miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。     

MiR-199a对缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力及凋亡的影响

目的:探讨miR-199a对缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力及凋亡的影响。方法:在体外培养大鼠脑皮层神经元细胞,采用缺氧/复氧的方式处理细胞建立细胞损伤模型并记作Model组;将正常培养的细胞作为对照(Con)组。分别将空载体、miR-199a mimic转染至大鼠脑皮层神经元细胞,建立缺氧/复氧细胞损伤模型,分别记作Model+NC组或Model+miR-199a mimic组。将miR199a mimic转染至大鼠脑皮层神经元细胞后加入PI3K-AKT信号通路抑制剂LY294002处理,随后建立缺氧/复氧细胞损伤模型,记作Model+miR-199a mimic+LY294002组。采用反转录PCR法检测miR-199a的表达量,应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,采用MTT法检测细胞活力,采用蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3、pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达量。结果:与Con组比较,Model组miR-199a的表达水平、细胞活力、S期细胞比例及pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著降低,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与Model+NC组比较,Model+miR-199a mimic组细胞活力、S期细胞比例及pro-caspase3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著提高,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与Model+miR-199a mimic组比较,Model+miR-199a mimic+LY294002组细胞活力、S期细胞比例及procaspase3蛋白表达水平均显著降低,G_(0)~G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-199a过表达可改善缺氧/复氧诱导的大鼠脑皮层神经元细胞活力并抑制细胞凋亡,从而减轻细胞损伤;这些生物学效应可能是通过激活PI3K-AKT信号通路产生的。     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7....     

MiR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控及其机制研究

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-543模拟物(mimic)及阴性对照mimic转染至K562细胞后,应用CCK8方法检测miR-543对K562细胞增殖的影响,荧光素酶报告法分析miR-543对Wnt基因的靶向关系,流式细胞术检测miR-543对白血病细胞凋亡影响,Western blot方法检测Wnt、β-catenin、BCL-2、C-Myc及BAX表达水平。结果:慢性髓系白血病患者的miR-543水平显著低于健康对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的miR-543的表达水平显著高于空白对照组(P 0.05);miR-543 mimic组的Wnt基因mRNA水平显著低于空白对照组(P 0.05)。miR-543 mimic可降低Wnt野生质粒的荧光素酶表达水平(P 0.05);miR-543 mimic对Wnt突变质粒的荧光素酶表达水平无抑制作用(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞增殖水平显著低于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞凋亡水平显著高于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P 0. 05)。miR-543 mimic组细胞的Wnt、β-catenin、BCL-2及C-Myc蛋白水平均显著低于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05);miR-543 mimic组的BAX蛋白水平高于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P 0.05)。结论:miR-543可靶向Wnt蛋白,抑制Wnt信号通路活性,从而抑制白血病细胞的增殖能力,提高细胞凋亡水平。     

miR-1299通过靶向调控CCND1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响

目的 探讨miR-1299通过靶向调控细胞周期蛋白D1(CCND1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、转移和凋亡的影响。方法 回顾性收集2021年1月至2022年1月入青岛大学附属青岛市中心医院胸外科行原发性NSCLC手术的患者29例,取癌组织和癌旁正常肺组织,培养人正常肺上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1,RT-qPCR法检测组织和细胞中miR-1299和CCND1的表达,取生长良好的H1299细胞,将其分为对照组(转染miR-control)、miR-1299 NC组(转染miR-1299 NC)、miR-1299 mimic组(转染miR-1299 mimic)、miR-1299 inhibitor组(转染miR-1299 inhibitor)、PCDNA组(转染pcDNA3.1-NC)、PCDNA-CCND1组(转染pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)、miR-1299 mimic+PCDNA组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-NC)和miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1...     

miR-204-5p靶向TRIB3对脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-204-5p对脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法 采用LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)建立细胞损伤模型，实验分组：NC组、LPS组、LPS+miR-con组、LPS+miR-204-5p组、LPS+si-con组、LPS+si-TRIB3组、LPS+miR-204-5p+pcDNA组、LPS+miR-204-5p+pcDNA-TRIB3组；MTT法检测细胞活力；qRT-PCR、Western blot检测miR-204-5p、TRIB3表达；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA检测TNF-α、IL-6水平；双荧光素酶实验检测miR-204-5p与TRIB3的靶向关系。结果 与NC组比较，LPS组细胞活力、miR-204-5p表达量降低(1.00±0.10比0.43±0.04),细胞凋亡率、TRIB3 mRNA(1.00±0.09 vs 2.13±0.18)和蛋白(0.40±0.04 vs 0.83±0.08)水平、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);过表达miR-204-5p或敲低TRIB3可升高细胞活力，...     

Rac1在HL-60细胞中的表达及其对细胞周期和凋亡的影响

本研究旨在观察Rac1在急性白血病细胞系HL-60中mRNA的表达水平及其对细胞周期和凋亡的影响。采用半定量RT-PCR方法检测HL-60细胞及正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中Rac1mRNA表达水平;用脂质体FuGENE6法将Rac1特异性反义寡核苷酸(ASODN)转入HL-60细胞,应用MTT试验检测细胞存活率;采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化、Wright-Giemsa、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)及AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测凋亡细胞。结果表明:Rac1在HL-60细胞系中相对含量(Rac1/GAPDH)为0.84±0.13,在正常PBMNC中相对含量为0.26±0.1(P<0.01),Rac1在HL-60细胞中的表达明显高于PBMNC。与正义链(SODN)组相比,经2.0g/L Rac1特异性ASODN作用48小时后,HL-60细胞存活率降低[(73.7±5.0)%vs(93.2±3.0)%,P<0.01],G1期细胞百分数升高[(52.1±6.8)%vs(31.6±4.7)%,(P<0.05)],AnnexinⅤ阳性率升高[(19.2±2.1)%vs(4.1±1.7)%,(P<0.01)],凋亡小体明显增加。结论:白血病细胞系HL-60中高表达的Rac1可能促进白血病细胞HL-60的过度增殖并抑制其凋亡。     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

微小RNA-340对肝细胞癌细胞转移和侵袭力的影响

目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定MMP-2和MMP-9蛋白水平,用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测核转录因子κB1(NF-κB1)蛋白水平。结果与HepG2相比miR-340在HCC细胞系中表达水平降低,高表达miR-340的HepG2细胞、MHCC-97L细胞侵袭能力下降。高表达miR-340的HepG2细胞和MHCC-97L细胞E-钙黏蛋白mRNA表达上调,N-钙黏蛋白mRNA水平下调,波形蛋白mRNA水平下调。miR-340使HepG2细胞和MHCC-97L细胞中MMP-2和MMP-9的表达下降;与HCC细胞系比较,高表达miR-340的HepG2细胞NF-κB1表达量下降40%、MHCC-97L细胞下降66%,差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学分析预示NF-κB1是miR-340的潜在靶基因且萤光素酶报告分析又进一步证实了miR-340可以直接作用于NF-κB1的3′端非编码区。结论 miR-340在抑制细胞迁移、侵袭和上皮细胞间质转化中起着重要的作用,提示miR-340表达水平降低是HCC发生的重要环节,基于miR-340的治疗方法可用于HCC诊治。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

miR-451在白血病细胞株K562/A02多药耐药中的作用及相关机制

目的：检测miR-451、ABCB1、ABCC2在白血病药物敏感细胞株K562及其耐药株K562/A02中的差异表达，探讨miR-451与ABCB1、ABCC2表达的调控关系及miR-451参与白血病耐药的相关机制。方法：CCK-8法检测K562/A02及K562细胞的耐药性，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-451在K562及K562/A02细胞中的差异表达，将miR-451模拟物(mimic)及其阴性对照(miR-NC)、miR-451抑制剂(inhibitor)及其阴性对照(miR-inNC)分别转染K562及K562/A02细胞，应用q RT-PCR、Western blot检测ABCB1、ABCC2在K562、K562/A02细胞及转染后各组细胞中的mRNA、蛋白表达水平。结果：K562/A02细胞对阿霉素的耐药是其亲本细胞系K562的177倍。与K562细胞相比，K562/A02细胞中miR-451明显高表达(P<0.001),ABCB1、ABCC2在K562/A02中的mRNA及蛋白表达水平均显著高于K562细胞(P<0.001)。K562/A0...     

长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病（AML）细胞凋亡的影响及其相关机制。方法：采用q RT-PCR检测AML患者外周血样本及AML细胞系HL-60、KG-1中LINC01268和miR-217的表达水平;将HL-60细胞分为pc DNA3.1-NC、pc DNA3.1-LINC01268、si-NC、si-LINC01268、miR-NC、miR-217 mimics、si-LINC01268+inhibitorNC和si-LINC01268+miR-217 inhibitor共8组。采用q RT-PCR检测转染后细胞中LINC01268和miR-217 mRNA的表达;双荧光素酶报告实验检测LINC01268与miR-217的靶向关系;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡;Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白p21、Bcl-2、Bax、caspase-3及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果：LINC01268在AML患者外周血样本、AML细胞系HL-60和KG-1中表达量均明显升高（P<0.05）,miR-...     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

【目的】探讨miR-202在膀胱癌细胞中的表达水平及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。【方法】实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱细胞中miR-202的相对表达水平;转染技术将miR-202和miR-NC质粒转染至UM-UC-3细胞中,并设置为miR-202组和NC组。细胞增殖实验、细胞侵袭实验和凋亡实验分别检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况,比较两组裸鼠移植瘤体积和重量,Western blot实验检测两组细胞中PIK3CA蛋白的表达情况。【结果】膀胱癌细胞中miR-202的相对表达水平分别低于正常膀胱上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-202组与NC组相比细胞的OD值、迁移和发生侵袭的细胞数降低,凋亡率增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。miR-202组移植瘤的体积和重量均低于NC组,差异有统计学意义。miR-202组PIK3CA蛋白的表达低于NC组,差异有统计学意义。【结论】miR-202可能通过抑制PIK3CA蛋白的表达从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。     

MiRNA-218对PAG1的调控及其对卵巢癌干细胞的影响

目的:研究miR-218在卵巢癌干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs)中的表达,并探讨其对PAG1的调控作用和对OCSCs的影响及作用机制。方法:收集卵巢癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代卵巢癌细胞,用流式细胞仪筛选出CD133~+表型的OCSCs。采用Western印迹法检测干性特异相关基因Nanog和Sox2蛋白的表达。qRT-PCR检测miR-218在OCSCs中的表达。miR-218 mimic转染OCSCs,分为miR-218mimic组和miR-218NC组,MTS检测各组OCSCs增殖;软琼脂克隆实验检测各组OCSCs肿瘤球形成能力的影响;miR-218过表达慢病毒质粒及对照质粒vector感染OCSCs,经1.0μg/mL嘌呤霉素筛选稳定过表达miR-218或vector的OCSCs细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察miR-218对OCSCs体内成瘤能力的影响。Targetscan7.2预测软件及双荧光素酶报道基因试验,分析miR-218对PAG1基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中PAG1mRNA的表达。Western印迹法检测miR-218mimic组和miR-218NC组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达。结果:Nanog和Sox2蛋白在CD133~+表型OCSCs中的表达显著高于CD133-表型OCSCs中的表达;miR-218在CD133~+表型OCSCs中的表达显著低于CD133-表型OCSCs中的表达(P0.05)。miR-218mimic组OCSCs增殖减慢,OCSCs肿瘤球形成能力下降。OCSCs_(miR-218)裸鼠成瘤体积显著低于OCSCsvector组(P0.05)。TargetScan7.2软件预测和双荧光素酶报道基因试验证实PAG1为miR-218的靶基因,miR-218 mimic组PAG1 mRNA的表达减少。Western印迹法检测miR-218 mimic组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达显著减少。结论:MiR-218在OCSCs中低表达,可能通过靶向下调PAG1,抑制pSrc和pAKT蛋白的表达影响OCSCs的干性。     

下调miR-125b逆转白血病细胞对多柔比星的耐药作用

目的:探讨下调miR-125b是否能逆转人白血病多柔比星耐药细胞株的耐药性,为白血病耐药患者寻找新的治疗方法。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测白血病非耐药细胞株HL-60和K562及对应多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达情况;采用电穿孔转染法上调或者抑制HL-60/DOX细胞中miR-125b的表达水平,随后采用CCK-8法检测不同浓度多柔比星处理后细胞的存活情况,绘制细胞增殖抑制率曲线并计算半数抑制浓度(IC50)。结果:与非耐药细胞株HL-60和K562相比,耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达水平明显升高。miR-125b在HL-60/DOX细胞中的表达水平比HL-60细胞中高15倍,其在K562/DOX细胞中的表达水平比K562细胞中高5倍。在耐药细胞系HL-60/DOX中过表达或抑制miR-125b的表达发现,转染miR-125b模拟物的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著降低(P 0. 01),而转染miR-125b抑制剂的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著升高(P 0. 01)。结论:miR-125b在白血病多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中高表达。下调miR-125b的表达可逆转HL-60/DOX细胞对多柔比星的耐药性。     

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X失活特异转录物（lncRNA XIST）通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系；划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力；RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA和蛋白表达。结果 在卵巢癌组织和细胞系中，lncRNA XIST高表达，miR-340-5p低表达（P <0.05）。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达（P ...     

miR-212在老年前列腺癌患者中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭、转移的影响机制研究

目的探讨miR-212在老年前列腺癌患者中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭、转移的影响机制。方法选择2017年10月至2019年10月于厦门市第五医院行手术确诊的前列腺癌患者60例,经病理档案室收集其癌组织标本及配对癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR检测前列腺组织miR-212的相对表达水平。将购自上海北诺生物科技有限公司的前列腺癌PC-3细胞24株随机分为空白组(不作任何处理)、对照组(转染空白miR-212对照)、miR-212组(转染miR-212 mimics),每组各8株;检测并比较3组转染后前列腺癌细胞增殖率、侵袭能力和转移率;采用荧光素酶报告实验验证miR-212下游靶基因。结果miR-212在前列腺癌组织中呈低表达,在癌旁正常组织中呈高表达,前列腺癌组织中的miR-212相对表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05)。转染miR-212后,PC-3细胞增殖、侵袭、转移均受到抑制。miR-212组PC-3细胞增殖率、侵袭能力、转移率低于对照组、空白组(P<0.05);空白组和对照组比较,PC-3细胞增殖率、侵袭能力、转移率差异无统计学意义(P>0.05)。miR-212组与上皮-间质转化(EMT)-WT(野生型)共转染后细胞荧光活性显著低于对照组与EMT-WT共转染后细胞荧光活性(P<0.05);空白组与对照组比较,与EMT-WT共转染后细胞荧光活性差异无统计学意义(P>0.05)。空白组、对照组、miR-212组与EMT-MUT(突变型)共转染后细胞荧光活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-212在前列腺癌组织中呈低表达,上调miR-212的相对表达水平可抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭、转移能力,其作用与EMT密切相关。     

miR-422a通过ATG12调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的研究

目的探讨miR-422a调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的作用和机制及其与靶基因ATG12的关系。方法采用瞬时转染miR-422a模拟物和抑制物分别上调或下调骨肉瘤细胞的miR-422a表达水平,采用MTT法检测各时间点骨肉瘤细胞的增殖能力,瞬时转染miR-422a后采用流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测转染miR-422a对靶基因mRNA的影响。结果RT-qPCR结果显示,miR-422a在肿瘤组织及细胞中均高表达,ATG12在肿瘤组织及细胞中均低表达。MTT法结果显示,miR-422a-mimic组吸光度值明显升高,miR-422a-inhibitor组吸光度值明显降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,miR-422a-inhibitor组细胞凋亡率高于空白组与NC组(P<0.0001)。Western blot检测结果显示,miR-422a-mimic组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ蛋白量明显高于空白组与NC组,LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ明显高于空白组与NC组(P<0.05)。结论miR-422a/ATG12信号轴可能调控骨肉瘤细胞的自噬及凋亡。