+细胞数,50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFC数和CD34+细胞数分别增至(2470.5±79.96)×103、(53.96±4.29)×100%和(21.86±3.09)×100%;20μg/ml是液体培养诱导骨髓CD34+细胞向粒系分化的最佳浓度,可使细胞总数、CFU-GM和CD33+细胞分别增至(133.2±9.03)×103、(26.78±1.91)×100%和(16.98±1.73)×100%;甲基纤维素半固体培养检测显示,TSPG(10-50μg/ml)均能提高CD34+细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG 20μg/ml效果最为明显.结论合适剂量的TSPG能够促进CD34+造血干/祖细胞体外扩增与定向诱导分化.     

再生障碍性贫血患者骨髓造血调控机制的研究进展

再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA)以全血细胞减少和骨髓再生不良为病理特征,发病机制复杂。骨髓造血调控机制紊乱在AA发病机制中有重要作用,AA患者在造血干祖细胞特性、造血干祖细胞凋亡、造血调控因子、免疫等方面发生改变,研究AA患者骨髓造血调控机制异常可为AA的诊断和治疗提供理论依据。     

Notch信号通路对VEGF促小鼠胚胎干细胞分化成为造血干/祖细胞的作用

目的:探讨Notch信号通路对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为造血干细胞/祖细胞(HSC/HPC)的影响。方法:小鼠胚胎干细胞体外增殖形成拟胚体;拟胚体体外诱导分化,分为EB组、实验对照组、VEGF、DAPT组、VEGF-DAPT组。流式细胞术检测HSC/HPC表型CD117+CD34+Sca1+; RT-PCR检测相关基因表达。结果:VEGF组诱导形成的HSC/HPC数目较对照组及EB组明显增多(P 0.05),提示VEGF促进ESC分化为HSC/HPC;DAPT组诱导分化的HSC/HPC数目较对照组及EB组增多(P 0.05),提示Notch信号通路阻断剂DAPT促进ESC分化为HSC/HPC;VEGF-DAPT组HSC/HPC较VEGF组HSC/HPC和DAPT组增多(P 0.05),提示DAPT、VEGF对促进ESC分化为HSC/HPC有协同作用。结论:Notch信号通路在VEGF促ESC分化为HSC/HP中起抑制作用。     

P21、P27在造血干/祖细胞增殖调控中的作用

P2 1、P2 7是细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂 (CKIs)Cip/Kip两大家族的重要成员 ,主要通过抑制CyclinE CDK2和CyclinD CDK4 /CDK6的活性而发挥对细胞周期的负向调节作用。最近研究表明 ,P2 1、P2 7可分别调控造血干 /祖细胞的增殖水平 ,呈现特异的分化阶段依赖性。这为体内外造血干 /祖细胞的扩增提供了可操纵的靶分子 ,对治疗性干细胞的应用及基因修饰具有重要意义。我们就这方面的进展作一综述。1　造血干 /祖细胞增殖的生物学特征　造血干细胞 (HSC)移植已被用于治疗遗传性疾病和日益增多的恶性疾病中 ,但HSC相对静息的惰性状态…     

当前造血干细胞研究面临的挑战

在新千年到来的时刻 ,综观一下造血干 /祖细胞基础和临床研究当前面临的众多难题 ,会有益于探讨我国实验和临床血液学如何赶上国际先进水平的。造血干细胞究竟是CD3 4阳性还是阴性 ?近年来国际文献中有些报告发现CD34/Lin阴性细胞具有长期重建造血的活性 ,引起了广泛的注意。从发育生物学观点来看 ,CD34 Lin- 细胞来自CD34- Lin- 的论点是合理可信的。已定向发育为造血系统的干细胞 (即造血干细胞 )都来自尚未定向的胚胎中胚层干细胞 ,所以CD34 Lin- 细胞起源于CD34- Lin- 细胞。当干细胞分化为各系的祖细胞 ,出现髓 /淋巴各系的专一…     

流式细胞术干/祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用

目的建立流式细胞术干/祖细胞分类计数方法,探讨其在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用价值。方法以抗CD45-PC5/CD34-PE/CD38-FITC建立三色流式细胞术造血干/祖细胞分类计数方法,对患者自体干细胞移植动员效果、单采物质量及回输单采细胞进行定量检测。结果动员后样品检测分析发现,87.5%的患者动员效果较好,单个核细胞含量均在70.0%以上;CD34+细胞总数大于4×106/kg体质量者占90.0%。干细胞冻存样品检测分析发现,CD34+细胞数量冻存后存在一定衰减,但衰减量小于10.0%,经t检验证实冻存前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术干/祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中得到有效应用,单采细胞标本的定量检测为临床判断动员后单采时机、单采细胞质量、单采获得CD43+CD38-造血干细胞量、实际回输患者的CD43+CD38-造血干细胞量均提供了直接的科学数据。     

造血干细胞工程及应用领域

造血干细胞(HSC)是最原始的造血细胞，它既能自我更新，又能产生所有造血细胞和某些非造血细胞。HSC起源于胚胎干细胞，它又是一种成体组织干细胞。近年来，造血干、祖细胞的体外扩增和诱导分化技术不断完善，并已广泛有效地应用于干细胞移植、基因治疗等领域。     

人脐血移植的动物模型

脐血(CB)作为造血干/祖细胞(HSC/HPC)的又一个重要来源已是医学工作者的共识,脐血的体外研究日趋完善,其应用也逐步走向临床。然而脐血移植的许多问题,如脐血数量的有限性等仍有待深入研究。近年来发现重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠可作为脐血移植的动物模型,对造血干细胞的再定居动力学及回巢(homing)潜能等方面的体内研究,可进一步了解脐血的生物学特性、移植机理与疗效,从而为脐血的开发和应用提供重要的理论基础。     

影响人造血干/祖细胞在SCID鼠体内植入、增殖和分化的因素

重症联合免疫缺陷（SCID）鼠由于其特殊的免疫学特点目前已经成为研究人造血干／祖细胞（HSC／HPC）发育分化比较理想的实验动物，为体内研究人HSC／HPC活性及骨髓移植构建一些疾病模型奠定了方法学基础，具有极其重要的应用价值。但该模型造血及免疫重建水平较低，一些关键技术问题尚有待于进一步研究。从HSC／HPC移植于SCID鼠到HSC／HPC在SCID鼠体内增殖和分化是一个复杂的过程，影响这一过程的因素很多，其中大多数作用机制尚未阐明。我们就影响人HSC／HPC在SCID鼠体内植入、增殖和分化的因素作一综述。     

脂肪源性干细胞对造血干/祖细胞支持作用的研究进展

机体的正常造血依赖造血干/祖细胞(HSPC)的增殖分化,以及支持其生长发育、构成骨髓造血微环境基质细胞的间充质干细胞(MSC)的作用.目前常用的促进造血的MSC主要来源于骨髓,但从骨髓中获取MSC受到了数量、取材及分离纯化的限制.与骨髓相比,脂肪组织分布广泛、来源丰富、取材简单,并且含有数量更多的多能干细胞群,如脂肪干...